公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1318448C
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公開(kāi)(公告)日
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2007.05.30
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申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)
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CN200510059313.5
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申請(qǐng)日期
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2005.03.28
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專(zhuān)利名稱(chēng)
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一種重組全長(zhǎng)人腦紅素、其生產(chǎn)方法及其應(yīng)用
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主分類(lèi)號(hào)
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C07K14/795(2006.01)I
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分類(lèi)號(hào)
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C07K14/795(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61K38/17(2006.01)I;A61P25/00(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人
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中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所;北京蘇里曼醫(yī)藥科技有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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張成崗;王利紅;高 艷;王春麗
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地址
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100850北京市海淀區(qū)太平路27號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu)
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北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
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代理人
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魯 兵
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國(guó)省代碼
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北京;11
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主權(quán)項(xiàng)
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一種重組全長(zhǎng)人腦紅素rhNGB的生產(chǎn)方法,具體步驟包括:將工程菌接種培養(yǎng)、細(xì)菌反復(fù)凍融、菌體裂解、包涵體裂解、層析純化和目的蛋白復(fù)性;其中,所述工程菌為重組pBV220-rhNGB/HB101工程菌;所述工程菌接種培養(yǎng)基為含有100μg/ml氨芐青霉素的LB;所述包涵體裂解步驟中將所述包涵體冰浴超聲破碎后,于100℃煮沸5min。
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摘要
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本發(fā)明公開(kāi)了一種細(xì)菌表達(dá)生產(chǎn)重組全長(zhǎng)人腦紅素rhNGB的方法以及用該方法得到的重組全長(zhǎng)人腦紅素rhNGB,該方法包括將工程菌接種培養(yǎng)、細(xì)菌反復(fù)凍融、菌體裂解、包涵體裂解、層析純化和目的蛋白復(fù)性等步驟。本發(fā)明是在構(gòu)建人腦紅素基因片段NSV并構(gòu)建高效表達(dá)菌株的基礎(chǔ)上,建立了一整套工程菌誘導(dǎo)表達(dá)、包涵體分離裂解、蛋白質(zhì)復(fù)性純化的工藝,從而獲得了重組全長(zhǎng)人腦紅素純品,并對(duì)重組全長(zhǎng)入腦紅素的生物學(xué)活性進(jìn)行描述。實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明得到的全長(zhǎng)人腦紅素可以作為藥物用于預(yù)防和治療中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)疾病。
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國(guó)際公布
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