課程名稱

臨床檢驗基礎學

授課題目（章節(jié)或主題)

血液分析儀原理及應用

授課教師

吳曉蔓

所屬二級學院

第二臨床學院

所屬教研室

臨床檢驗基礎

職稱

教授

授課時間

2008年3月25 日第5周 星期二第 1～2節(jié)第1 次課

授課時數(shù)

8學時

授課班級

  檢驗 專業(yè)（本科√  �？啤�)2005   級   1，2，3   班

教學課型

理論課√    實驗課□ 習題課□ 討論課□ 實習（踐)課□  其它□

教材名稱、作者、出版社及出版時間

臨床檢驗基礎 熊立凡主編 人民衛(wèi)生出版社 2007第四版

教學目標與要求：

掌握

1．試述血液分析儀檢測白細胞的原理，列舉白細胞檢測參數(shù)

2．VCS檢測血細胞的特點。

3．血液分析儀檢測白細胞分類、網(wǎng)織紅細胞、有核紅細胞、網(wǎng)織血小板有哪些特殊細胞染色法

4． 簡述三分群血液分析儀細胞檢測的主要原理。

熟悉

1．DHSS檢測血細胞有何特點？

2．射頻電導法可檢測細胞的哪些特征？

3．簡述流式細胞術檢測細胞的主要原理。

4．血液分析儀應用分光光度法何種原理、檢測何種物質？

5．MAPSS檢測血細胞具有何特點？

6．血液分析儀檢測紅細胞計數(shù)、血小板計數(shù)分別應用哪些原理？

了解

1.流式細胞術Mie光散射理論。

2.簡述激光散射法系統(tǒng)的基本組成。

3.血液分析儀應用哪兩大類溶血劑檢測血紅蛋白？各有何特點？

4.試列舉血液分析儀檢測紅細胞的原理及檢測參數(shù)。

5.血液分析儀檢測血小板的原理及檢測參數(shù)

主要知識點、重點與難點：

主要知識點：

1．血液分析儀檢測白細胞的原理，列舉白細胞檢測參數(shù)

2．VCS檢測血細胞的特點。

3．血液分析儀檢測白細胞分類、網(wǎng)織紅細胞、有核紅細胞、網(wǎng)織血小板有哪些特殊細胞染色法

4．簡述三分群血液分析儀細胞檢測的主要原理。

重點與難點：

血液分析儀檢測白細胞的原理

血液分析儀檢測白細胞分類、網(wǎng)織紅細胞、有核紅細胞、網(wǎng)織血小板有哪些特殊細胞染色法

簡述三分群血液分析儀細胞檢測的主要原理。

教學方法（請打√選擇)：

講授法√　 討論法√ 　演示法□　 自學輔導法□　 　練習法(習題或操作) □　讀書指導法□

ＰＢＬ（以問題為中心的教學法)□　　案例法□　 其他□

教學媒體（請打√選擇)：

教材√  板書√  實物□  標本□  掛圖□ 模型□ 投影□ 幻燈□   錄像√   CAI（計算機輔助教學)□

教學過程設計（包括講授內容、講授方法、時間分配、媒體選用、設計等)：

自動血液分析儀（automated hematology analyzer，AHA)

血細胞計數(shù)儀（blood cell counter)是目前國內外臨床檢驗最常用的篩檢儀器之一。

現(xiàn)代血液分析儀的功能有：

第一節(jié) 檢測原理

五、血液分析儀檢測參數(shù)原理

（一)血液分析儀檢測參數(shù)原理

（二)白細胞系列參數(shù)檢測原理 

1．體積、電導和光散射（volume，conductivity，light scatter，VCS)法（圖3-5) 

在細胞幾近自然狀態(tài)下，分別應用電阻抗技術檢測細胞體積，電導（射頻)技術檢測細胞大小和內部結構（包括細胞化學成分和核的體積)，光散射技術（10°～70°)檢測細胞內的顆粒性、核分葉性核細胞表面結構。

2．流式細胞術、電阻抗、射頻和特殊細胞染色法  

①4DIFF通道：利用激光流式細胞術、核酸熒光染色技術，得到4DIFF白細胞散點圖（圖3-8)，包括中性粒細胞和嗜堿性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞和未成熟粒細胞。

