天熱藥物化學(xué)-實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

藥渣  濾液

加pH8（用石灰水  滴加10％HCl調(diào)pH=4~5 ,放置

調(diào))水溶液250ml  充分冷卻，待沉淀完全后，抽濾，

煮提10min，趁熱過(guò)濾  沉淀用水洗至中性，自然干燥，稱(chēng)重。

合并

藥渣（棄去)  濾液

  沉淀（蘆丁粗品)

  【精制】   懸浮于蒸餾水（約600ml)中 

  加熱煮沸10min至溶液澄清，趁熱過(guò)濾

不溶物（棄去)濾液

  放置充分冷卻，抽濾

   沉淀用水洗至中性

沉淀（精制蘆丁)

（自然干燥后稱(chēng)重)

注：取少量固體氧化鈣加水?dāng)嚢�，至有不溶物存在，放置，取上清液即為飽和石灰水�?/p>

2．蘆丁的水解

稱(chēng)取精制蘆丁1g置于250 ml園底瓶中，加入1％ H₂SO₄100ml(V/V) 隔石棉網(wǎng)直火微沸回流約30min（注意觀察現(xiàn)象：未加熱時(shí)，瓶?jī)?nèi)為混懸液，加熱后，混懸液逐漸變?yōu)槌吻逡�，繼續(xù)加熱，澄清液體又逐漸變?yōu)榛鞈乙骸?待水解完畢后，冷卻水解液。濾取沉淀，濾液保存于三角瓶中待作糖的檢識(shí)，所得沉淀用少許水洗除酸，干燥稱(chēng)重，計(jì)算苷元與糖的重量比。沉淀用乙醇（95%大約10-20ml)進(jìn)行重結(jié)晶，即得苷元（槲皮素)。

3．槲皮素乙�；�物的制備

取槲皮素200mg，置于50ml圓底燒瓶?jī)?nèi)，加入4ml無(wú)水吡啶，于水浴上加熱回流，使其完全溶解，再加入5ml醋酐，搖勻，水浴上加熱回流30min，放冷，將反應(yīng)液在攪拌下傾入150ml冰水中，一直攪拌至油滴消失，固體沉淀析出，抽濾析出的白色沉淀，用水洗至中性，干燥，再用95％乙醇重結(jié)晶，得細(xì)針狀結(jié)晶，測(cè)定其熔點(diǎn)，并與文獻(xiàn)記載的五乙�；�槲皮素的熔點(diǎn)（193～195℃)對(duì)比。

4．色譜檢識(shí)

   （1)糖的紙色譜檢識(shí)

糖溶液的處理： 取水解蘆丁時(shí)的濾液20ml，加適量Ba(OH)₂細(xì)粉，邊加邊攪拌，使溶液調(diào)到中性（pH＝7)，用玻璃漏斗過(guò)濾至蒸發(fā)皿中，在水浴上濃縮至約2ml左右，供紙色譜點(diǎn)樣用。

點(diǎn)樣： 標(biāo)準(zhǔn)品：葡萄糖、鼠李糖的水溶液（2mg/ml)。

  樣品液：酸水解濃縮液

展開(kāi)劑：  ① 正丁醇：冰醋酸：水（4:1:2不分層)配制14ml

② 正丁醇：冰醋酸：水（4:1:5取上層)配制5倍，放到分液漏斗中，平衡后取上層。

展開(kāi)方式： 用徑向紙色譜法，操作見(jiàn)《實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)范》第3頁(yè)

顯色劑：  噴霧鄰苯二甲酸-苯胺試劑，用電吹風(fēng)加熱至出現(xiàn)棕褐色斑點(diǎn)。

色譜結(jié)果：  將樣品色斑與標(biāo)準(zhǔn)品色斑對(duì)照并計(jì)算R_f值，作出結(jié)論。

（2)蘆丁和槲皮素的色譜檢識(shí)

點(diǎn)樣： 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)蘆丁、槲皮素的乙醇溶液（1mg/10ml)

