本品系用帶有人α2a型干擾素基因重組質粒的大腸桿菌，經發(fā)酵培養(yǎng)及單克隆抗體親和層析后精制而成。用于治療某些病毒性疾病及部分腫瘤疾病。
1 菌種
1.1菌種來源
基因工程α2a干擾素工程菌由帶有人α2a干擾素基因的重組質粒轉化大腸桿菌而來。投產的工程菌需經衛(wèi)生部批準。
1.2菌種特性
菌種表達穩(wěn)定，表達水平符合投產菌種要求。
1.3制造用菌種庫的建立
從原始菌種庫傳出，經擴大后凍干保存，或由上一代制造用菌種庫傳出，擴大后凍干保存作為制造用菌種庫，但每次只限傳三代。每批制造用菌種庫均進行下列檢定，合格后方可投產。
1.3.1劃種LB瓊脂平板
應呈典型大腸桿菌集落形態(tài)，無其他雜菌生長。
1.3.2涂片革蘭氏染色
在光學顯微鏡下觀察，應為典型的革蘭氏陰性桿菌。
1.3.3對抗生素的抗性
應與原始菌株相符。
1.3.4電鏡檢查
應為典型大腸桿菌形態(tài)，并證明無支原體、病毒樣顆粒及其他微生物污染。
1.3.5生化反應
應符合大腸桿菌生物學性狀。
1.3.6干擾素的表達量
在搖床培養(yǎng)，應符合原始菌種的表達量。
1.3.7質粒檢查
應做該質粒的酶切圖譜，并應與原始質粒相符。
1.3.8表達的干擾素型別
應用標準抗α干擾素血清做中和試驗，證明型別正確。
1.4生產菌種
從制造用菌種庫傳出供生產用的菌種，稱為生產菌種。
1.4.1生產菌種的制備及檢定
取制造用菌種庫凍干菌種開啟后劃種LB平板2～3塊，培養(yǎng)后挑取平板中5～10個菌落，分別培養(yǎng)后保存，然后每個菌落分別進行干擾素表達量測定，至少重復一次，選出其中干擾素表達量最高的一份，供生產制備種子液用，其表達量應符合原始菌種的表達量。
1.5種子液
從生產菌種選出的菌種供做發(fā)酵用的稱“種子液”。種子液的制備：將1.4.1項檢定合格的生產菌種，根據實際需要做擴充傳代，作為罐培養(yǎng)的種子液。
2 發(fā)酵培養(yǎng)
2.1空罐滅菌和實罐滅菌嚴格按照使用說明書要求操作。
2.2發(fā)酵培養(yǎng)基
應為適于發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基，根據菌種的抗生素抗性，培養(yǎng)若中允許加入少量抗生素，但應盡量避免含有β椖邗０防囁股亍?/P>
2.3發(fā)酵培養(yǎng)參數(shù)
根據工程菌和發(fā)酵工藝要求設置和變換各項培養(yǎng)參數(shù)。
3 收集菌體
用離心法或其他適宜方法收集菌體，菌體可在?/FONT>20℃下保存1年。
4 菌體裂解
用鹽酸胍或溶菌酶或高壓勻漿泵等適宜方法裂解菌體。
5 制備粗制干擾素
菌體裂解后經離心所得上清液即為粗制干擾素。
6 純化
粗制干擾素經單克隆抗體親和層析等純化步驟后即精制成“干擾素半成品原液”。
7 加白蛋白
取干擾素半成品原液檢定合格后，立即另入適量人白蛋白保護劑，即為“加人白蛋白半成品”，保存于?/FONT>30℃。
8 稀釋、除菌過濾
將“加人白蛋白半成品”用無熱原生理鹽水稀釋至所需濃度，補加人白蛋白，使最終含量1%～2%。然后用0.22μm孔徑濾膜除菌，除菌后抽樣進行干擾素效價測定，熱原質試驗和無菌試驗，合格后進行分裝凍干。
9 分裝、凍干
9.1 每支安瓿分裝1ml，內含α2a干擾素100或300萬IU。
9.2 凍干過程制品溫度不得超過33℃。
9.3 凍干后成品置10℃以下干燥處保存，成品檢定合格后進行包裝。
10 半成品檢定
每批半成品抽樣進行10.1～10.8項檢定。啟開新菌種生產的前3批或生產條件有較大改變時進行10.9～10.12項檢定。
10.1 效價測定
用細胞病變抑制法，Wish細胞/VSV為基本檢測系統(tǒng)，用國家參考品校準為IU。
10.2 蛋白含量
用Lowry法測定。
10.3 比活性
應≥108Iumg蛋白。
10.4 純度
10.4.1 電泳純度
用非還原型SDS?/FONT>PAGE法，加樣量不低于5μg，經掃描儀掃描純度應在95%以上，聚合體不得超過10%。
10.4.2 高效液相色譜純度
用280nm檢測，應是一個吸收峰或主峰占總面積95%以上。
10.5 分子量
用還原型SDS?/FONT>PAGE法，加樣量不低于5μg，α2a干擾素分子量應為19KD±10%。
10.6 殘余外源性DNA含量
用同位素或生物素標記探針法測定，每劑m.f1411.cn/wsj/量中殘余外源性DNA應低于100pg。
10.7 殘余鼠IgG含量
用酶標或其他敏感方法測定，每劑量（20μg)的鼠IgG含量應在100ng以下。
10.8 殘余工程菌蛋白含量
用酶標或其他敏感方法測定，殘余工程菌蛋白不得超過總蛋白的0.02%。
10.9 殘留抗生素活性
半成品中不應有殘余抗生素活性存在。
10.10 肽圖測定
應符合α2a型干擾素圖形，批與批之間圖形應一致。
10.11 等電聚集
測定等電點，α2a型干擾素等電點應5.7～6.7范圍內。
10.12 紫外光譜掃描
檢查半成品的吸收光譜，批與批之間應一致，α2a干擾素的最大吸收光譜應為280±3nm。
11 除菌半成品檢定
11.1 效價測定
同10.1項。
11.2 無菌試驗
按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。
11.3 熱原質試驗
按《生物制品熱原質試驗規(guī)程》進行，注射劑量按家兔體重注射20萬IU/kg，判定標準按該規(guī)程4.1項要求進行。
12 成品檢定
12.1 外觀
應為白色或微黃色疏松體，另入1ml滅菌注射用水溶解后，不得含有肉www.med126.com眼可見的不溶物。
12.2 pH值
pH值應為6.5～7.5。
12.3 效價測定
同10.1項。其效價應為標示量的80%～150%。
12.4 水分含量
應≤3%（g/g)。
12.5 鑒別試驗
用中和試驗法，其抗病毒活性能被抗α2a型干擾素血清所中和或用免疫印染法。
12.6 HBsAg檢測
用敏感度為1ng/ml以下的試劑盒測定，應為陰性。
12.7 無菌試驗
同11.2項，每批抽樣不少于10支。
12.8 熱原質試驗
同11.3項。
安全試驗
12.9.1 豚鼠試驗
用體重300～400g豚鼠2只，每只腹側皮下注射干擾素1ml，觀察7天，局部無紅腫、壞死、體重增加者為合格。
12.9.2 小白鼠試驗
用體重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射干擾素0.5ml，觀察7天，動物全部存活，每只體重增加判為合格。
13 保存與效期
保存于10℃以下干燥處。自效價檢定合格之日起效期為2年6個月。
