酶聯(lián)免疫吸附檢測(ELISA)是免疫檢驗中最常用的方法之一。由于其方法上的特異性、靈敏性和操作上的簡便性以及試劑的穩(wěn)定性而成為免疫檢驗中的主要技術。盡管如此，在實驗工作中，要使ELISA得到最準確的結果，必須嚴格選擇試劑和嚴格按規(guī)程操作，并進行全面的質量控制。
1 試劑
1．1 試劑的選用試劑必須是國家批準檢定或有生產批準文號的試劑。使用前先測定各孔空白的吸光度值，并計算平均值，所有單個讀數(shù)與醫(yī)師招聘平均數(shù)之差應<10％。試驗用的蒸餾水的質量也至關重要，不合格的蒸餾水可使空白值增高，最好使用新鮮重蒸餾水。
1．2 試劑的準備實驗開始前，將試劑盒先從冰箱取出，在室溫下放置20 min以上后再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，以滿足反應微孔內的溫度要求。
2 標本要求
2．1 標本應新鮮如有細菌污染，菌體內可能含有內源性HRP(辣根過氧化物酶)，會發(fā)生假陽性反應。標本放置過長，IgG可聚合成多聚體。在間接法ELISA測定中會導致本底過深，造成假陽性。此外，要避免標本出現(xiàn)嚴重溶血。因Hb中含有血紅素基團，其有類似過氧化物活性，若血清中Hb濃度過高，則易于在溫育過程中吸附于固相，從而容易與后面加入的HRP底物反應顯色，造成假陽性。不能即刻測定的標本，應低溫保存，避免反復凍融。同時，標本凝固不全，其殘留的纖維蛋白原也易造成假陽性結果，應待凝固完全后再分離血清。
2．2 重視預防檢驗干擾類風濕因子、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體、交叉反應物質等在日常的臨床標本中，非�？赡墚a生檢驗干擾，造成假陽性，也應加以重視。
3 檢測方法標準化
加樣量要準確，不可太快。液體要加在孔底，避免加在孔壁上部，此區(qū)易導致非特異性吸附；試劑的加入除了滴加的角度要注意以外，速度的均衡也是質量保證之一；溫育的溫度和反應的時間要嚴格且水浴，可使溫度迅速平衡；反應板不應疊加在一起，為防止蒸發(fā)最好封板；避免“邊緣效應”，提高測定的重復性；洗板。對于ELISA來說，這是極其關鍵的一步。其目的是反應面中沒有與固相抗原或抗體結合的物質，和在反應中非特異吸附于固相載體的干擾物質。所用洗滌液應按試劑盒要求顯色。顯色的時問一定要掌握好，時間不足或過久都會影響結果的準確性。而且需要盡量保證每批次試驗的顯色時間一致；ELISA的比色測定用酶標儀完成，相對可以得到可靠的結果。
4 質量控制
包括分析前、分析中和分析后的質量控制。同時每次試驗都要進行對儀器設備的維護、校準以及試劑的質檢，操作程序要標準化。同時每次測試都要有空白、陰性、陽性對照和質控血清。空白、陰性、陽性對照的吸光度應在一定的范圍內。弱陽性的標本應復查或稀釋后復查，以排除前帶現(xiàn)象。每批試驗的質控血清必須能檢出，并記錄其s／co值，作出質控圖，以便更深入的分析。
