1 試劑
1.1 標(biāo)準(zhǔn)抗蛇毒血清
由中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)。標(biāo)準(zhǔn)抗蛇毒血清應(yīng)保存于2～8℃。
1.2 蛇毒
由檢定所分發(fā)。試驗(yàn)用的蛇毒須以檢定所分發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)抗蛇毒血清準(zhǔn)確標(biāo)定其試驗(yàn)量（蝮蛇、眼鏡蛇及銀環(huán)蛇1個(gè)L+，五步蛇2個(gè)L+)。使用干毒時(shí)，須以精確的分析天平稱取，每次稱取量不得少于5mg，溶解后應(yīng)在3天內(nèi)（保存于2～8℃)用完。干毒應(yīng)封m.f1411.cn/yishi/存于裝有干燥劑的真空器皿中。亦可將干毒制成液體甘油蛇毒，即干毒溶解液與中性甘油（經(jīng)116℃10分鐘滅菌)等量混合，每ml至少含50個(gè)試驗(yàn)量，保存于2～8℃暗處。
1.3 稀釋液
硼酸鹽緩沖鹽水，滅菌后pH應(yīng)為7.0～7.4。配方為：
氯化鈉8.5g
硼酸 4.5g
硼砂0.5g
加蒸餾水至1000ml，過(guò)濾。
2 用具
吸管、容量瓶、注射器應(yīng)經(jīng)標(biāo)化。吸管、試管、容量瓶應(yīng)潔凈干燥，其他用具應(yīng)滅菌。
3 試驗(yàn)動(dòng)物
體重18～20g健康小白鼠。
4 試驗(yàn)方法
4.1 稀釋標(biāo)準(zhǔn)抗蛇毒血清
用稀釋液稀釋標(biāo)準(zhǔn)抗蛇毒血清使每ml含抗銀環(huán)蛇、眼鏡蛇或抗蝮蛇毒血清5Um.f1411.cn/zhuyuan/、或抗五步蛇毒血清10U，即與5個(gè)相應(yīng)蛇毒試驗(yàn)量混合后每0.4ml注射量中含1U或2U。
4.2 稀釋蛇毒
用稀釋液稀釋蛇毒，使其5個(gè)試驗(yàn)量不超過(guò)0.8ml，在與抗蛇毒血清混合時(shí)補(bǔ)加稀釋液至2ml，即每0.4ml注射量中含1個(gè)試驗(yàn)量。
4.3 稀釋待檢抗蛇毒血清
用稀釋液將待檢抭蛇毒清稀釋成數(shù)個(gè)稀釋度，使每ml抗蝮蛇、眼鏡蛇或銀環(huán)蛇毒血清約含5U或其上下：抗五步蛇毒血清約含10U或其上下。各稀釋度間隔5%～10%。
4.4 混合
4.4.1 待檢組
定量吸取不同稀釋度之待檢抗蛇毒血清各1ml，分別裝入小試管中，每管加入5個(gè)試驗(yàn)量與待檢抗蛇毒血清相應(yīng)的稀釋蛇毒液，補(bǔ)加稀釋液至2ml，混合均勻，加塞，置37℃結(jié)合45分鐘后立即注射小白鼠。
4.4.2 對(duì)照組
按下表定量吸取已稀釋之待檢抗蛇毒血清相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)抗蛇毒血清，分別裝入小試管中：
對(duì)照①
對(duì)照②
標(biāo)準(zhǔn)抗眼鏡蛇毒血清 1ml 1.2ml
每管加入5個(gè)試驗(yàn)量之相應(yīng)稀釋蛇毒液，補(bǔ)加稀釋液至2ml，混合均勻，加塞，置37℃結(jié)合45分鐘后立即注射小白鼠。
4.5 注射
每個(gè)稀釋度的待檢抗蛇毒血清、對(duì)照①及對(duì)照②各注射小白習(xí)4只，每只腹腔注射0.4ml。應(yīng)注意勿使注射液流出。
4.6 觀察
試驗(yàn)小白鼠每日觀察1次，并記錄發(fā)病及死亡情況，抗銀環(huán)蛇毒血清及抗五步蛇毒血清之試驗(yàn)小白鼠觀察48小時(shí)，抗腹蛇毒血清及抗眼鏡蛇毒血清之試驗(yàn)小白鼠觀察72小時(shí)。
4.7 結(jié)果判定
對(duì)照①小白鼠死亡50%以上，對(duì)照②小白鼠應(yīng)比對(duì)照①死亡晚或不死亡。待檢抗蛇毒血清之效價(jià)應(yīng)以與對(duì)照①小白鼠同時(shí)死亡之最高稀釋度判定。