   樣品液：取少量自制的蘆丁、槲皮素放于試管中加少量95％乙醇，水浴加熱溶解。

制板： 制備硅膠G-CMC板，方法見(jiàn)《實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)范》第4頁(yè)

展開(kāi)劑： 乙酸乙酯：甲酸：水（8：1：1)

展開(kāi)方式：上行法

顯色劑： 噴霧1％AlCl₃的乙醇溶液或在紫外燈（365nm)下觀察熒光。

色譜結(jié)果：將樣品色斑與標(biāo)準(zhǔn)品色斑對(duì)照并計(jì)算R_f值，給出結(jié)論。

5. 化學(xué)反應(yīng)檢識(shí)

（1)糖類(lèi)成分的檢識(shí)反應(yīng)

①取4支試管，分別加入1％的葡萄糖溶液、1％的蔗糖溶液、1％的可溶性淀粉溶液和蒸餾水各1ml，各試管均加入α-萘酚試液2~3滴，混合后，沿試管壁加濃硫酸1ml，使硫酸層集于下層，觀察兩相溶液界面處的顏色，并比較4個(gè)試管反應(yīng)的異同。

②取一濾紙條（約12×3cm)，用鉛筆劃三個(gè)圓圈，于各圓圈內(nèi)分別點(diǎn)1％的葡萄糖溶液、1％的蔗糖溶液、1％的可溶性淀粉溶液一滴，待干燥后，噴霧鄰苯二甲酸－苯胺試劑，置100℃加熱數(shù)分鐘或用電吹風(fēng)加熱，觀察并比較三個(gè)圓圈斑點(diǎn)的顏色。

（2)黃酮類(lèi)化合物的識(shí)別反應(yīng)

① 取3支試管，分別加入1％ 蘆丁、槲皮素的乙醇溶液和1％ 橙皮苷的甲醇溶液各1~2ml，再各加入1％ FeCl₃試液1滴，觀察現(xiàn)象。

② 取3支試管，分別加入1％ 蘆丁、槲皮素的乙醇溶液和1％ 橙皮苷的甲醇溶液各1~2ml，各均加少許鎂粉，混勻，分別緩緩滴加濃鹽酸（2~3滴)，觀察顏色變化情況。

③ 取3支試管，分別加入1％ 蘆丁、槲皮素的乙醇溶液和1％ 橙皮苷的甲醇溶液各1~2ml，再各加入α-萘酚試液2~3滴，混合后，沿試管壁加濃硫酸1ml，使硫酸層集于下層，觀察兩相溶液界面處的顏色。

④ 取2支試管，分別加入1％ 槲皮素的乙醇溶液和黃芩苷的乙醇飽和溶液各1~2ml，然后加入2% ZrOCl₂的甲醇溶液數(shù)滴，注意觀察顏色變化情況；再繼續(xù)向試管中加入2%檸檬酸的甲醇溶液，觀察顏色變化情況。

⑤ 取一濾紙條(12×3cm)，用鉛筆劃三個(gè)圓圈，于各圓圈內(nèi)分別點(diǎn)1％的蘆丁、1％的槲皮素和1％ 的橙皮苷溶液各一滴，干燥后，

a．在日光和紫外燈下觀察三個(gè)樣品的顏色，作好記錄；

b．將紙條放在水蒸氣流中1分鐘，再置氨氣流中片刻，觀察在日光和紫外燈下顏色變化；

c．將紙條放在通風(fēng)處放置10min后，再在日光和紫外燈下觀察顏色有什么變化；

d．最后再于三個(gè)圓圈部位噴霧1％ AlCl₃的乙醇溶液，干燥后，于日光和紫外燈下觀察顏色的變化。

⑥取一濾紙條（15×3cm)，用鉛筆劃三個(gè)圓圈，于各圓圈內(nèi)分別點(diǎn)1％的蘆丁、1％的槲皮素和1％的橙皮苷溶液各一滴，干燥后，噴霧0.5％ 醋酸鎂甲醇溶液，于90℃加熱5min，在日光和紫外燈下觀察有什么顏色變化。

