1.3 實驗動物
40只雄性Wistar大鼠購于上海實驗動物中心,體重300~320g。
2 方法
2.1 細胞培養(yǎng)
將C6細胞分裝于數(shù)只75cm2(底面積)的培養(yǎng)瓶中。加入適量含有體積分數(shù)為10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液,置入溫度37℃、CO25%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在細胞處于指數(shù)生長期時,以胰蛋白酶適量消化3~5min后,棄去消化液。用Hanks液吹打沖洗1~2次形成細胞懸液,調細胞濃度為每10μl含1.5×106個C6細胞的懸液用于接種。
2.2 顱內接種
將麻醉后的大鼠頭部固定在腦立體定向儀上,剪去頭頂部毛發(fā),碘伏消毒后鋪洞巾。取內眥連線與頭部正中矢狀面交點向后縱向切開頭皮約1cm,分離暴露顱骨。根據(jù)Batker法確定右尾狀核靶點,于冠狀縫前1mm,中線右旁開3mm,以牙科鉆在顱骨上鉆孔,孔徑約1.2mm,深達硬腦膜表面而不傷及腦組織。25μl微量注射器抽取C6細胞懸液10μl,沿骨孔緩慢勻速注射10min,注射完畢后留針5min,緩慢退針,骨孔用醫(yī)用明膠海綿填充,骨蠟封閉。生理鹽水沖洗手術區(qū),無菌絲線縫合切口后消毒皮膚,術后加用青霉素抗感染,整個過程在層流超凈臺中進行,麻醉復蘇后單籠常規(guī)飼養(yǎng)14天醫(yī).學.全.在.線m.f1411.cn。
2.3 實驗分組
將40只大鼠隨機分為冰片+順鉑治療組;單用順鉑組;冰片組;空白對照組,共4組,每組10只。
2.4 大鼠體內治療實驗
于術后14天,實驗組:灌服10%的冰片石蠟油溶液(m/v)3ml/kg/次,1h后大鼠尾靜脈注射順鉑1μg/g,以后每48h給同等劑量冰片+順鉑1次,共計3次。冰片組單用冰片石蠟油溶液?瞻讓φ战M則采用同體積石蠟油溶液,無冰片組則未加冰片,其余方法相同。
2.5 試驗紀錄
①觀察大鼠活動狀態(tài)。②腫瘤最大橫徑測量。于腫瘤接種21天取大鼠全腦,10%甲醛溶液固定后沿腫瘤中心作冠狀切面,水平方向測量每個腫瘤最大橫截面面積(包括壞死等病變組織)。③組織病理學檢查:所有腦標本固定,脫水,常規(guī)石蠟切片,片厚4μm,HE染色,光鏡下觀察。
2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
統(tǒng)計學處理應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行LSD檢驗分析。
3 結果