| 公開(公告)號(hào) | CN1289691C |
| 公開(公告)日 | 2006.12.13 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN03113853.5 |
| 申請(qǐng)日期 | 2003.03.04 |
| 專利名稱 | 病原微生物診斷型基因芯片的快速檢測(cè)方法 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/04(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)人民解放軍基因工程研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 馬文麗;鄭文嶺;石 嶸 |
| 地址 | 510515廣東省廣州市同和第一軍醫(yī)大學(xué)分子生物學(xué)研究所 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廣州知友專利商標(biāo)代理有限公司 |
| 代理人 | 邵毓琴 |
| 國(guó)省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 病原微生物診斷型基因芯片的快速檢測(cè)方法，包括以下步驟：(1)玻片的準(zhǔn)備；(2)探針準(zhǔn)備：采用PCR擴(kuò)增病原體全基因組的各個(gè)基因和特異性片段，探針長(zhǎng)度從數(shù)百到數(shù)千堿基不等，濃度在0.25～0.5μg/μL；(3)芯片制備：采用基因芯片點(diǎn)樣儀進(jìn)行點(diǎn)樣；(4)打印后處理；(5)樣品的處理：在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，采用Cy5-dUTP進(jìn)行摻入標(biāo)記，在標(biāo)記前或標(biāo)記后采用Sau3A I進(jìn)行限制性酶切，使獲得片段長(zhǎng)度在200～600bps之間；其中，標(biāo)記dNTP的配制為：三種dNTP的摩爾終濃度與另一種欲用熒光標(biāo)記物替代的dNTP的摩爾終濃度比為5∶3，而熒光標(biāo)記物cy5-dUTP與和其競(jìng)爭(zhēng)性摻入的dTTP的摩爾濃度比是1∶3；(6)雜交：2×雜交緩沖液的配方為60％甲酰胺、12×SSC、0.24％SDS；(7)雜交后清洗；(8)掃描檢測(cè)。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種病原微生物診斷型基因芯片的快速檢測(cè)方法，包括以下步驟：(1)玻片的準(zhǔn)備；(2)探針準(zhǔn)備：采用PCR擴(kuò)增病原體全基因組的各個(gè)基因和特異性片段，探針長(zhǎng)度從數(shù)百到數(shù)千堿基不等，濃度在0.25～0.5μg/μL；(3)芯片制備：采用基因芯片點(diǎn)樣儀進(jìn)行點(diǎn)樣；(4)打印后處理；(5)樣品的處理：在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，Cy5-dUTP進(jìn)行摻入標(biāo)記，在標(biāo)記前或標(biāo)記后引入限制性酶切，使獲得片段長(zhǎng)度在200～600bps之間；(6)雜交：2×雜交明沖液的配方為60％甲酰胺、12×SSC、0.24％SDS；(7)雜交后清洗；(8)掃描檢測(cè)。本發(fā)明具有標(biāo)記效率高、雜交檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定、雜交時(shí)間大大病短等優(yōu)點(diǎn)，可將雜交時(shí)間從傳統(tǒng)的16～20小時(shí)縮短到10分鐘，尤其適用于臨床感染性疾病的診斷。 |
| 國(guó)際公布 |