②WBC/BASm.f1411.cn/yaoshi/O通道：在堿性溶血劑作用下，除嗜堿性粒細胞外的其他所有細胞均被溶解或萎縮，隨后用流式細胞術計數(shù)嗜堿性粒細胞，從而得到WBC/嗜堿性粒細胞百分率和細胞計數(shù)絕對值及WBC/BASO散點圖。

③未成熟粒細胞信息通道：用射頻、電阻抗和細胞化學染色法。在細胞懸液中加硫化氨基酸，幼稚細胞與硫化氨基酸結合的量多于較成熟的細胞、且對溶血劑有抵抗作用。因此，當加入溶血劑時，成熟細胞被溶解，只留下幼稚細胞（含未成熟粒細胞、原始細胞、造血祖細胞)得以計數(shù)。IMI通道可定量分析不同類型幼稚細胞。

3．鎢光源、激光散射法

 ①過氧化物酶（peroxidase，Perox)染色通道（圖3-11)：

過氧化物酶活性強度：嗜酸性粒細胞大于中性粒細胞，后者大于單核細胞；淋巴細胞和嗜堿性粒細胞則無過氧化物酶活性。

②嗜堿性粒細胞/核分葉性（baso/lobularity)通道（圖3-12)：

溶解紅細胞和血小板，除嗜堿性粒細胞外，其他所有白細胞膜均被破壞，胞質溢出，僅剩裸核，作白細胞計數(shù)和嗜堿性粒細胞計數(shù)。

③未染色大細胞（large unstained cell count，LUC)檢測：在Perox通道，可檢測到大于正常淋巴細胞體積平均值2個標準差的細胞，如異型淋巴細胞、漿細胞、毛細胞、幼稚淋巴細胞和原始細胞。

4．多角度偏振光散射法（multi angle polarized scatter separation，MAPSS) 

多角度偏振光散射法分4個角度（圖3-13)檢測：

①  0°，前向散射光：反映細胞大小，同時檢測細胞數(shù)量（圖3-14)。

②  7°，側向散射光：反映細胞內部結構及核染色質的復雜性。

③  90°，垂直角度散射光（偏振光)：反映細胞內部顆粒及分葉狀況（圖3-15)。

④  90°D，垂直角度消偏振散射光；“去偏振”是指垂直方向激光光波運動隨光散射結果而改變；在光散射過程中，嗜酸性粒細胞顆粒豐富，可去偏振光，與中性粒細胞鑒別（圖3-16)。

5．雙流體（雙鞘流)動力連續(xù)系統(tǒng)（double hydrodynamic sequential system，DHSS)

①白細胞計數(shù)通道：用電阻抗法檢測。

②嗜堿性粒細胞通道：用專用染液染色，嗜堿性粒細胞具有抗酸性，而其他細胞胞質溢出，成為裸核，用電阻抗法檢測，所得結果與白細胞/血紅蛋白通道（采用鞘流阻抗法測定白細胞)的白細胞結果進行比較（圖3-19)。

③白細胞分類通道：雙鞘流系統(tǒng)中，用流式細胞光吸收、電阻抗和細胞化學染色液對細胞脂質和蛋白組分染色檢測除各類嗜堿性粒細胞以外的白細胞（圖3-20)；在幼稚紅細胞通道，熒光染色，進行白細胞分類。