6．蘆丁及槲皮素的紫外光譜測(cè)定

   （1)試劑的配制

a)甲醇鈉溶液（NaOMe)：取新切割的金屬鈉2.5g，小心分次加入到100ml干燥的光譜純的甲醇中，所得溶液密塞貯存于玻璃容器中。

b)無(wú)水醋酸鈉（NaOAc)：如有粉末狀無(wú)水NaOAc（A.R)，可直接供用。如無(wú)，則取醋酸鈉（NaOAc.3H₂O)置蒸發(fā)皿中，于120℃干燥2小時(shí)，粉碎即可。

c)硼酸（H₃BO₃)：在程序A的情況下，可直接取無(wú)水粉末狀H₃BO₃（A.R)。

在程序B的情況下，取光譜純MeOH，加入無(wú)水粉末狀H₃BO₃使成飽和溶液后供用。

d)無(wú)水三氯化鋁溶液（AlCl₃)：取1g無(wú)水AlCl₃（C.P)，小心加入到20ml光譜純甲醇中，放24小時(shí)后即溶解。

e)鹽酸（HCl)貯備液：取濃HCl（A.R)50ml，與蒸餾水100ml混勻后密塞貯存于玻璃中，備用。

以上貯備液可保存半年之久。取30ml滴瓶，每個(gè)滴瓶分別盛上述貯備液20ml，放于紫外分光光度計(jì)旁，供測(cè)定時(shí)用。

（2)測(cè)定方法：精密稱(chēng)取蘆丁10mg于100ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋到刻度，搖勻。從中吸取5ml于50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻備用（20μg/ml)。

① 甲醇光譜：取樣品溶液置石英杯中，在200～550nm內(nèi)進(jìn)行掃描，重復(fù)一次，觀察紫外光譜。

② 甲醇鈉光譜：取樣品溶液置石英杯中， 加入3滴NaOMe貯備液后，立即測(cè)定“樣品+NaOMe”溶液的UV光譜，過(guò)5min后重新測(cè)定一次，以核對(duì)黃酮類(lèi)化合物的分解情況。

③ AlCl₃光譜：在置有樣品溶液的石英杯中，加入6滴AlCl₃貯備液，停一分鐘測(cè)定“樣品+AlCl₃”溶液的UV光譜。然后加3滴鹽酸貯備液后，立即測(cè)定“樣品+AlCl₃/HCl”溶液的UV光譜，隨即倒掉杯內(nèi)溶液。

④ 醋酸鈉光譜：取樣品溶液2～3ml，加入粉碎的無(wú)水NaOAc振搖，至比色杯底約留有2mm厚的NaOAc時(shí)，立即測(cè)定“樣品+ NaOAc”溶液的UV光譜；然后再過(guò)5min作第二次測(cè)定，以核對(duì)分解情況。

⑤ 醋酸鈉-硼酸光譜：

方法Ⅰ，在盛有樣品及醋酸鈉的石英杯中，加入足量的硼酸使成飽和溶液，然后進(jìn)行測(cè)定。本法適用于在加入醋酸鈉5分鐘后無(wú)分解現(xiàn)象者。

方法Ⅱ，于樣品溶液約3ml中加入5滴H₃BO₃貯備液，然后加入NaOAc粉末，使之快速飽和后，測(cè)定“樣品+ NaOAc/H₃BO₃”的UV光譜。

根據(jù)測(cè)定結(jié)果試解析光譜并初步判斷其結(jié)構(gòu)，并說(shuō)明理由。

四、思考題

1．提取蘆丁工藝中影響產(chǎn)量和質(zhì)量的因素是什么？

2. 提取苷類(lèi)化合物時(shí)應(yīng)注意什么？

3．蘆丁和槲皮素用不同展開(kāi)劑系統(tǒng)展開(kāi)將出現(xiàn)什么結(jié)果？ 為什么？

實(shí)驗(yàn)三  苦參生物堿的提取、分離、鑒別和生物堿的檢識(shí)

