此法主要用于各種阿米巴和藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)滋養(yǎng)體和包囊的染色鑒定。
用竹簽挑取糞便少許,按一個(gè)方向在潔凈的載玻片上涂成薄糞膜,立即放入60℃的肖丁固定液2分鐘。依次將標(biāo)本放入碘酒精、70%及50%酒精中各2分鐘,用自來(lái)水和蒸餾水各洗1次。再置于40℃ 2%鐵明礬溶液2分鐘,流水沖洗2分鐘,放入40℃ 0.5%蘇木精溶液中染色5~10分鐘,再流水沖洗2分鐘,放入冷2%鐵明礬溶液中退色2分鐘。將載玻片置顯微鏡下檢查退色情況(觀察時(shí)勿使玻片干燥),如顏色偏深,應(yīng)繼續(xù)退色,直至核膜、核仁均清晰可見(jiàn)為止。然后,流水沖洗15~30 分鐘, 至標(biāo)本顯現(xiàn)藍(lán)色,再用蒸餾水洗1次。繼而,依次在50%、70%、80%、95%酒精(2次)中逐漸脫水各2分鐘。在二甲苯中透明3~5 分鐘后用中性樹(shù)膠封片。染色后,原蟲(chóng)胞質(zhì)呈灰褐色,胞核、包囊內(nèi)的擬染色體及溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體吞噬的紅細(xì)胞均被染成墨色,糖原泡則被溶解呈空泡狀。
蘇木精染液的配制:蘇木精粉10g,溶于95%酒精100 ml 中,裝入250 ml 大口玻瓶?jī)?nèi),加塞置室溫中6~8 周,使之充分氧化。如將玻瓶曬于陽(yáng)光下,每日振搖,可加速成其氧化,便于應(yīng)急使用。氧化成熟的染液滴于水中呈鮮艷紫色,未氧化成熟染液則呈淡紅或紅紫色。此為原液,使用時(shí),按1∶19 加蒸餾水配成0.5%染液,此染液可保存3~6個(gè)月。
碘酒精配制:先用碘化鉀10g 溶于100 ml 蒸餾水中,再加結(jié)晶碘5g,溶解后貯于棕色瓶中,該液即為盧戈碘液。在70%酒精中加數(shù)滴盧戈碘液即為碘酒精。2%鐵明礬溶液配制:硫酸鐵銨2g,溶于100 ml 蒸餾水中,臨用前配制。
肖丁固定液配制:飽和氯化高汞水溶液2份加95%酒精1份配成100 ml ,用前再加冰醋酸5 ml,并加熱至40℃。