一、標(biāo)本采集
（一) 操作方法
1．將患者擬采血部位放平，扎以止血帶，選好靜脈穿刺點，以皮點為中心用2．5 ％～3 ％碘酊從內(nèi)向外周擦拭，待干后再以同法用75 ％乙醇脫碘。消毒范圍不得過小。
2．以無菌手續(xù)由靜脈取血5 ml ，立即注入適當(dāng)?shù)囊后w增菌培養(yǎng)基內(nèi)， 迅速輕搖，使充分混合，以防止凝固。
（二) 注意事項
1．血液標(biāo)本應(yīng)在病人發(fā)熱1 ～2 天內(nèi)或發(fā)熱高峰采集培養(yǎng)為宜，此時陽性率較高。
2．培養(yǎng)基與醫(yī)生招聘網(wǎng)血液的比例為10∶1 。
3．培養(yǎng)一般細菌用普通肉湯或酚紅葡萄糖肉湯，培養(yǎng)對營養(yǎng)要求較高的細菌用肝浸液或胰胨肉湯等。
4．采血和接種時應(yīng)嚴(yán)格注意無菌操作，避免污染雜菌。
5．磺胺和抗生素可影響細菌檢出的結(jié)果。故在采集標(biāo)本時應(yīng)力爭在抗菌藥物治療之前。如果病人曾服用磺胺類藥物，應(yīng)在每100 ml 培養(yǎng)基內(nèi)加對氨苯甲酸5 mg ， 以防止磺胺類藥物對細菌的抑制作用。如果病人已用青霉素治療，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入青霉素酶100 U／50 ml （青霉素酶不耐熱，應(yīng)在臨用時加入)。若病人已用其他抗生素治療時，可用硫酸鎂肉湯增菌。
6．標(biāo)本的采取應(yīng)以提高陽性檢出率為目的。
二、檢驗程序
血液標(biāo)本的細菌學(xué)檢驗程序見下圖。
三、檢驗方法及報告方式
（一) 一般細菌的檢驗
1．標(biāo)本接種于肉湯培養(yǎng)基后，立即置35 ±1 ℃溫箱內(nèi)孵育，每天取出一次觀察有無細菌生長，應(yīng)特別注意觀察肉湯內(nèi)有無混濁、沉淀、菌膜、色素、血液變色、指示劑變色等現(xiàn)象，并記錄之。如有細菌生長，肉湯可呈現(xiàn)各種不同的生長現(xiàn)象，若發(fā)生混濁，大多可疑為革蘭陰性桿菌；若均勻混濁有綠色熒光，則可疑為綠膿桿菌；上面澄清，下面有沉淀，可疑為鏈球菌；若見自下而上的溶血現(xiàn)象，可疑為溶血性鏈球菌；若呈現(xiàn)肉凍樣凝固現(xiàn)象，疑為葡萄球菌；若表面有灰白菌膜，疑為枯草桿菌或類白喉桿菌。
2．當(dāng)疑有細菌生長時，應(yīng)以無菌操作挑取培養(yǎng)物涂片進行革蘭染色鏡檢。一旦見有細菌生長，并能排除污染，應(yīng)及時轉(zhuǎn)種于血平板或其他培養(yǎng)基進行藥物敏感試驗或分離培養(yǎng)。根據(jù)菌落特征及菌體染色鏡檢形態(tài)，可得出初步印象，并需繼續(xù)培養(yǎng)，按各種屬細菌加以鑒定。報告：“有X X X 菌生長”。
3．如不見細菌生長，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至第7 天，取出后接種于血平板，經(jīng)培養(yǎng)仍無細菌生長時，可報告為：“經(jīng)7 天培養(yǎng)無細菌生長。” 對于亞急性心內(nèi)膜炎病人標(biāo)本，應(yīng)培養(yǎng)一個月，才能作出結(jié)論。
（二)布氏桿菌的檢驗
將可疑為布氏桿菌的血液標(biāo)本接種于肝浸液2 支，分別置于10 ％二氧化碳環(huán)境中及普通環(huán)境中35 ±1 ℃ 培養(yǎng)，每天觀察一次，每隔5 天移種一次血平板。培養(yǎng)1 周后，若肝浸液有此菌生長時，出現(xiàn)肉眼可見的輕度混濁，久之可出現(xiàn)菌膜并有粘稠性沉淀物。此時應(yīng)作涂片染色鏡檢，并立即移種于2 份肝浸液平板或血平板，分別置于10 ％二氧化碳及普通環(huán)境下培養(yǎng)。如菌落及涂片染色鏡檢形態(tài)典型，再作布氏桿菌血清凝集試驗，如為陽性，可報告為：“培養(yǎng)出布氏桿菌”。必要時，可將分離的菌株進一步鑒定及分型。若培養(yǎng)3 ～4 周后仍無細菌生長者，則可報告：“經(jīng)X 周培養(yǎng)無細菌生長。”
（三)腦膜炎奈瑟菌培養(yǎng)
