雞李氏桿菌病——雞病大全
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概 述雞李氏桿菌病(Avian Listeriosos)又稱禽
單核細(xì)胞增多癥,是由李氏桿菌引起禽類的一種散發(fā)性傳染病。雞感染后主要表現(xiàn)為單核細(xì)胞增生性腦膜腦炎、壞死性肝炎和
心肌炎等癥狀。李氏桿菌還易感染家畜和人,重者表現(xiàn)為腦膜腦炎、
流產(chǎn)、
敗血癥和單核細(xì)胞增多,輕者表現(xiàn)為
結(jié)膜炎。雞李氏桿菌病引起雞散發(fā)性敗血癥,死亡率通常較低,但有時也可高達(dá)52%~100%。本病死亡率高低常與是否存在其他疾病混合感染有關(guān)。病 原李氏桿菌是一種球桿菌,大小為0.4~0.6μm×0.5~2μm,在
兔血瓊脂培養(yǎng)基上生長可長成長達(dá)3~30μm的菌絲。普通瓊脂培養(yǎng)出的菌體較體內(nèi)和含1%
葡萄糖瓊脂培養(yǎng)出的小,菌體一般為0.4~0.6μm。菌體多呈單個散在排列,有時呈V字形成對排列,有時呈短鏈排列。李氏桿菌在22℃和37℃時能生長,22~25℃時可形成4根鞭毛,具有運(yùn)動性。而在37℃時菌體一般不長鞭毛或只長
單鞭毛,運(yùn)動性減弱以至消失。本菌無芽胞、一般無莢膜,革蘭氏染色陽性。但是,在血清
葡萄糖蛋白胨中能形成粘多糖莢膜。老齡培養(yǎng)物有時脫色為陰性,菌體染色常呈兩極濃染,容易誤認(rèn)為是雙球菌。本菌屬需氧兼性厭氧菌,在普通瓊脂上生長不好,在含血清或血液的瓊脂上生長較好,在血瓊脂上生長形成狹窄的β溶血環(huán)。當(dāng)培養(yǎng)基中含1%葡萄糖及2%~3%
甘油時生長更佳。用亞碲酸鉀瓊脂37℃培養(yǎng)24h,呈圓形、隆起、濕潤,直徑平均為0.6mm的黑色菌落。此菌在麥康凱培養(yǎng)基上不生長。據(jù)報道,胰蛋白胨瓊脂是培養(yǎng)和保存活菌的最好培養(yǎng)基,菌體在此培養(yǎng)基上具有純凈透明的特點(diǎn),低倍鏡下菌落有細(xì)膩的表面結(jié)構(gòu)和藍(lán)綠色的特殊光澤。肉湯培養(yǎng)呈均勻渾濁,有顆粒狀沉淀,不形成菌環(huán)及菌膜。在半固體培養(yǎng)基上,細(xì)菌沿穿刺線呈彌散性生長,距瓊脂表面數(shù)毫米處出現(xiàn)一個倒傘形生長區(qū),呈松樹狀。李氏桿菌生長范圍為pH5.6~9.8,當(dāng)小于pH5.6時會死亡。此菌無耐酸能力,在糖發(fā)酵管中分離不到活菌。生長溫度為25~42℃,一般選擇30~38℃培養(yǎng)。動力觀察的最佳溫度為22--25℃培養(yǎng)。能發(fā)酵多種糖類,對葡萄糖、水楊苷,37"C24h內(nèi)產(chǎn)酸,對乳糖、
麥芽糖、蔗糖、阿拉伯糖、山梨醇、甘油和糊精等3~10天產(chǎn)酸或不發(fā)酵,而對
棉籽糖、
肌醇、菊糖、
甘露醇等不發(fā)酵。甲基紅、MR、VP、過氧化氫酶、七葉苷、接觸酶陽性。
尿素酶、明膠、 H2S試驗(yàn)陰性。不還原硝酸鹽,
石蕊牛乳在24h微酸,但不凝固。李氏桿菌對物理和化學(xué)因素抵抗力較強(qiáng)。在土壤、糞便、青貯飼料和干草內(nèi)能長期存活。對堿和鹽的耐受力較強(qiáng),在20%
食鹽溶液內(nèi)可長期存活,2.5%苛性鈉經(jīng)20min細(xì)菌才能被殺死。70%酒精、2.5%石炭酸經(jīng)5min殺死。60~70℃經(jīng)5~10min可殺死。對
青霉素G、氨芐青霉素、
四環(huán)素、
氯霉素、
新霉素和
磺胺嘧啶鈉敏感,其中敏感性最高的是氨芐青霉素。根據(jù)菌體O抗原和鞭毛抗原的不同,最初用凝集素吸收試驗(yàn)法曾查出本菌有4種抗原型(即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型),其中有的可再分為若干亞型,Ⅰ型見于豬、禽、嚙齒類,Ⅳ型見于畜禽,人類4個型都可致病,在國外Ⅰ型和Ⅳ型有商品化抗血清。后來又鑒定了12個血清型變種。
