免疫化學(xué)方法是利用抗原與其相應(yīng)抗體具有特異結(jié)合的特性，用熒光素、酶、發(fā)光素、同位素、膠體金標(biāo)記某種抗原的抗體，借助熒光顯微鏡、電鏡、圖像分析儀、同位素監(jiān)測(cè)儀、分光亮度儀便可對(duì)組織中的抗原進(jìn)行定性或定量，可用于膠原、蛋白多糖、彈性蛋白、粘連蛋白、血漿成分的定位和定量分析。
1．抗原提取及單克隆抗體的制備（從略)。
2．抗體的標(biāo)記：基本原理是將抗體與標(biāo)記物以共價(jià)鍵結(jié)合。
3．組織取材。
因?yàn)榭乖M織容易降解和擴(kuò)散，取材要及時(shí)和低溫操作，取動(dòng)脈壁冰凍切成4～8μm，貼于玻片上立即干燥，用95%乙醇固定15min，然后用0.5mol/l pH7.4 BPS洗1次。
4．抗體染色
抗體染色是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，37℃30～60min，間接法結(jié)合第二抗體，37℃ 30～60min。每步間隔都用PBS pH7.4洗滌5～10min共洗3次。抗體染色方法有直接法、間接法、補(bǔ)體法：
（1)直接法：標(biāo)記抗體直接于組織中進(jìn)行抗原結(jié)合反應(yīng)，用于鑒定未知抗原。
優(yōu)點(diǎn)：①結(jié)果判定簡(jiǎn)單；②特異性強(qiáng)，因反應(yīng)過(guò)程中只m.f1411.cn/job/有兩個(gè)因素，與抗原交叉反應(yīng)較少。
缺點(diǎn)：①不能鑒定未知抗原；②一種標(biāo)記抗體只能檢測(cè)一種抗原；③敏感性差。
（2)用已知未標(biāo)記抗體與未知抗原相互結(jié)合或用未知抗體與已知抗原相互結(jié)合，一定時(shí)間后洗掉未結(jié)合成分，加第二標(biāo)記的抗體。若第一步反應(yīng)中有Ag-Ab的特異結(jié)合，才會(huì)有第二步后續(xù)反應(yīng)。
優(yōu)點(diǎn)：①既能檢查Ag又能檢查Ab；②標(biāo)記一種抗體，就能與一種以上的相應(yīng)抗原結(jié)合鑒定多種抗原或抗體；③敏感性比直接法高。
缺點(diǎn)：①參加反應(yīng)因素多，易出現(xiàn)非特異性反應(yīng)；②實(shí)驗(yàn)方法復(fù)雜。
（3)補(bǔ)體結(jié)合法：是標(biāo)記補(bǔ)體抗體的方法，第一步是將抗體和補(bǔ)體加入反應(yīng)體系；第二步是加入標(biāo)記補(bǔ)體抗體，若第一步有Ag-Ab反應(yīng)，補(bǔ)體抗體則可結(jié)合于補(bǔ)體上。
5．染色定性定量分析
熒光素標(biāo)記抗體可用m.f1411.cn/hushi/熒光顯微鏡作定性分析。用顯微熒光分光光度計(jì)可定量。酶標(biāo)抗體可用普通顯微鏡定性，也可定量。放射性同位素和發(fā)光素標(biāo)記可用同位素檢測(cè)儀和發(fā)光計(jì)作定性、定量分析。
（孫續(xù)國(guó))