苦參為豆科(Leguminosae)植物苦參（Sophora flavescens Ait)的根，味苦性寒，有清熱利濕、袪風(fēng)殺蟲(chóng)及解毒等功效。主要用于濕熱黃疸、赤白帶下、痛腫瘡毒、皮膚疥癬以及腮炎、痢疾等。

苦參中主要含有苦參堿、氧化苦參堿、N—甲基金雀花堿、氧化槐果堿、槐定堿等成分�？鄥⒖倝A及氧化苦參堿都具有減慢心率的作用，可用于心室早博等心律失常之癥，苦參制劑也常用于急性菌痢、滴蟲(chóng)病、白細(xì)胞減少癥、皮膚騷癢等多種疾病。目前藥理實(shí)驗(yàn)表明苦參堿、氧化苦參堿等具有抗腫瘤作用。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵��?/b>

1．掌握離子交換法提取苦參生物堿的原理及方法

2．掌握連續(xù)回流提取法的基本操作。

3．了解陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的性能和處理方法

二、實(shí)驗(yàn)原理（苦參生物堿的理化性質(zhì)與結(jié)構(gòu)，綜合性實(shí)驗(yàn))

1．苦參堿（matrine)：有四種形態(tài)，α－苦參堿為針狀或柱狀結(jié)晶，mp. 76℃，[α]_D＋39°；β－苦參堿為柱狀結(jié)晶，mp. 84℃；γ－苦參堿為液體，bp. 223℃/6mmHg；δ－苦參堿是柱狀結(jié)晶，mp. 84℃。常見(jiàn)是的α－苦參堿。當(dāng)β－苦參堿在石油醚中22～24℃放置后，能析出α和β型苦參堿的混合結(jié)晶，而α－苦參堿的溶液放置在10℃時(shí)，能析出β-苦參堿結(jié)晶，用過(guò)氧化氫處理苦參堿可轉(zhuǎn)變?yōu)檠趸�苦參堿。四種形態(tài)的苦參堿的苦味酸鹽相同，mp. 167～169℃。  

2．氧化苦參堿（Oxymatrine)：C₁₅H₂₄N₂O_2，無(wú)色柱狀結(jié)晶（Me₂CO)，mp.162～163℃（水合物)，207℃（無(wú)水物)。[α]_D+47.7°（EtOH)�？扇苡诶渌�、乙醇、氯仿，難溶于乙醚、石油醚。用SO₂處理可轉(zhuǎn)變?yōu)榭鄥�堿。

3．N－氧化槐果堿（N－Oxysophocarpine)：白色簇狀結(jié)晶，mp. 206℃

4．槐定堿（Sophoridine)：為苦參堿的一種空間異構(gòu)體，白色棱晶，mp. 106～108℃

苦參堿氧化苦參堿 N－氧化槐果堿  槐定堿

5．其它生物堿的結(jié)構(gòu)為：

（1)安那吉堿Anagyrine：穩(wěn)定性大，不被皂化，bp. 210～215℃／4mmHg

（2)苦參烯堿Sophocarpine：mp. 54℃

（3)苦參醇?jí)ASophoranol：mp. 171℃

   （1) （2) （3)

苦參生物堿是喹喏里西丁類(lèi)生物堿，能與酸成鹽而溶于稀酸水，將其鹽的水溶液通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱進(jìn)行交換，交換樹(shù)脂用濃氨水堿化，再用氯仿提取得到苦參總生物堿。 

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

 （一)儀器與試劑

玻璃色譜柱（21mm×200mm)及配套分液漏斗，燒杯（50 ml，500 ml，1000m1)，滲漉筒，濾紙，紗布，100ml三角瓶，索氏提取器，恒溫水浴鍋，蒸發(fā)皿，試管，玻璃板（5×20cm)，色譜缸，濾紙，玻璃漏斗，鐵架臺(tái)， 250ml園底燒瓶，恒溫水浴鍋，抽濾瓶，布氏漏斗，冷凝器等。

