公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1563363A
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公開(kāi)(公告)日
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2005.01.12
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200410017587.3
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申請(qǐng)日期
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2004.04.09
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專利名稱
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骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的規(guī);苽浞椒
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主分類號(hào)
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C12N5/08
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分類號(hào)
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C12N5/08
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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華東理工大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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周燕;譚文松;胡靜波;蔣丹丹
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地址
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200237上海市梅隴路130號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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中原信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
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代理人
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羅大忱
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國(guó)省代碼
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上海;31
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主權(quán)項(xiàng)
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一種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的規(guī);苽浞椒,其特征在于,包括如下步驟:(1)MSCs分離培養(yǎng)將從骨髓細(xì)胞懸液中分離的單個(gè)核細(xì)胞,接種在添加了5%~20%胎牛血清的α-MEM中進(jìn)行原代培養(yǎng),12~48小時(shí)后更換培養(yǎng)液,除去未貼壁細(xì)胞,原代細(xì)胞長(zhǎng)至匯合后以0.25%胰酶+0.02%EDTA消化細(xì)胞;(2)MSCs的微載體系統(tǒng)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞接種于預(yù)先硅化過(guò)的攪拌懸浮培養(yǎng)裝置中,與CT-3微載體共同培養(yǎng),采用10~30rpm轉(zhuǎn)速進(jìn)行接種,6~24小時(shí)后提高轉(zhuǎn)速至20~80rpm進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)條件為37℃、5%CO2、飽和濕度,生物反應(yīng)器系統(tǒng)設(shè)定操作條件為:pH7.0~7.2,溫度37℃,溶氧為30%~50%空氣飽和度;(3)收獲細(xì)胞細(xì)胞長(zhǎng)滿微載體后,以胰酶或膠原酶消化微載體表面包被的膠原,使細(xì)胞從微載體表面脫落下來(lái),通過(guò)靜止沉降法分離微載體和細(xì)胞。
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摘要
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本發(fā)明公開(kāi)了一種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的規(guī)模化制備方法。具體包括如下步驟:1.MSCs分離培養(yǎng),2.MSCs的微載體系統(tǒng)懸浮培養(yǎng),3.收獲細(xì)胞。采用本發(fā)明的方法,可以消除常規(guī)靜態(tài)培養(yǎng)系統(tǒng)中的面積限制以及營(yíng)養(yǎng)物、代謝副產(chǎn)物的濃度梯度,避免了頻繁的傳代操作,有利于細(xì)胞生長(zhǎng)和保持干細(xì)胞特性,采用生物反應(yīng)器培養(yǎng),可收獲1×109細(xì)胞,真正實(shí)現(xiàn)規(guī)模化制備骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,為工程化組織構(gòu)建、細(xì)胞治療、基因治療或其它科學(xué)研究提供大量的種子細(xì)胞。
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國(guó)際公布
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