流行病學(xué)本病易感動物種類甚廣,雞、鴨、火雞、鵝和金絲
雀等對本病易感,其中以各種不同年齡的雞更易感,多呈敗血經(jīng)過。實(shí)驗(yàn)動物中,小鼠、家兔、豚鼠對本菌易感,皮下注射、肌肉注射易引起死亡;Anton試驗(yàn)表明,家兔或豚鼠點(diǎn)眼,24~36h后可出現(xiàn)膿性結(jié)膜炎;疾∏蓊惡蛶Ь呤潜静〉膫魅驹础T谇蓊惣S便和鼻分泌物中可檢出此菌,但在蛋內(nèi)不含此菌。本病的傳播途徑尚不完全了解。可通過消化道、呼吸道、眼結(jié)膜及受傷的皮膚感染。污染的飼料、飲水和吸血昆蟲可能是主要的傳播媒介。李氏桿菌可在土壤中存活1~2年,并能抵抗反復(fù)凍融,接觸污染土壤也可感染本病。李氏桿菌在禽類糞便和鼻粘膜中均可短期存在,通常因接觸病禽而迅速傳播此病。本病的流行特點(diǎn)為散發(fā)型,偶爾呈地方性流行,發(fā)病率低,致死率高(52%~100%)。發(fā)病季節(jié)多在3~5月份,冬季亦有發(fā)生。各種年齡的禽類都易感,但幼齡比成年禽易感,發(fā)病也較急,多呈敗血經(jīng)過。在冬季缺乏青飼料、
營養(yǎng)不良,氣候驟變,粘膜抵抗力低下,寄生蟲或沙門氏菌感染、
維生素A和維生素B缺乏時,均可構(gòu)成本病誘因。臨床癥狀李氏桿菌自然感染的潛伏期很不一致,一般為2~3周。本病主要危害2月齡以下的雛雞。發(fā)病前無明顯臨診癥狀,突然發(fā)病。病初精神萎頓,羽毛粗亂,離群孤偶,下痢,食欲不振,雞冠、肉髯發(fā)紺,病禽嚴(yán)重
脫水,皮膚呈暗紫色。隨病程發(fā)展,兩翅下垂,兩腿軟弱無力,行動不穩(wěn),臥地不起,倒地側(cè)臥,兩腿不停劃動。有的則表現(xiàn)為無目的地亂跑、尖叫,頭頸側(cè)彎、仰頭,腿部發(fā)生陣發(fā)性
抽搐,神志不清,最終死亡,病程1~3周。死亡率可高達(dá)85%以上。雞的李氏桿菌病多與寄生蟲病、雞白痢、雞
白血病等合并發(fā)生,可使癥狀復(fù)雜化。病理變化剖檢可見敗血癥變化。腦膜和腦血管明顯充血。心肌有壞死灶,
心包積液,心冠脂肪出血。肝臟呈
土黃色,腫大,并有黃白色壞死點(diǎn)和深紫色瘀血斑,質(zhì)脆易碎。脾臟腫大,呈黑紅色。腺胃、肌胃和腸粘膜出血,粘膜脫落呈卡他性炎癥。有的腹腔內(nèi)含有大量血樣物。腎亦腫大、炎癥變化。顯微鏡檢查,在變性或壞死的區(qū)域可觀察到大量的單核細(xì)胞浸潤,壞死區(qū)及其周圍可見革蘭氏陽性桿菌。腦組織變化,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生以及大腦髓質(zhì)形成血管套。在敗血癥時,常見肝化膿灶及心肌變性。肝、腦病變區(qū)以淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤為特征。診斷鑒別1.病原學(xué)檢查(1)涂片檢查:采病死禽的血液、肝、脾、腎、腦
脊髓液、腦組織等做觸片或涂片,革蘭氏染色,鏡檢有呈單個、V字形或并列的革蘭氏陽性小桿菌。(2)病原分離培養(yǎng):取腦、淋巴結(jié)或肝等病料,接種于兔鮮血瓊脂培養(yǎng)基、0.05%亞碲酸鹽胰蛋白瓊脂平板、0.1%葡萄糖血清肉湯、Martin瓊脂斜面和Martin肉湯培養(yǎng)基中分離培養(yǎng)。在血瓊脂上菌落周圍有溶血環(huán);亞碲酸鹽瓊脂上則呈黑色菌落;葡萄糖血清肉湯中呈均勻渾濁,有顆粒狀沉淀,不形成菌環(huán)及菌膜;Martin瓊脂斜面上可見乳白色、大小不一、圓形、邊緣光滑、透明的小菌落;Martin肉湯中呈均勻渾濁,
管底有黃色沉淀。(3)病原體鑒定:取典型的單個菌落經(jīng)純培養(yǎng)后進(jìn)行生化反應(yīng)。李氏桿菌能發(fā)酵多種糖類,如葡萄糖、麥芽糖、七葉苷、果糖、
海藻糖和水楊素等產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。緩慢發(fā)酵乳糖、蔗糖、阿拉伯糖、半乳糖、