苦參粗粉，732型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，硅膠G，乙醇，濃氨水，氯仿，無(wú)水硫酸鈉，丙酮，甲醇，2mol/L HCl，0.1％HCl，5％NaOH溶液，氫氧化鈉，乙醚， 5％ 鉬酸銨，濃硫酸，濃硝酸，漂白粉，碘化鉍鉀試劑，改良的碘化鉍鉀試液，碘化汞鉀試劑，硅鎢酸試劑，10％ 硫酸銅試劑，氯化汞乙醇溶液，0.1%H₂SO₄奎寧水溶液，0.1%H₂SO₄小檗堿水溶液，0.1%H₂SO₄阿托品水溶液，苦參生物堿水溶液（自制)，1％ 鹽酸麻黃堿水溶液，鹽酸小檗堿水溶液，氫溴酸東莨菪堿溶液，硫酸阿托品溶液等。

（二)實(shí)驗(yàn)操作

總生物堿的提取

1．樹(shù)脂的處理  由于市售的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂為鈉型，同時(shí)含水量不足未充分膨脹，而往往含有雜質(zhì)，因此使用前需進(jìn)行轉(zhuǎn)型、除雜和吸水膨脹處理。

樹(shù)脂規(guī)格：732型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，交換容量：45毫克當(dāng)量，交聯(lián)度：1×7。

稱(chēng)取40克干樹(shù)脂置于100ml三角瓶中，加少量酒精或水浸泡過(guò)夜，次日倒出酒精，用蒸餾水洗至溶液澄清，然后倒入交換柱中。先用約300ml（約8倍量)2mol/LHCl以5～6ml/min的速度進(jìn)行交換，使其轉(zhuǎn)為氫型，然后用水洗至流出液呈中性；接著再用約300ml（8倍量)5％NaOH水溶液以同樣速度使其復(fù)回鈉型，再用蒸餾水洗至液呈中性（必要時(shí)也可再重復(fù)一次鹽酸和氫氧化鈉的處理)，最后用300ml（8倍量)的2mol/LHCl進(jìn)行交換，使之轉(zhuǎn)為氫型，蒸餾水沖洗至中性，待用。

2．滲漉

稱(chēng)取苦參粗粉150g，用適量0.1％HCl攪拌濕潤(rùn)膨脹后，裝入滲漉筒中（滲漉筒底部鋪一層紗布)，藥材要分次加入，一層一層壓緊，壓力要均勻，不要太緊，裝完后上面蓋一張濾紙，用玻璃塞壓住，加0.1％HCl浸泡過(guò)夜。次日以0.1％HCl為溶劑以4～5ml/min的速度滲漉（滲漉液最好用濾紙過(guò)濾一次)，邊滲漉邊檢查生物堿反應(yīng)（或測(cè)定pH的變化)，至滲漉液生物堿反應(yīng)不明顯為止（滲漉液約1500左右，或滲漉液顏色較淺)。

注：（1)提取溶劑如酸度太大或用量過(guò)大，交換時(shí)可將吸附于樹(shù)脂上的生物堿洗脫下來(lái)，因此滲漉溶劑酸度和用量要合適。

（2)生物堿反應(yīng)檢查：將流出液滴在濾紙上，噴霧碘化鉍鉀試劑，如有橙紅色斑點(diǎn)為正反應(yīng)，無(wú)橙紅色斑點(diǎn)為負(fù)反應(yīng)。

3．交換

將滲漉液通過(guò)處理好的強(qiáng)酸性陽(yáng)離子樹(shù)脂，交換速度為4～5ml/min，或以檢查流出液是否有生物堿來(lái)控制交換速度。交換完畢后，將樹(shù)脂倒入250ml燒杯中，用蒸餾水洗至洗液無(wú)色，再用乙醇洗兩次，將樹(shù)脂倒至蒸發(fā)皿中，自然晾干（或于40～50℃烤箱中烤干)。

