| 公開(公告)號 | CN1749274A |
| 公開(公告)日 | 2006.03.22 |
| 申請(專利)號 | CN200510080478.0 |
| 申請日期 | 2005.07.05 |
| 專利名稱 | 一種新的重組人干擾素α2b的分離純化方法 |
| 主分類號 | C07K14/56(2006.01)I |
| 分類號 | C07K14/56(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 北京凱因生物技術有限公司 |
| 發(fā)明(設計)人 | 張春麗 |
| 地址 | 100176北京市經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)榮京東街6號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種新的重組人干擾素α2b的分離純化方法，其包括下述步驟： (1)破碎發(fā)酵完畢的重組人干擾素α2b大腸桿菌工程菌，離心得沉淀； (2)將沉淀按1∶5-20(重量/體積)比例加入4M尿素/TE溶液，離心得沉淀； (3)將沉淀按1∶5-25(重量/體積)比例加入Tris-HCl溶液，離心得沉淀； (4)將沉淀按1∶2-10(重量/體積)加入8M鹽酸胍+DTT裂解液，離心，取上清液，測蛋白含量； (5)將上清液倒入H3BO3溶液中攪拌均勻，稀釋后的溶液蛋白含量為0.15-0.08mg/ml，復性，得復性液； (6)向復性液中緩慢滴加6MHCl，調(diào)PH2.0-3.0，離心，收集上清液，緩慢滴加6MNaOH(體積/體積)，調(diào)PH7.8-8.0； (7)將硫酸銨粉末緩慢加入上清液中，溶解后過濾，取濾液； (8)依次進行疏水柱M1柱層析、CM-Sepharose柱層析、疏水柱M2柱層析和S-100分子篩層析。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種新的重組人干擾素α2b的分離純化方法，其包括下述步驟：破碎重組人干擾素α2b大腸桿菌工程菌，尿素溶解，Tris-HCl洗滌，鹽酸胍裂解，硼酸復性，調(diào)pH值，鹽溶，疏水柱M 1柱層析，CM-Sepharose柱層析，疏水柱M2柱層析和S-100分子篩層析。本方法減少了純化步驟，進行純化過程的集成，使工藝流程順暢，無迂回，生產(chǎn)配置無瓶頸，為大規(guī)模自動化生產(chǎn)的再放大提供了可能。 |
| 國際公布 |