鼠李糖、糊精、山梨醇和甘油。不液化明膠,接觸酶陽性,甲基紅與VP反應(yīng)陽性。不形成吲哚,不分解尿素,不能還原硝酸鹽。(4)動物試驗(yàn):病料制成懸液,以普通肉湯(如胰蛋白酶大豆肉湯,腦心浸液)以1:1稀釋,用研缽或勻漿器勻漿。將懸液通過腹腔、腦腔、靜脈注射兔子、小鼠或豚鼠,可很快引起試驗(yàn)動物敗血死亡。點(diǎn)眼,可出現(xiàn)化膿性結(jié)膜炎,不久發(fā)生敗血死亡。2.血清學(xué)診斷血凝抑制試驗(yàn)(HIA)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CF)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(AGP)和免疫熒光試驗(yàn)(IFA)等可用于本病的診斷。但由于李氏桿菌的自凝性,以及它與金色葡萄球菌、腸球菌等有共同抗原成分,易出現(xiàn)交叉反應(yīng),所以在運(yùn)用血清學(xué)診斷時受到很多限制。在國外血清I型和Ⅳ型有商品化抗血清可用于血清型鑒定。3.單克隆抗體檢測病原菌(1)應(yīng)用Farber等報道的診斷李氏桿菌鞭毛抗原的單克隆抗體ELISA檢測程序,該法可在2--3天內(nèi)從病料中檢出李氏桿菌,此法不能確定李氏桿菌的種間差異。(2)Buttman研制的15株李氏桿菌屬特異性單克隆抗體構(gòu)成的夾心ELISA檢測方法,可于增菌后24h內(nèi)報告陽性結(jié)果,最低菌濃度檢出為5×105/ml。(3)焦新安等研制的C11、B11和B153株單克隆抗體,采用間接免疫熒光和ELISA的方法可快速檢測出李氏桿菌。(4)范江潔于1995年研制的3株單克隆抗體(LJl0、ALM5和LBll),具有種間特異性。用LJIOA做包被抗體和酶標(biāo)抗體建立的夾心ELISA方法,測定人工模擬肉樣至少可測出含5個/g細(xì)菌的樣品,并在48h得出結(jié)果。(5)細(xì)胞株EM-TG1能穩(wěn)定分泌抗單核細(xì)胞增生李氏桿菌的特異單克隆抗體,以此特異的單克隆抗體建立的夾心ELISA方法能于20~24h內(nèi)檢測出含8~10個/g(ml)細(xì)菌的樣品。并可區(qū)分單核細(xì)胞增生李氏桿菌與非病原性李氏桿菌。4.應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)快速檢測李氏桿菌的方法Datta等研制成功的β溶血性李氏桿菌特異的DNA探針,以核酸雜交和PCR方法快速檢測單核細(xì)胞增生李氏桿菌,用核酸探針技術(shù)檢測李氏桿菌,每克樣品中污染一個細(xì)菌即可檢測出來,十分敏感、特異,且縮短了檢測時間。到目前為止,許多快速檢測方法還處于實(shí)驗(yàn)室研究階段,要能在實(shí)踐中快速、特異、方便地檢測此菌的方法仍有待于繼續(xù)研究。防治措施預(yù)防李氏桿菌病,需加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,禽舍定期消毒。本病對幼齡雛危害較大,因此加強(qiáng)育雛期的管理,提高機(jī)體抵抗力是預(yù)防本病的主要措施。同時,注意環(huán)境衛(wèi)生,做好防疫消毒工作,及時發(fā)現(xiàn)清除死雞,隔離治療病雞。場地、用具等用3%石炭酸、3%來蘇兒、2%火堿、5%漂
白粉等嚴(yán)格消毒。注意周圍的疫病信息,防止把病畜禽帶入場內(nèi)。發(fā)病后,要選用敏感藥物。氨基青霉素和芐基青霉素G對本病菌有抑制作用。
鏈霉素有較好治療作用,但易產(chǎn)生抗藥性。有報道使用四環(huán)素粉劑,按0.06%~0.1%混入配合飼料內(nèi),連續(xù)用藥3~5天。
慶大霉素注射液用生理鹽水稀釋后每只雛雞5000~10000單位,肌注,每天1次,連續(xù)用藥2~3天,有較好治療作用。同時也要重視其他病毒性、細(xì)菌性疾病的合并感染,做好早期預(yù)防工作。
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