4．連續(xù)提取

將上述晾干的樹(shù)脂放至燒杯中，加10ml左右的濃氨水拌濕（以手捏成團(tuán)但不粘手為宜)，內(nèi)置20min（蓋好)，裝入濾紙袋置索氏提取器中，用200ml的氯仿為溶劑連續(xù)回流提取至提取液無(wú)生物堿反應(yīng)，約2 h（于恒溫水浴中，水浴溫度為80～90℃)。回流完畢后，氯仿提取液加無(wú)水硫酸鈉（炒干)干燥脫水。干燥至少半小時(shí)以上過(guò)濾，回收氯仿至干（蒸至少量時(shí)倒入50ml燒杯中，繼續(xù)將氯仿?lián)]盡)，殘留物加入少量丙酮，熱溶，放置，析晶。數(shù)日后加少量丙酮處理結(jié)晶，抽濾（結(jié)晶用少量丙酮洗一次)，干燥，即得粗品總堿（黃白色結(jié)晶)。

5．精制

將粗品用約20倍的丙酮于100ml三角瓶中熱溶解，趁熱過(guò)濾，濾液放置冷卻。待沉淀完全后，抽濾，結(jié)晶用丙酮洗滌一次，置干燥器，稱(chēng)重，即得以氧化苦參堿為主的精品總堿。

6．總堿的薄層色譜鑒定

制板：制備硅膠G-CMC板，方法見(jiàn)《實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)范》第4頁(yè)

點(diǎn)樣：樣品液：取少量自制苦參總生物堿放于小試管中加適量氯仿溶解。

  母液；標(biāo)準(zhǔn)品：苦參堿和氧化苦參堿（用適量氯仿溶解)

展開(kāi)劑：氯仿-甲醇-濃氨水（8:2:0.25)

展開(kāi)方式：上行法

顯色劑：噴霧改良的碘化鉍鉀試液

色譜結(jié)果：對(duì)照樣品色斑與標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)的顏色和位置，計(jì)算R_f值，并觀察母液中有多少生物堿的斑點(diǎn)，做出結(jié)論。

7. 生物堿類(lèi)化合物的檢識(shí)

生物堿除少數(shù)（如麻黃堿)外，均與各種生物堿沉淀試劑在弱酸性溶液中反應(yīng)，生成沉淀；而部分生物堿又各自與不同的顯色試劑反應(yīng)，生成各種有色物質(zhì)。

1)生物堿沉淀反應(yīng)

（1)碘化鉍鉀沉淀反應(yīng)：取4支試管，分別加入0.1%H₂SO₄奎寧水溶液、0.1%H₂SO₄小檗堿水溶液、0.1%H₂SO₄阿托品水溶液及苦參生物堿水溶液各1ml，然后在各試管中均加入碘化鉍鉀試劑，混勻，觀察生成沉淀的情況。

    （2) 碘化汞鉀反應(yīng)：取4支試管，分別加入0.1%H₂SO₄奎寧水溶液、0.1%H₂SO₄小檗堿水溶液、0.1%H₂SO₄阿托品水溶液及苦參生物堿水溶液各1ml，然后在各試管中均加入碘化汞鉀試劑，混勻，觀察生成沉淀的情況。

（3)硅鎢酸沉淀反應(yīng)：取4支試管，分別加入0.1%H₂SO₄奎寧水溶液、0.1%H₂SO₄小檗堿水溶液、0.1%H₂SO₄阿托品水溶液及苦參生物堿水溶液各1ml，然后在各試管中均加入硅鎢酸試劑，混勻，觀察生成沉淀的情況。

2) 顯色反應(yīng)  取一張濾紙條，在其上分別滴加0.1% H₂SO₄奎寧水溶液、0.1% H₂SO₄小檗堿水溶液、0.1% H₂SO₄阿托品水溶液及苦參生物堿水溶液各1滴，干燥后噴霧改良的碘化鉍鉀試劑，觀察各種樣品顯色情況。

