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中國(guó)幽門(mén)螺桿菌研究:幽門(mén)螺桿菌的檢測(cè)與致病性

1983的Warran和Marshall從慢性胃炎患者胃粘膜中培養(yǎng)出(Hp)幽門(mén)螺桿菌,并認(rèn)為Hp與慢性活動(dòng)性胃炎和消化性疾病的致病過(guò)程有關(guān)。引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛重視。我院自1987年開(kāi)始逐步深入對(duì)Hp進(jìn)行了研究,重點(diǎn)對(duì)胃部有明顯癥狀的慢性患者1362例(男922例,女440例)進(jìn)行了全…

1983的Warran和Marshall從慢性胃炎患者胃粘膜中培養(yǎng)出(Hp)幽門(mén)螺桿菌,并認(rèn)為Hp與慢性活動(dòng)性胃炎和消化性疾病的致病過(guò)程有關(guān)。引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛重視。我院自1987年開(kāi)始逐步深入對(duì)Hp進(jìn)行了研究,重點(diǎn)對(duì)胃部有明顯癥狀的慢性患者1362例(男922例,女440例)進(jìn)行了全而系統(tǒng)的檢查和觀察。報(bào)道如下。

1 檢測(cè)方法

1.1 涂片染色檢測(cè)

胃活檢組織直接涂片染色觀察,分別用革蘭染色,或0.1%葉啶橙,1%美藍(lán)和1%堿性復(fù)紅染色。后者染色速度最快、易觀察。Hp呈粉紅色,多數(shù)成片分布,S形,螺旋形,海形或桿狀。另外組織切片,免疫鍍銀染色后,免疫熒光顯微鏡觀察。操作稍復(fù)雜,特別要注意Hp抗原性的保存,否則不易成功。此法敏感性和特異性較高。切片Warthin-Starry銀染,方便,易觀察,也是廣泛采用的一種。

1.2 電鏡對(duì)Hp的超微結(jié)構(gòu)觀察

Hp表面光滑,兩端鈍圓,有1~6根帶鞘鞭毛。菌體長(zhǎng)約1.5μm~6μm,寬6.5μm,胃竇部Hp稍長(zhǎng),其它部位的較短,Hp呈彎曲形或S型、V型、環(huán)形、小球形及桿狀等,細(xì)菌常多個(gè)或散在分布于胃粘膜上皮微絨毛之間,Hp存在處病理主要異常為上皮微絨毛減少,消失、斷裂、部分不規(guī)則包繞菌體。

1.3 快速尿素酶試驗(yàn)

目前已有試劑盒,使用方便、快速、便宜,但特異性不強(qiáng)。Hp能產(chǎn)生大量的尿素酶,凡是產(chǎn)生尿素酶的細(xì)菌如空腸螺桿菌,變形桿菌等,都水解尿素,也呈陽(yáng)性結(jié)果。

1.4 Hp細(xì)菌培養(yǎng)

一般條件難以生長(zhǎng),生長(zhǎng)環(huán)境要求5%O2,5%~10%CO2,85%N2,5%~10%H2,37℃3d~5d。Hp為微嗜氧菌,此菌需血瓊脂(Skirrow配方)或巧克力培養(yǎng)基,在培養(yǎng)基中必須加入抗生素(萬(wàn)古毒素,多粘菌素,兩性毒素B等),以抑制其它雜菌生長(zhǎng)。菌落較小,光滑、濕潤(rùn)、半透明灰色。扁圓形,微隆起。培養(yǎng)長(zhǎng)時(shí)間可見(jiàn)溶血現(xiàn)象。能產(chǎn)生多種酶,尿素酶(+)、觸酶(+)、氧化酶(+)、馬尿酸水解(-)、靛基質(zhì)(-)、H2S(+)。

1.5 Hp血清檢測(cè)法

上述幾種方法均需通過(guò)胃鏡檢查完成。由于取材困難,又建立免疫學(xué)方法,采用血清樣本。酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)敏感性強(qiáng),穩(wěn)定。Hp培養(yǎng)陽(yáng)性者,發(fā)現(xiàn)所有患者血清含抗Hp抗體,IgG明顯升高,Hp抗體效價(jià)在1:320以上者,確定有Hp胃感染。補(bǔ)體固定試驗(yàn)操作繁鎖,敏感性低,應(yīng)用受限。另外血球凝集試驗(yàn),是將Hp制成抗原,患者血清對(duì)Hp的H抗原有凝集反應(yīng)。但特異性和敏感性均較差。

1.6 C13和C14尿素的呼吸試驗(yàn)

尿素很可能是Hp生長(zhǎng)因素之一,在胃粘膜上皮細(xì)胞結(jié)合處有很高濃度尿素存在,Hp分解尿素為CO2和NH4+,而Hp感染者尿素顯著降低。據(jù)述上述原理,患者口服C13或C14標(biāo)記的尿素溶液。兒童多采用C13,1mg/kg,構(gòu)術(shù)緣酸為試,隨之每10min收集一次呼氣標(biāo)本,持續(xù)3h測(cè)定呼氣中CO2含量。此法安全可靠快速不需要胃組織活檢,13C系天然放射性同位素,可反復(fù)使用,價(jià)格便宜。因條件限制不能普及。

1.7 氣相色譜分析法

能對(duì)Hp菌體脂肪酶化學(xué)結(jié)構(gòu)中DNA的堿基(G+C)含量進(jìn)行分析,能測(cè)定Hp菌株的屬性,在科研和臨床上都具有實(shí)際指導(dǎo)作用。

