本研究用間接ELISA法檢例患者和健康輸血員血清中抗HpIgA、IgG同時還檢測了胃粘膜中的Hp,以探討Hp抗體測定的臨床意義。
1 材料和方法
1.1 材料
本組217例患者經胃鏡及胃粘膜組織學診斷為十二指腸球部潰瘍(DU)48例,胃潰瘍(GU)27例,慢性萎縮性胃炎(CAG)18例,慢性清表性胃炎(CSG)96例,復合性潰瘍(CU)7例,胃癌(GCa)14例,胃粘膜正常2例。慢性胃炎中活動性胃炎(ACG)54例,非活動性(NACG)60例。所有患者均抽取空腹靜脈血,此外還收集了80例健康輸血員血清測抗HpIgA、IgG。
1.2 方法
①胃粘膜內Hp菌檢測活檢粘膜直接涂片檢查及Hp的分離培養(yǎng)鑒定均參照張振華所報道的方法。②ELISA方法:從患者胃粘膜中培養(yǎng)出的7株Hp菌分離純化,超聲粉碎后在4℃下1500g離心30min,取上清蛋白定量后作抗原。用50mg/ml的抗原包被聚苯乙稀反應板,用間接ELISA法測定,每板均設標準陽性和陰性對照,將兩者OD值用作為質控,每板此值之差在±0.5范圍內。結果用特測標本OD值與標準陽性OD值之比來表示,該比值在血清IgA≥0.6,在IgG≥0.5為陽性,在胃液IgA≥0.145為陽性。③吸收抑制試驗:用7例在ELISA試驗中高效價IgA、IgG的Hp感染者的血清混合后從1:10開始對倍稀釋至1:160,然后分別用Hp、空腸彎曲菌(CJ)及大腸桿菌完整的細菌和Hp抗原吸收后,按上述方法做ELISA。
計數(shù)資料用卡方檢驗,計量資料用t檢驗。
2 結果
Hp陽性患者血清中抗HpIgA、IgG含量均顯著高于Hp陰性者(P<0.01)。與細菌學比較其敏感性分別為92.1%和95.7%,特異性分別為91.1%和88.5%,符合率分別為71.7%和93.2%(表1)?梢钥闯霾煌膊≈g的血清抗HpIgA和LgG含量有顯著差異(P<0.01),兩組比較發(fā)現(xiàn)血清IgA含量在ACG組顯著高于除CU外的其它各組(P<0.05,P<0.01),消化性潰瘍各組顯著高于NACG組(P<0.01),2例組織學正常者IgA、IgG分別為0.44和0.37,80例健康輸血員血清抗HpIgA,IgG的含量和陽性率均顯著低于ACG,GU,DU及GCa組(P<0.01,P<0.05)。研究表明,血清Hp抗體與胃炎的嚴重程度有關,中重度胃炎血清抗HpIgA,IgG的陽性率為82.4%和79.0%,顯著高于輕度胃炎的45.6%59.7%(P<0.01,P<0.05)。但Hp抗體含量和陽性率在淺表性胃炎和萎縮性胃炎之間無顯著差異(P<0.05表2)。
表1 胃粘膜內Hp和血清Hp抗體的比較
胃粘膜Hp | n | IgA | IgG | ||
X±S | 陽性數(shù)(%) | X±S | 陽性數(shù)(%) | ||
陽性 | 139 | 0.79(0.19) | 128(92.1) | 0.65(0.13) | 133(95.7) |
陰性 | 78 | 0.50(0.1) | 7(9.0) | 0.45(0.13) | 9(11.5) |
表2 各種胃部疾病血清抗HpgA,IgG比較
病 種 | n | IgA | IgG | ||
X±S | 陽性數(shù)(%) | X±S | 陽性數(shù)(%) | ||
ACG | 54 | 0.82(0.2) | 49(90.7) | 0.69(0.1) | 51(94.4) |
NGCG | 60 | 0.53(0.2) | 22(36.7) | 0.47(0.1) | 23(38.3) |
GU | 27 | 0.71(0.2) | 19(70.7) | 0.59(0.2) | 20(74.1) |
DU | 48 | 0.71(0.2) | 31(64.6) | 0.57(0.2) | 34(70.8) |
