一、生物學(xué)特性
葡萄球菌是革蘭陽(yáng)性球菌，大小0．5～1．5μm ，呈單、雙、四聯(lián)、短鏈狀或無(wú)規(guī)則葡萄狀排列。無(wú)動(dòng)力、無(wú)芽胞。其代謝方式是呼吸兼發(fā)酵。觸酶陽(yáng)性。通常氧化酶陰性，還原硝酸鹽，能被溶葡萄球菌素溶菌，但不被溶菌酶溶菌。能利用多種碳水化合物，產(chǎn)酸。產(chǎn)生胞外酶，如葡萄球菌血漿凝固酶。多數(shù)菌為兼性厭氧菌，有氧條件下生長(zhǎng)好，最適生長(zhǎng)溫度35 ℃～40 ℃，最適p H7．0～7．5 。金黃色葡萄球菌某些少見(jiàn)菌株，亦需要CO2 或血紅素、維生素K等物質(zhì)。葡萄球菌細(xì)胞壁缺陷型菌株適宜在高滲環(huán)境中生長(zhǎng)。DNA 中G＋C含量：30～39 mol％。模式菌：金黃色葡萄球菌。
二、微生物學(xué)檢驗(yàn)
1．檢驗(yàn)程序
2．標(biāo)本采集
由于該屬細(xì)菌對(duì)干燥和溫度抵抗力強(qiáng)，且易從感染部位獲取標(biāo)本，故按常規(guī)方法采取標(biāo)本。然而該屬細(xì)菌廣泛分布在人體皮膚和粘膜， 采取時(shí)避免病灶周圍正常菌群污染。
3．標(biāo)本直接檢查
無(wú)菌體液如腦脊液和關(guān)節(jié)穿刺液可使用涂片、革蘭染色、直接顯微鏡檢查，查見(jiàn)細(xì)菌具有重要臨床價(jià)值，其他體液標(biāo)本如同時(shí)伴有炎性細(xì)胞時(shí)則直接顯微鏡檢查結(jié)果也具有參考價(jià)值。涂片檢查發(fā)現(xiàn)有革蘭陽(yáng)性球菌，則可向臨床發(fā)生初步報(bào)告“查見(jiàn)類似葡萄球菌屬革蘭陽(yáng)性球菌”，并進(jìn)一步用培養(yǎng)法和合適的鑒定技術(shù)予以證實(shí)。
4．分離培養(yǎng)與藥學(xué)招聘鑒定
臨床標(biāo)本可接種于血瓊脂平板，那些有污染的標(biāo)本如糞便等應(yīng)接種在選擇平板上，如甘露醇高鹽平板、哥倫比亞多粘菌素奈啶酸平板，血液標(biāo)本則用肉湯增菌培養(yǎng)基。孵育過(guò)夜平板上可見(jiàn)直徑約為2～3 mm，呈金黃色、白色或檸檬色的光滑、不透明、凸起圓形菌落，有時(shí)可見(jiàn)β溶血環(huán)。挑取菌落作鑒定試驗(yàn)，在鑒定結(jié)果報(bào)告以前， 平板應(yīng)繼續(xù)室溫放置2 ～3 天，觀察菌落性狀，有助于菌種鑒定。
細(xì)菌鑒定方法如下：
（1)菌落性狀。血瓊脂平板孵育24h 后，菌落直徑1～3 mm ，培養(yǎng)物繼續(xù)置室溫生長(zhǎng)，2 ～3 天后不同種葡萄球菌菌落性狀如下所述：
a．金黃色葡萄球菌：較大，直徑為6～8 mm，光滑、完整、稍隆起，半透明，金黃色色素或橙色。
b．表皮葡萄球菌：較小，直徑為5～6 mm ， 某些產(chǎn)粘液菌株能粘附在瓊脂平板表面，無(wú)色素或白色色素。
c．溶血葡萄球菌：5～9 mm，光滑奶酪狀，不透明，無(wú)色素或奶油色、黃色。
d．里昂葡萄球菌：4～7 mm，邊緣整齊稍扁，奶色、黃色色素和沃氏葡萄球菌相似。
e．腐生葡萄球菌：5～8 mm 邊緣整齊，光滑，不透明，凸起，白色或擰檬樣色素。疑為葡萄球菌屬細(xì)菌菌落以革蘭染色證實(shí)為陽(yáng)性球菌，以與酵母菌區(qū)別。
（2)凝固酶試驗(yàn)。是廣泛應(yīng)用于鑒定引起急性感染的病原性葡萄球菌的一種試驗(yàn)。有玻片法和試管法兩種。該試驗(yàn)所使用的血漿為EDTA抗凝兔血漿。
a．玻片凝固酶試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌表面有結(jié)合的凝固酶（聚集因子)，與血漿中的纖維蛋白原交聯(lián)使菌體快速凝聚。試驗(yàn)時(shí)挑取少數(shù)菌落培養(yǎng)物（不能用生長(zhǎng)于高鹽瓊脂上的菌落) 加入一滴血漿，10秒內(nèi)觀察細(xì)菌聚集和凝塊形成。金黃色葡萄球菌、中間型葡萄球菌呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。
b．試管凝固酶試驗(yàn)：細(xì)菌分泌到菌體外的凝固酶被血漿中的協(xié)同因子（cofactor)激活形成復(fù)合物，再使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白。試驗(yàn)時(shí)，以孵育過(guò)夜的牛心腦浸液肉湯培養(yǎng)物和血漿在37 ℃水浴中孵育4h，觀察凝塊形成。如試驗(yàn)結(jié)果為陰性者再置室溫18～24h ，因某些菌種（中間葡萄球菌、豬葡萄球菌) 的凝集出現(xiàn)所需時(shí)間長(zhǎng)4h 。但必須注意：
