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動脈粥樣硬化:第三節(jié) 轉基因小鼠模型與動脈粥樣硬化

隨著分子生物學的發(fā)展和脂代謝相關蛋白基因的克隆,序列測定及表達調控組件研究的深入,為探討載脂蛋白及其他脂代謝相關蛋白和AS的關系,以期建立As TGM模型奠定了基礎。現(xiàn)已對ApoAⅠ、AⅡ、AⅣ、B、CⅠ、CⅢ、E和Apo(a),以及LDL-R、CETP、LRP及LPL等進行了轉基因動物…

隨著分子生物學的發(fā)展和脂代謝相關蛋白基因的克隆,序列測定及表達調控組件研究的深入,為探討載脂蛋白及其他脂代謝相關蛋白和AS的關系,以期建立As TGM模型奠定了基礎,F(xiàn)已對ApoAⅠ、AⅡ、AⅣ、B、CⅠ、CⅢ、E和Apo(a),以及LDL-R、CETP、LRP及LPL等進行了轉基因動物研究,先后建立了各種TGM模型。為深入了解脂蛋白運輸基因如何調控以及高表達與低表達在調控脂蛋白代謝中的主要作用和為研究脂蛋白代謝紊亂及AS等提供更好的實驗動物模型。臨床資料表明,脂蛋白代謝等紊亂與AS的敏感性密切相關,特別是各種Apo基因異常表達引起的高脂血癥和AS以及各種Apo TGM在此領域的研究已是極其活躍與有價值。

Rubin等將人ApoA-Ⅰ基因導入,C57BL/6這一鼠采用以評價轉基因對飲食所致AS的影響時發(fā)現(xiàn),表達人ApoA-Ⅰ的TGM其血漿所含人ApoA-Ⅰ和HDL濃度高于非轉基因C57BL/6小鼠,人ApoA-Ⅰ基因表達可減少動脈竇泡沫細胞損害區(qū)域,這表明ApoA-Ⅰ基因表達伴隨著HDL-C水平的提高可抑制AS的產生。因此,可應用ApoA-ⅠTGM探索高膽固醇飲食或Probucol等降血脂藥物引起的HDL-C和ApoA-Ⅰ水平改變的機制。Williamson等發(fā)現(xiàn)ApoA-Ⅰ基因剔除鼠ApoA-Ⅰ水平低下并伴有HDL-C低下,而表達人ApoA-Ⅱ的TGM,其HDL-C并不增加,小鼠原有的ApoA-Ⅰ和A-Ⅱ也不減少。這也是臨床上所見到血漿Apo量與HDL-C之間無相關性的證據(jù)之一。研究TGM可發(fā)現(xiàn)ApoA-Ⅱ與影響HDL量的ApoA-Ⅰ不同,它主要影響HDL的質。Schultz等將分別表達人ApoA-Ⅰ和A-Ⅱ的TGM雜交后發(fā)現(xiàn),同時表達ApoA-Ⅰ、A-Ⅱ基因的TGM抑制AS形成的能力弱。同時也說明并非所有HDL顆粒都有抗AS作用。

已有報道P1噬菌體文庫中分離出含有5’端(19kb)和3’端(14kb)側翼序列在內的整個ApoB100基因(約43kb)的人ApoB克隆。將其導入小體內發(fā)現(xiàn)這種TGM血漿中人ApoB100水平顯著增加。另外人ApoB100基因轉錄在小鼠體內能被有效地剪輯。分析ApoBTGM脂蛋白譜發(fā)現(xiàn)與人相似,含有高水平LDL-C。這一模型有助于高膽固醇血癥與低β脂蛋白血癥等發(fā)病機理的研究。

