| 公開(公告)號 | CN1212331C |
| 公開(公告)日 | 2005.07.27 |
| 申請(專利)號 | CN03130540.7 |
| 申請日期 | 2003.08.08 |
| 專利名稱 | 馬鈴薯病毒RNA的提取方法 |
| 主分類號 | C07H21/02 |
| 分類號 | C07H21/02;C07H1/08 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 南開大學(xué);天津科潤農(nóng)業(yè)科技股份有限公司蔬菜研究所;;所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 杜榮騫;李德森;羅智敏;俞鍵;;祁驥 |
| 地址 | 300071 天津市衛(wèi)津路94號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 天津市學(xué)苑有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 |
| 代理人 | 趙尊生 |
| 國省代碼 | 天津;12 |
| 主權(quán)項 | 一種馬鈴薯病毒RNA的提取方法，包括馬鈴薯組織破碎、抽提和沉淀收集病毒核酸以及洗滌和溶解步驟，其特征在于：1)先將馬鈴薯莖或葉片組織放入冰預(yù)冷的滅菌勻漿器或研缽中，研磨成勻漿；2)向勻漿中加入RNA提取緩沖液Tris-HClpH8.0100mmol/L、NaCl100mmol/L、EDTA10mmol/L，還加入β-巰基乙醇，在離心管中振蕩混勻；3)加入水飽和酚，氯仿/異戊醇，體積比，49∶1，充分混勻，冰浴中放置10分鐘，其間混勻2～3次；4)以10000轉(zhuǎn)/分，室溫離心15分鐘，吸取水相，水相中加入0.1倍體積的NaAc，3mol/L，pH5.2，和等體積的異丙醇，混勻，在-20℃中沉淀3小時；5)以11000轉(zhuǎn)/分，室溫離心20分鐘后，棄去上清，加冰預(yù)冷70％的乙醇洗滌沉淀2次，室溫風(fēng)干，至乙醇揮發(fā)完全為止；6)用無菌雙蒸水充分溶解提取的RNA，測OD值，計算RNA濃度。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種馬鈴薯病毒RNA的提取方法。它包括將馬鈴薯莖或葉片組織放入冰預(yù)冷的滅菌勻漿器或研缽中研磨成勻漿，加入提取緩沖液(Tris-HCl pH8.0 100mmol/L，NaCl 100mmol/L，EDTA 10mmol/L)和β-巰基乙醇，混勻，加入水飽和酚，氯仿/異戊醇，室溫離心，水相中加入NaAc(3mol/L，pH5.2)和等體積的異丙醇，-20℃中沉淀3小時；70％的乙醇洗滌沉淀，用無菌雙蒸餾水充分溶解等步驟。本發(fā)明省去了對器皿的高溫烘烤或DEPC處理，實驗用蒸餾水亦不需DEPC處理。材料的粉碎只需在冰予冷的器皿中進行。全部提取過程均可在常溫下進行。所得到的RNA經(jīng)RT-PCR檢測及序列分析，序列完整，沒有降解。該技術(shù)可用于生產(chǎn)上大規(guī)模的馬鈴薯病毒RT-PCR檢測。 |
| 國際公布 |