CU | 7 | 0.86(0.4) | 5(71.2) | 0.58(0.1) | 5(71.2) |
GCa | 14 | 0.68(0.2) | 8(57.1) | m.f1411.cn/shouyi/0.55(0.1) | 8(57.1) |
RG | 5 | 0.54(0.1) | 120.0 | 0.52(0.2) | 1(20.0) |
輸血員 | 80 | 0.47(0.2) | 27(33.8) | 0.43(0.2) | 25(31.3) |
Hp陽性患者胃液中抗HpIgA顯著高于Hp陰性者(P<0.01),與細菌學結果比較敏感性,特異性與符合率分別為96.4%92.9%和95.3%(表3)。
表3 胃粘膜內Hp的檢出率和胃液抗HpIgA的比較
胃粘膜 | n | X±S | 陽性數(shù) |
陽性 | 57 | 0.438(0.234) | 55(96.5) |
陰性 | 28 | 0.101(0.045) | 2(7.1) |
不同疾病之間胃液抗HpIgA含量有顯著差異(表4,P<0.01),兩組比較發(fā)現(xiàn)ACG組、消化性潰瘍各組和CGa組顯著高于NACG組(P<0.05)。此外中重度胃炎胃液抗HpIgA的陽性率為76.6%,顯著高于累度胃炎的40.0%(P<0.05)。
表4 各種胃部疾病胃液抗HpIgA結果
病種 | n | X±S | 陽性數(shù)(%) |
ACG | 24 | 0.497(0.252) | 22(91.7) |
NACG | 21 | 0.162(0.161) | 7(33.3) |
GU | 15 | 0.281(0.212) | 10(66.7) |
DU | 15 | 0.269(0.208) | 12(80.0) |
CU | 3 | 0.567(0.298) | 2(66.7) |
GCa | 5 | 0.502(0.159) | 4(80.0) |
無論是完整的Hp菌還是超聲粉碎提取的Hp抗原與Hp陽性血清共同溫育后都能使血清中抗HpIgA和IgG效價明顯下降,而用大腸桿菌和Cj吸收后的血清抗體僅有少許下降,此結果證明本試驗具有特異性。
3 討論
本研究發(fā)現(xiàn)Hp陽性者血清抗HpIgA,IgG的陽性率顯著高于Hp陰性者。與細菌學檢查比較其敏感性、特異性和符合率高達95%~88%,與國外文獻報道相似。吸收抑制試驗證實本研究所用ELISA法測得的血清Hp抗體可定為特異的針對Hp的免疫反應。因此,ELISA陽性結果強有力支持Hp感染。本研究表明,血清中抗HpIgA、IgG密切反映了消化性潰瘍的存在和胃炎的組織學變化。血清Hp抗體在ACG組的陽性率達90%以上,在消化性潰瘍?yōu)?7%和71%,而在NACG中為36%和38%。健康輸血員血清中抗Hp抗體顯著低于消化性潰瘍和慢性胃炎。此外,中重度胃炎血清中Hp抗m.f1411.cn/pharm/體的含量和陽性率顯著高于輕度胃炎。上述結果表明Hp的血清檢測可用來診斷Hp感染和用作篩選胃鏡檢查患者,這將有助于那些不宜做胃鏡檢查患者的診斷,并可用于Hp感染的流行病學調查及評價和追蹤抗Hp治療效果。
Hp寄居不但可引起宿主的全身免疫反應,而且引起胃腸道的局部免疫反應。本研究顯示,Hp陽性者胃液中抗HpIgA顯著高于Hp陰性者,與細菌學比較其敏感性、特異性和符合率高達96%至92%,高于國外文獻報道。本研究結果還表明,胃液中抗HpIgA與消化性潰瘍及胃炎的存在和組織變化密切相關。ACG組及消化性潰瘍各組陽性率顯著高于NACG組,中重度胃炎顯著高于輕度胃炎。局部分泌性IgA的確切作用尚不清楚。本研究胃液內抗HpIgA檢測的敏感性、特異性均高于血清學試驗,這說明局部免疫反應與Hp感染的關系比全身免疫反應更為密切,故檢測胃液內抗HpIgA可作為血清學試驗的補充,兩者結合可進一步提高Hp感染的免疫學診斷準確性。