首先將胰胨肉湯或含2g／L 葡萄糖的肝浸液（或肉浸液) 預(yù)溫至35 ℃，然后再將病人的血液標(biāo)本注入培養(yǎng)基瓶中，搖勻后培養(yǎng)于10 ％ 二氧化碳環(huán)境中， 每天觀察一次。如疑有細菌生長，再移種于經(jīng)35 ℃預(yù)溫的巧克力色血平板或血平板進行劃線分離，然后于35 ±1 ℃、5 ％～10 ％二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)18 ～48 小時， 如發(fā)現(xiàn)平板上有光滑、濕潤、透明、粘性的菌落且中等大小，經(jīng)革蘭染色為陰性雙球菌者， 可做出初步報告：“有腦膜炎奈瑟菌生長。” 同時挑取菌落接種于預(yù)溫的巧克力色或血平板同上法行純培養(yǎng)。經(jīng)涂片染色鏡檢確定后，作糖發(fā)酵、氧化酶、自凝現(xiàn)象，血清玻片凝集等試驗，以與其他奈瑟菌區(qū)別。如各項檢查均符合此菌者，必要時再用分群血清作玻片凝集進行分群作出最后鑒定。
（四) 傷寒沙門菌及其它沙門菌培養(yǎng)
將病人的血液接種于葡萄糖膽汁肉湯或膽鹽肉湯中，經(jīng)增菌培養(yǎng)后，如疑有細菌生長，再移種到選擇性平板（如SS 瓊脂平板，中國藍平板等) 上作劃線分離， 置35 ±1 ℃培養(yǎng)16 ～24 小時后，挑取可疑菌落接種于雙糖或三糖鐵高層斜面培養(yǎng)基， 觀察其生化反應(yīng)。根據(jù)生化反應(yīng)，可初步區(qū)別細菌類屬。再與醫(yī)學(xué)招聘多價診斷血清作凝集試驗，即可作出初檢報告。必要時，用純培養(yǎng)物進一步作生化反應(yīng)和選用適當(dāng)?shù)囊蜃友遄髂囼灒右澡b定，即可確診。若無細菌生長，培養(yǎng)至第7 天即可報告：“培養(yǎng)7 天無細菌生長”。
（五) 厭氧菌培養(yǎng)
將血液標(biāo)本接種于肝浸湯培養(yǎng)基中，然后置厭氧環(huán)境中培養(yǎng)。如有細菌生長，移種兩個血平板或K V A 血平板（或LK V 、苯乙醇血平板) 上，分別作厭氧培養(yǎng)和普通培養(yǎng)，經(jīng)35 ±1 ℃48 ～72 小時培養(yǎng)后，觀察結(jié)果。如在普通環(huán)境中培養(yǎng)不生長，而在厭氧環(huán)境中生長，觀察其生長情況，并作涂片進行革蘭染色鏡檢。根據(jù)形態(tài)，得出初步印象，然后對分離出的厭氧菌進行最后鑒定。并作出報告：“厭氧培養(yǎng)有X X 菌生長。” 如僅在普通環(huán)境中生長或者兩者均生長，則按一般細菌進行鑒定。如無細菌生長，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)7天，仍無細菌生長時，即可報告：“厭氧培養(yǎng)7 天無細菌生長”。
四、臨床意義及常見病原菌
目前，血液培養(yǎng)仍然是菌血癥和敗血癥的細菌學(xué)檢驗的基本方法，并且廣泛地應(yīng)用于傷寒、副傷寒及其他革蘭陰性桿菌和各種化膿性細菌引起的敗血癥的診斷。
菌血癥系病原菌只一時性或間斷地由局部進入血流，但并不在血中繁殖者，無血液受染的明顯臨床征象。常可發(fā)生在病灶感染或牙齒感染，尤以拔牙、扁桃體切除及脊髓炎手術(shù)后等多見。
敗血癥是指病原菌侵入血流，并在其中大量生長繁殖，造成身體的嚴(yán)重損害，引起顯著的全身癥狀（如不規(guī)則高熱與全身中毒等癥狀)。例如化膿鏈球菌和葡萄球菌所致的手術(shù)后敗血癥，�？稍斐赡程幗M織器官的敗血性栓塞而形成局部感染性病變。敗血癥有時也可見于繼發(fā)于組織器官感染，當(dāng)機體抵抗力減弱時，雖然微小甚至隱蔽的病灶亦能引起敗血癥。從理論意義看任何病原菌都可引起敗血癥。在臨床實踐中，首先與地區(qū)性流行病、原發(fā)病灶和細菌的侵入途徑有關(guān)。例如癤、膿腫、癰和胃腸道粘膜炎及尿路感染等。其次當(dāng)機體免疫功能低下、廣譜抗生素和激素的應(yīng)用及燒傷等都可有不同的菌類的感染。一般說，最常見者有葡萄球菌、肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌、鏈球菌、傷寒和副傷寒沙門菌等。大腸桿菌、糞產(chǎn)堿桿菌、肺炎克雷伯菌及粘球菌屬等其它革蘭陰性桿菌，以及炭疽桿菌和厭氧桿菌亦可見到。另外，綠膿桿菌和真菌性敗血癥日益增加，這與抗生素廣泛應(yīng)用有關(guān)，其原發(fā)病變多見于皮膚感染（包括燒傷)、尿路感染、消化系感染、血液病及麻疹肺炎等。
目前L 型菌感染敗血癥亦有報告，主要是由于使用抑制菌細胞壁合成的抗菌藥物（青霉素G 、氨基芐青霉素、苯唑青霉素、先鋒霉素、萬古霉素和環(huán)絲霉素等)治療過程中，失去細胞壁的菌體繼續(xù)繁殖感染所致。
血培養(yǎng)中常見病原菌見下表。