雙矩陣LIC散點圖可將幼稚細胞分為3個亞群（圖3-22)：

①未成熟粒細胞（immature granulocyte，IMG)：包括異常中性粒細胞、晚幼粒細胞、中幼粒細胞、早幼粒細胞、原始粒細胞。

②未成熟單核細胞（immature monocyte，IMM)：包括早幼單核細胞、原始單核細胞。

③未成熟淋巴細胞（immature lymphocyte，IML)：包括早幼淋巴細胞、原始淋巴細胞等。

（三)成熟紅細胞系列參數(shù)檢測原理

1．電阻抗法  依據(jù)紅細胞大小和數(shù)量進行紅細胞計數(shù)（圖3-23)。

2．流式細胞術、鞘流電阻抗法

3．流式細胞術激光散射法 

（1)紅細胞/血小板檢測通道：

（2)紅細胞散點圖：

4．電阻抗法和光散射法 

（四)血小板系列參數(shù)檢測原理

1．電阻抗法 

2．流式細胞激光核酸熒光染色和電阻抗法 

3．激光散射法 

4．固體激光散射法、電阻抗法和單克隆抗體熒光染色散射法 

（五)血紅蛋白濃度測定檢測原理 

1．改良氰化高鐵血紅蛋白法  測定波長540nm，稀釋液含氰化物成分。

2．非氰化高鐵血紅蛋白法  即稀釋液不含氰化物配置的成分。如SLS-Hb測定法。

（六)網(wǎng)織紅細胞系列參數(shù)檢測原理 

1．非熒光染料染色法  用新亞甲藍對網(wǎng)織紅細胞RNA染色，同時用一種試劑使紅細胞內血紅蛋白溢出后變?yōu)椤坝凹毎�”，可減少對網(wǎng)織紅細胞檢測的干擾，采用VCS技術測定網(wǎng)織紅細胞（圖3-34)。

2．熒光染料染色法

（1)用聚次甲基染RNA和噁嗪染DNA法：

（2)用氧氮雜芑750染RNA法：

（3)用非對稱菁（asymmetrical cyanine)熒光染料染RNA（也可染DNA)法：

（4)用噻唑橙染網(wǎng)織紅細胞RNA法：

（七)有核紅細胞系列參數(shù)檢測原理

1． VCS法  圖3-41 VCS法有核紅細胞檢測散點圖

2．流式激光/熒光染色法

（1)聚次甲基熒光染色法：圖3-42聚次甲基熒光染色有核紅細胞檢測散點圖

（2)碘化丙啶染色法：圖3-43碘化丙啶熒光染色有核紅細胞檢測散點圖

3．白細胞計數(shù)和分類通道衍生法  在白細胞計數(shù)和分類的過氧化物酶染色通道和嗜堿性粒細胞染色/分葉核細胞通道，根據(jù)NRBC的核大小和核密度與各類白細胞進行鑒別（圖3-44，圖3-45)。

4．阻抗法和噻唑橙熒光染色流式細胞術  圖3-46

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提問、課堂討論等師生互動的設計：

1.簡述三分群血液分析儀細胞檢測的主要原理？

2．血液分析儀檢測白細胞應用哪些原理？試列舉盡可能多的檢測參數(shù)？

3．血液分析儀檢測紅細胞應用哪些原理？試列舉盡可能多的檢測參數(shù)？

4．血液分析儀檢測血小板應用哪些原理？試列舉盡可能多的檢測參數(shù)？

5．什么是VCS？檢測血細胞各具有何特點？

6．什么是MAPSS？檢測血細胞具有何特點？

7．什么是DHSS？檢測血細胞具有何特點？

教學小結、復習思考及作業(yè)題布置：

1. 血液分析儀有哪幾類結果顯示形式？

2．簡述三分群血液分析儀白細胞、紅細胞和血小板直方圖的表達特點？

3．哪些因素可影響正常細胞直方圖？

4．2005年，國際血液學組織發(fā)布的血液分析儀顯微鏡復檢規(guī)則有幾條？

5．簡述紅細胞參數(shù)RDW、IRF、CHr臨床意義？

6．簡述血小板參數(shù)MPV、IPF臨床意義？

教學中的創(chuàng)新點（加強基礎與臨床聯(lián)系、外語運用、啟發(fā)學生思維、指導學生自學、介紹學科新進展等方面)：

加強基礎與臨床聯(lián)系、 介紹學科新進展、提出理論聯(lián)系實際，檢驗結果必須結合臨床表現(xiàn)等

參考資料（包括輔助教材、參考書、文獻等)：

1. 叢玉隆 ,王淑娟主編:《今日臨床檢驗學》, 中國科學技術出版社,1997年。  

2．叢玉隆 ,樂家新，秦小玲，楊宏偉，王丹玲主編:《血細胞分析技術與臨床》,天津科學技術出版社, 2002年。

教研室

意 見

符合教學要求，同意。

教研室主任簽章：鄭小玲 2008年2月25日

教學后記（即教學實施情況總結分析，在課程結束后填寫)

血液分析儀是臨檢基礎中發(fā)展較快的內容，本教材新增的內容很多，也非常前沿。本內容為8學時，但時間較緊，內容太多，也比較重要，在以后的教學中可適當增加課時。