1.8 聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasewww.med126.com chain reaction,PCR)技術(shù)

PCR為近年來(lái)新開(kāi)發(fā)的一種分子生物學(xué)方面的最新試驗(yàn),技術(shù)簡(jiǎn)單快速、可靠、敏感性高、特異性強(qiáng)。而且能準(zhǔn)確地評(píng)估治療前后Hp菌株屬型以及是否根除。另外對(duì)胃粘膜以外的Hp,如胃液、口腔、糞便中常規(guī)法不易檢出的Hp菌株也能檢出。其次PCR還可用于人群普查,觀察Hp感染并確定其來(lái)源和途徑。PCR技術(shù)的廣泛應(yīng)用,對(duì)Hp流行病學(xué)、傳染病學(xué)及遺傳病學(xué)的研究方面引到重要作用。

2 Hp特性及感染情況

我院觀察了有胃部明顯癥狀的慢性患者362例,Hp陽(yáng)性1157例(84.9%)。其中慢性胃炎占Hp陽(yáng)性為81.4%。目前已被公認(rèn)Hp是慢性胃炎的病因,雖然十二指腸潰瘍病病因涉及多種因素。但“無(wú)Hp無(wú)潰瘍”的觀點(diǎn)得到更多人的肯定,我院檢查的消化性潰瘍中,Hp陽(yáng)性者為96.4%,也證明了這觀點(diǎn)。關(guān)于Hp是如何引起慢性胃炎和消化性潰瘍等病的病理機(jī)制,這是一種復(fù)雜的綜合性過(guò)程,首先Hp經(jīng)食物——口進(jìn)入人體的,在胃粘膜中為寄生創(chuàng)造理想環(huán)境,引起機(jī)體炎癥或潰瘍,是Hp進(jìn)行物理化學(xué)、免疫反應(yīng)的結(jié)果。

Hp首先產(chǎn)生大量尿素酶,迅速分解尿素為堿性氨和CO2。氨呈云霧狀包圍Hp、使胃上皮細(xì)胞表面的pH升高,為Hp可在酸性環(huán)境中生存創(chuàng)造重要條件。氨能干擾三羥酸循環(huán),可分嗜中性粒細(xì)胞產(chǎn)生的氫氯酸結(jié)合,產(chǎn)生細(xì)胞毒性產(chǎn)物,如羥胺和氯化銨。氨對(duì)胃粘膜表面電荷梯度和通透性有影響,使H+回滲。氨對(duì)胃上皮細(xì)胞有直接毒害作用,細(xì)胞損傷與氨的濃度有直接關(guān)系,即與Hp數(shù)量和菌株密切。另外生成的CO2又抑制HCO3的產(chǎn)m.f1411.cn/wszg/生,增強(qiáng)胃蛋白酶對(duì)粘液的降解,因而破壞胃粘液碳酸鹽屏障,損傷胃粘膜組織。

Hp螺旋形,具有1~6條鞭毛,能在粘液中具有活躍的運(yùn)動(dòng)能力,侵入粘膜上皮細(xì)胞,破壞粘膜完整性,依靠其菌體表面菌毛樣網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),穩(wěn)定地定居于胃粘膜下和胃粘膜上皮之間。另外在胃粘膜內(nèi)含有可與Hp特異性結(jié)合的甘油脂類(lèi)受體。受體,配體之間相互作用,使定居更穩(wěn)定。Hp定居后呈克隆性生長(zhǎng),產(chǎn)生多種物質(zhì)如脂多糖,細(xì)胞毒素和多種酶類(lèi),導(dǎo)致炎性細(xì)胞浸潤(rùn),細(xì)胞變性壞死。

Hp產(chǎn)生蛋白酶、脂肪酶和磷酯酶能夠隆解胃粘液的主要成分粘液糖蛋白,脂質(zhì)和脂蛋白,破壞粘膜層的完整性。Hp還產(chǎn)生蛋白溶解酶,能隆解粘分子,使粘膜層溶解成小窟穴,Hp逐漸向深部運(yùn)動(dòng),侵入上皮細(xì)胞進(jìn)入微絨毛間隙,再向胃小凹活動(dòng),深達(dá)腺頸部,Hp與胃粘膜分泌細(xì)胞有親和性,Hp多粘附在分泌細(xì)胞表面,而停止前進(jìn),在此導(dǎo)致胃粘膜的損傷和炎癥產(chǎn)生。另外磷脂酶可通過(guò)磷脂的破壞和溶血卵脂的產(chǎn)生損害上皮細(xì)胞。

Hp能產(chǎn)生大量的超氧化物岐化酶和過(guò)氧化氫酶能削弱主巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的氧化殺傷機(jī)制有抵抗作用。另外Hp能分解各種你謝產(chǎn)物與宿主胃上皮細(xì)胞作用,引起炎癥浸潤(rùn),使細(xì)胞內(nèi)粘液消失,核極性喪失、核腫大,出現(xiàn)中性粒細(xì)胞及嗜酸粒細(xì)胞大量浸潤(rùn)。

Hp某些菌株的脂多糖含有脂質(zhì)A、與革蘭陰生細(xì)菌的內(nèi)毒素活性有關(guān)的物質(zhì)。內(nèi)毒素能夠刺激巨噬細(xì)胞釋放多細(xì)胞激肽,如白細(xì)胞介素—1和腫瘤壞死因子,引起胃部炎癥和胃粘膜變性。脂質(zhì)A還能激活補(bǔ)體引起炎癥反應(yīng),影響胃粘膜上皮細(xì)胞的正常功能。

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