| 公開(公告)號 | CN1291031C |
| 公開(公告)日 | 2006.12.20 |
| 申請(專利)號 | CN200410077749.2 |
| 申請日期 | 2004.12.29 |
| 專利名稱 | 重組胸腺素α1的制備方法 |
| 主分類號 | C12P21/02(2006.01)I |
| 分類號 | C12P21/02(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中山大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 徐安龍;姜孝玉;李 靖;于 琳;王 妍;陳尚武;王 磊;董美玲 |
| 地址 | 510275廣東省廣州市新港西路135號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 廣州新諾專利商標事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 華 輝 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項 | 重組胸腺素α1的制備方法，其特征在于：選用大腸桿菌作為工程菌，按照以下步驟進行(1)具有大腸桿菌工程菌密碼子偏好性胸腺素α1基因的融合表達載體的構(gòu)建：(1.a)按大腸桿菌密碼子偏好性化學(xué)合成胸腺素α1基因，其核苷酸序列為5’-TCTGAT GCT GCG GTC GAT ACC AGC AGT GAA ATA ACT ACG AAA GAC TTA AAAGAAAAG AAA GAG GTT GTG GAA GAA GCC GAG AAC-3’：(1.b)以5’-GGGGTACCTCTGATGCTGCGGTCGAT-3’為上游引物、5’-GTCAT GCGGCCGCGTTCTCGGCTTCTTCCACAA-3’為下游引物，擴增出目的基因片段；(1.c)目的基因片段通過酶切后，將目的基因定向克隆到原核融合表達載體pTRX上，構(gòu)建融合表達質(zhì)粒pTRX-Tα1。(2)工程菌的構(gòu)建及發(fā)酵培養(yǎng)：(2.a)將上述的融合表達質(zhì)粒pTRX-Tα1轉(zhuǎn)化大腸桿菌；(2.b)大腸桿菌工程菌發(fā)酵培養(yǎng)；(3)重組胸腺素α1的制備與純化。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種重組胸腺素α1的制備方法：按大腸桿菌密碼子偏好性化學(xué)合成胸腺素α1基因，擴增出目的基因片段，將目的基因定向克隆到原核融合表達載體pTRX上，構(gòu)建融合表達質(zhì)粒pTRX-Tα1。含表達質(zhì)粒pTRX-Tα1的工程菌可表達出硫氧還蛋白—胸腺素α1融合蛋白，通過親和層析和離子交換層析純化融合蛋白，腸激酶酶切釋放出Tα1，再通過親和層析和HPLC純化出Tα1。試驗結(jié)果表明，Tα1的生物學(xué)活性與化學(xué)合成的胸腺素α1(日達仙)相當。 |
| 國際公布 |