① 某些菌株產(chǎn)生的葡激酶在延長(zhǎng)孵育時(shí)間后可使凝塊溶解使之產(chǎn)生假陰性；
② 若使用不是無(wú)菌血漿可產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果；
③ 細(xì)菌不是純培養(yǎng)物或污染可導(dǎo)致假陽(yáng)性。
c．其他凝固酶試驗(yàn)：尚有商品化膠乳凝集試驗(yàn)和間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)凝固酶。膠乳凝集試驗(yàn)較一般的玻片法的特異性和敏感度高。
另外有一種新型的玻片試管法試驗(yàn)， 先將凍干的兔血漿置人反應(yīng)管中，
用前復(fù)溶，混人數(shù)個(gè)菌落，1 分?jǐn)?shù)時(shí)懸液凝聚者為陽(yáng)性，仍為懸液者為陰性。再將陰性反應(yīng)管再經(jīng)35 ℃溫育5 小時(shí)，觀察是否凝固以判斷是否存在游離凝固酶。
（3)耐熱核酸酶試驗(yàn)。大多數(shù)金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌、豬葡萄球菌能產(chǎn)生耐熱核酸酶。將待測(cè)菌的過(guò)夜肉湯培養(yǎng)物置沸水浴15min 后， 滴加于含甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂上已打好的直徑為2～5 mm 小孔內(nèi)，置35 ℃ 孵育，1h 后觀察結(jié)果，環(huán)繞孔周圍藍(lán)色瓊脂轉(zhuǎn)變?yōu)榉奂t為陽(yáng)性。此外表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐熱核酸酶。
（4)磷酸酶試驗(yàn)。大多數(shù)的表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌和豬葡萄球菌，該試驗(yàn)陽(yáng)性。將待測(cè)菌種點(diǎn)種在加有硝基酚磷酸鹽的p H5．6 ～6．8 M H 瓊脂上，孵育18 ～24h ，菌落周圍出現(xiàn)黃色為陽(yáng)性。
（5)吡咯烷酮芳基酰胺酶試驗(yàn)。溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌和中間葡萄球菌為試驗(yàn)陽(yáng)性。將孵育24 小時(shí)斜面培養(yǎng)物接種在含吡咯烷酮－β萘基酰胺（PY R) 肉湯中，使細(xì)菌濃度為2 號(hào)麥?zhǔn)瞎軡岫龋?5 ℃ 孵育2小時(shí)，加入PYR試劑后2分鐘內(nèi)呈現(xiàn)深紫紅色為陽(yáng)性。
（6)其他鑒定試驗(yàn)。鳥(niǎo)氨酸脫羧酶試驗(yàn)、脲酶試驗(yàn)、β－半乳糖苷酶、3－羥基丁酮酸試驗(yàn)、新生霉素敏感試驗(yàn)、多粘菌素B 耐藥試驗(yàn)、糖產(chǎn)酸試驗(yàn)是常用的葡萄球菌屬種間細(xì)菌的鑒定生化試驗(yàn)。臨床上常見(jiàn)葡萄球菌菌種的鑒別見(jiàn)下表。商品化鑒定系統(tǒng)多應(yīng)用糖發(fā)酵、傳統(tǒng)的鑒定試驗(yàn)以及酶的產(chǎn)色底物試驗(yàn)，常用的有API 、Staph－ID 系統(tǒng)、APIstaph 系統(tǒng)，ID32staph 系統(tǒng)、uiten 革蘭陽(yáng)性鑒定卡、Microscan系統(tǒng)、Miniten 系統(tǒng)等。
5．藥物敏感性試驗(yàn)
葡萄球菌屬細(xì)菌藥敏試驗(yàn)選擇抗生素：A 組（常規(guī)首選藥物) 為苯唑西林、青霉素；組（臨床使用主要藥物) 阿齊霉素、克林霉素、甲氨芐啶／磺胺甲口惡唑、萬(wàn)古霉素；C 組（對(duì)A 組耐受、過(guò)敏或無(wú)反應(yīng)者) 選用環(huán)丙沙星、慶大霉素、氯霉素；U 組（尿道中分離的細(xì)菌) 用諾氟沙星、呋喃妥因。
通過(guò)藥敏試驗(yàn)可篩選出耐甲氧西林葡萄球菌（methecillin resistant Staphylococcus ，M RS)，它是攜帶mecA 基因、編碼低親和力青霉索結(jié)合蛋白導(dǎo)致耐甲氧西林、所有頭孢菌素、碳青霉烯類、青霉素類＋青霉素酶抑制劑抗生素的葡萄球菌，該菌是醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原菌，感染多發(fā)生于免疫缺陷患者、老弱患者及手術(shù)、燒傷后的患者、極易導(dǎo)致感染暴發(fā)流行，治療困難、病死率高。
