在寄生蟲學中應(yīng)用免疫細胞化學方法,對于人體大多數(shù)寄生蟲都較其他血清學方法敏感。圖象鮮明,易于觀察。在診斷方面,免疫熒光間接法最常用于檢查宿主的抗體?乖苽淙菀,只需要作成切片、涂片或壓印片標本,不需提純可溶性抗原;有些可溶性抗原固定于醋酸纖維濾紙上,反應(yīng)后以熒光計讀數(shù),可以定量。
但是,對于血中缺乏抗體的寄生蟲如皮膚利什曼病,則難以診斷。還有些寄生蟲(如扁形蠕蟲)抗原性的變化,則需制備多種抗原。絲蟲等有較強的抗原交叉性,解釋結(jié)果必須慎重。
(一)抗原
可用尾蚴成蟲。
1.尾蚴抗原將每毫升300條左右的尾蚴懸液與等量20%福爾馬林混合。作用5min后,用PBS洗滌離心2次,取尾蚴沉淀備用。在4℃保存。
2.成蟲抗原 可將成蟲制成切片,甲醇固定10min,低溫保存?zhèn)溆谩?/p>
(二)待檢血清
可按常規(guī)靜脈采血分離血清,也可自指尖或耳垂微量采血(約0.05ml),滴于優(yōu)質(zhì)濾紙上干燥,試驗時用生理鹽水浸取可溶性免疫球蛋白成分。干燥于濾紙上的血樣,在室溫中(22~26℃)或普通冰箱中保存3個月以上,可以郵寄。
(三)熒光抗體
可用抗人IgG或IgM熒光抗體,其特異性需經(jīng)免疫電泳鑒定。
(四)檢查方法
1.尾蚴染色法可將抗原沉淀以白金耳挑取涂片,干燥后以甲醇固定10min。然后按常規(guī)間接法染色。
2.成蟲染色法同一般切片間接法。
據(jù)報道,此法敏感性可達80%~98%。
免疫熒光間接法用于研究人和實驗動物對瘧原蟲感染的免疫反應(yīng),瘧疾流行病學調(diào)查和臨床診斷有很大的實用價值。
1.抗原標本人瘧原蟲標本制備:采用多種瘧原蟲混合抗原,制作涂片,甲醇或丙酮固定。要每個高位中視野含裂殖體總數(shù)約15個即可;蛴靡赘泻锏母鞣N瘧原蟲感染的紅細胞。
雞瘧原蟲抗原標本制備:取感染瘧原蟲后第9~11天之間的雞血制備血膜,貯于4℃或-20℃下,用前丙酮固定10min。
2.待檢血清采血方法同血吸蟲法。
3.熒光抗體常用抗人IgG熒光抗體。
4.檢查方法待檢血清以1:20起始稀釋,按間接法染色,鏡檢。
5.結(jié)果判斷陽性結(jié)果,人類瘧原蟲包涵體呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。雞瘧原蟲抗原主要顯示胞漿染色。1:16或1:20稀釋待檢血清陽性時,可以繼續(xù)稀釋作滴度檢查。低于1:20的結(jié)果無意義。用人類瘧原蟲多種混合抗原和單抗原,病人抗體染色效價可達1:65536,1:1024~1:4096者占1/3。以雞瘧原蟲作抗原,效價最高1:640,以惡性瘧最高為1:150,間日瘧為1:40。
用間接免疫熒光方法檢查阿米巴肝腔腫病人血清抗體,陽性率可達90%~100%。血清抗體滴度在1:80或1:160有診斷意義。治療后抗體滴度下降。腸道阿米巴疾病陽性率較低(59%~91%)。
用間接免疫熒光方法檢查各種錐蟲病患者血清抗體,對于恰加斯氏病(克氏錐蟲所致)的血清抗體診斷,有高度的敏感性和特異性。用于檢查非洲錐蟲病的陽性率為85.9%(WHO,1976)。岡比亞錐蟲和羅德西亞錐蟲所致非洲昏睡病的血清抗體診斷,在檢測特異性抗體時,同種抗原比異種抗原好,可達到最高的敏感性。
應(yīng)用絲蟲成蟲冰凍切片抗原作間接免疫熒光檢查適用多種絲蟲病免疫診斷。很有價值。如魏氏棘唇線蟲抗體陽性率可達905。用作流行病學調(diào)查,可反映流行的準確情況。已用于盤尾絲蟲、班氏絲蟲、犬惡絲蟲、廣州管圓線蟲等抗體的m.f1411.cn/wszg/檢測。
已證實免疫熒光間接法檢查弓形蟲抗體,是一種診斷弓形蟲病的特異和敏感的方法,陽性率可達98%。用死蟲體作抗原很簡便,檢查IgM抗體可診斷新生嬰兒先天性感染。
用旋毛蟲冰凍切片作抗原,間接免疫熒光方法檢查病人血清抗體,很敏感、特異和經(jīng)濟,節(jié) 省時間。
已用間接免疫熒光方法對蛔蟲病,弓蛔蟲病,鉤蟲病,線蟲病,吸蟲。ǚ挝x和肝吸蟲)、絳蟲病(包括囊蟲病和牛肉絳蟲以及豬肉絳蟲)等進行快速診斷,取得較好的結(jié)果。