研究ApoC-ⅢTGM發(fā)現(xiàn)小鼠血漿甘油三酯(TG)水平隨ApoC-Ⅲ轉基因的表達增加而增高,通常TG含量比正常小鼠高二倍以上。因此ApoC-ⅢTGM是第一個人為原發(fā)性高TG的動物模型。有推測認為高TG血癥的形成,一是因為VLDL在體內滯留時間延長而非殘余顆粒累積所致,二是由于改變了Apo表面組成或/和游離脂肪酸升高所引起。這些研究提示ApoC-Ⅲ基因的表達能調節(jié)人體TG水平,人ApoC-Ⅲ基因過量表達促進AS的形成。

Shimano等通過把大鼠ApoE基因與金屬硫蛋白啟動子一起導入小鼠體內,所制備的TGM血漿ApoE水平是正常對照組的4倍,并可觀察到VLDL和LDL-C的急劇下降。此外,這種TGM對飲食所致高膽固醇血癥具有耐受性。ApoE結構基因位點存在多態(tài)性。在若干變異型易形成Ⅲ型高脂血癥(HLP),故這一模型期望能用于Ⅲ型HLP發(fā)病機理的研究。近年運用基因打靶與基因剔除技術已成功地制備出一類新的ApoETGM模型。Plump等發(fā)現(xiàn)缺失ApoE基因的TGM血漿LDL和VLDL水平均顯著高于正常對照組,HDL水平則低于正常小鼠。Paszty等研究發(fā)現(xiàn),表達人ApoA-Ⅰ且HDL含量高的ApoE基因剔除小鼠比不表達人ApoA-Ⅰ且HDL含量低的ApoEm.f1411.cn/hushi/基因剔除小鼠難以形成AS。

Chiesa等通過把鼠轉鐵蛋白啟動子與Apo(a)cDNA相連接,導入小鼠體內制成Apo(a)TGM。轉基因最初在肝臟表達,并在腦、睪丸、心臟和腎臟中可檢出少量Apo(a)mRNA和蛋白質。Apo(a)TGM動脈窒亦可見明顯損害,這提示Apo(a)本身就可致AS,其作用待探討。Callow等將過度表達ApoB的TGM與表達Apo(a)的TGM進行雜交,制備出能同時表達人ApoB與Apo(a)的TGM。這種TGM能有效地裝配出與人血漿Lp(a)顆粒非常相似的Lp(a)分子。Liu等研究ApoA-Ⅰ與Apo(a)轉基因表達間的相互關系時發(fā)現(xiàn),僅表達Apo(a)的TGM與對照組小m.f1411.cn/job/鼠脂蛋白譜相似,而其對飲食誘導所致的AS敏感性顯著增加。同時表達Apo(a)與ApoA-Ⅰ的TGM其HDL濃度是僅表達Apo(a)的TGM的2倍,而其形成早期AS斑塊的可能性僅為前者的1/20。由于Lp(a)是AS發(fā)病的獨立危險因子,而Apo(a)與纖溶酶原(PLG)具有高度同源性,故Apo(a)TGM是研究Lp(a)發(fā)病關聯(lián)方面非常有意義的動物模型。

糖尿病、腎病等疾病與心血管疾病并發(fā)癥密切相關。近年來有關這些疾病的轉基因動物模型也相繼建立。Allison等曾以大鼠的胰島素啟動子調節(jié)小鼠第一類組織相溶性抗原復合物(MHC-1)基因,在TGM的胰島β細胞表達,引起胰島異常,胰島素分泌降低從而建立了胰島素依賴型糖尿病(IDDM)TGM模型。Marban等將8.8kb的胰島素基因注射到小鼠受精卵原核,培育出高胰島素血癥TGM模型。Mackey等報道用SV40早期區(qū)基因進行轉基因動物研究,建立了腎小球硬化和腎囊腫TGM模型。Doi等通過生長激素和生長激素釋放因子的TGM研究,建立了進行性腎小球硬化TGM模型等。隨著轉基因技術的不斷完善,人類疾病的的轉基因動物模型不斷涌現(xiàn),為攻克心血管疾病提供了可選擇性的動物模型與研究手段。

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