6．其他
尚可用ELISA 或?qū)α髅庖唠娪痉椒z測(cè)金黃色葡萄球菌磷壁酸抗體；用脈沖凝膠電泳法對(duì)葡萄球菌的質(zhì)粒和染色體進(jìn)行限制性內(nèi)切酶圖譜分析等非培養(yǎng)方法的檢測(cè)。
7．檢驗(yàn)結(jié)果分析與醫(yī)學(xué)全在線報(bào)告
葡萄球菌是臨床上常見(jiàn)的細(xì)菌， 經(jīng)涂片染色鏡檢觀察革蘭陽(yáng)性球菌和典型菌落形態(tài)，若觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性者，應(yīng)先用凝固酶試驗(yàn)檢查，將其分成凝固酶陽(yáng)性和凝固酶陰性細(xì)菌。前者大多為金黃色葡萄球菌，應(yīng)及時(shí)快速鑒定和進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，盡快報(bào)告臨床。后者大多是從輸液導(dǎo)管、人工植入組織中分離出的細(xì)菌，應(yīng)視為病原菌，須鑒定到菌種。對(duì)凝固酶陰性葡萄球菌，可先用呋喃唑酮紙片（100μg／片)，桿菌肽紙片0．04u／片作藥敏試驗(yàn)和氧化酶試驗(yàn)，以此與微球菌屬細(xì)菌鑒別，微球菌對(duì)桿菌肽敏感而對(duì)呋喃唑酮耐藥、氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，與葡萄球菌屬正好相反。若藥物敏感性試驗(yàn)是用氧西林耐藥的菌株，則報(bào)告該菌株耐所有青霉素、頭孢菌素、碳青霉烯類和β－內(nèi)酰胺藥β－ 內(nèi)酰胺酶抑制劑類抗生素，同時(shí)對(duì)氨基糖苷類，大環(huán)內(nèi)酯類和四環(huán)素類抗生素也耐藥。
三、臨床意義
凝固酶陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌是人類重要致病菌，可引起社區(qū)和醫(yī)院感染。感染常以急性、化膿性為特征，如果未經(jīng)治療，感染可擴(kuò)散至周圍組織或經(jīng)菌血癥轉(zhuǎn)移至其他器官。常見(jiàn)的感染有癤、癰、外科切口、創(chuàng)傷等局部化膿性感染和骨髓炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、肺炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎等全身性感染。金黃色葡萄球菌的致病性主要與各種侵襲性酶類（如血漿凝固酶、透明質(zhì)酸酶、磷脂酶、觸酶、耐熱核酸酶)
和多種毒素（溶血毒素、殺白細(xì)胞素等) 有關(guān)。某些菌株產(chǎn)生的腸毒素可引起食物中毒，表現(xiàn)為急性胃腸炎。噬菌體Ⅱ組金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的剝脫毒素（或稱表皮溶解素) 可引起人類燙傷樣皮膚綜合征，多見(jiàn)于新生兒、幼兒和免疫功能低下的成人。患者皮膚呈彌漫行紅癍和水皰形成，繼以表皮上層大量脫落。由噬菌體Ⅱ型金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的毒性休克綜合征毒素－1（toxic chock syndrome toxin1，TSST－1)， 引起機(jī)體發(fā)熱并增加對(duì)內(nèi)毒素的敏感性，該毒素屬超抗原家族，刺激T 細(xì)胞誘發(fā)TN F 和LI－1，可致機(jī)體多個(gè)器官系統(tǒng)的功能紊亂或引起毒性休克綜合征（TSS)。
凝固酶陰性葡萄球菌是人體皮膚粘膜正常菌群之一，是醫(yī)院感染的主要病原菌，其中表皮葡萄球菌引起人工瓣膜性心內(nèi)膜炎、靜脈導(dǎo)管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工關(guān)節(jié)感染等；腐生葡萄球菌則是女性尿路感染的重要病原菌，其他凝固酶陰性葡萄球菌也已成為重要的條件致病菌和免疫受損患者的感染菌。感染的發(fā)生常和細(xì)菌產(chǎn)生夾膜多糖或糖萼有關(guān)，它增強(qiáng)細(xì)菌與藥學(xué)招聘外來(lái)物質(zhì)（生物性瓣膜、導(dǎo)管等) 表面的粘附或在其表面形成一層生物膜而保護(hù)細(xì)菌對(duì)抗殺菌物質(zhì)作用。葡萄球菌的耐藥性已演變?yōu)獒t(yī)院感染和臨床治療的棘手問(wèn)題。