 3)個(gè)別生物堿的顏色反應(yīng)

（1)麻黃堿的反應(yīng)：取一支試管加入1％ 鹽酸麻黃堿水溶液1ml，加入10％ 硫酸銅試劑2～3滴，用氫氧化鈉堿化，即顯蘭紫色；再往試管中加入乙醚，振搖分層后，醚層呈紫紅色（二水合物)，水層呈蘭色（四水合物)。反應(yīng)原理為：

（2)莨菪堿和東莨菪堿的反應(yīng)：

東莨菪堿與5％ 鉬酸銨的濃硫酸溶液加熱反應(yīng)，初生成黃色，后變?yōu)樘m色，阿托品不顯色。

取少量硫酸阿托品及氫溴酸東莨菪堿分別置2支試管中，加入氯化汞乙醇溶液，阿托品生成黃色沉淀，加熱后轉(zhuǎn)為紅色；東莨菪堿生成白色沉淀。

（3)小檗堿的反應(yīng)：

取鹽酸小檗堿水溶液2ml，加入濃硝酸數(shù)滴，可得黃綠色硝酸小檗堿沉淀。

取鹽酸小檗堿少許，加稀鹽酸2ml溶解后，加漂白粉少許即產(chǎn)生紅色。

四、思考題

1. 離子交換樹(shù)脂提取生物堿的原理是什么？其方法有什么特點(diǎn)？

2. 根據(jù)苦參生物堿的性質(zhì)，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)用溶劑法提取苦參生物堿的流程。

3. 使用索氏提取器有什么優(yōu)點(diǎn)？應(yīng)注意哪些問(wèn)題？

實(shí)驗(yàn)四  利用紙色譜先導(dǎo)設(shè)計(jì)法從洋金花中提取分離生物堿

洋金花是茄科（Solanaceae)植物白曼陀（S.Daturametel  L.)或毛曼陀（S.Datura innoxia Mill)的干燥花，前者稱(chēng)南洋金花，后者稱(chēng)北洋金花。曼陀羅的葉、花、根和種子均含有大量生物堿（0.2～0.5％)，主要為莨菪堿（hyoscyamine)、東莨菪堿、顛茄堿和去水阿托品。在花中主要是莨菪堿和東莨菪堿。北洋金花中東莨菪堿的含量較高，約為0.344％。洋金花味辛性溫、有毒，具有定喘、麻醉止痛之功效，主治哮喘、驚癇、風(fēng)濕痹痛等，還可作手術(shù)麻醉劑。民間將洋金花與煙絲或煙葉混合，做成煙卷，用以治療老年性慢性氣管炎哮喘，對(duì)緩解支氣管平滑肌痙攣有明顯療效。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/b>

1．了解紙層析先導(dǎo)設(shè)計(jì)法的原理與操作

2．掌握洋金花中東莨菪堿和莨菪堿的理化性質(zhì)與提取分離方法

3．掌握逆流分溶法（CCD法)的原理與操作

二、實(shí)驗(yàn)原理（綜合性實(shí)驗(yàn))

（一)洋金花中主要成分的結(jié)構(gòu)性質(zhì)及提取分離原理

1.東莨菪堿(hyosine or scopolamine)  為粘稠狀液體，其一分子水合物為結(jié)晶體，mp 59℃，[α]_D-18^o，具有極強(qiáng)的親水性，可溶于水（1:9.5)，易溶于熱水、乙醇、乙醚、氯仿、丙酮，難溶于四氯化碳、苯或石油醚。其堿性較弱(K_b=3.5×10^-7)，不能與HgCl₂生成HgO的黃色沉淀。

2.莨菪堿(hyocyamine or atropine)  為固體，mp 108. 5℃，[α]_D-22^o(EtOH)。其溶于無(wú)水乙醇中，加0.16％的氫氧化鈉或120℃加熱30min，經(jīng)消旋即可轉(zhuǎn)為阿托品。阿托品為長(zhǎng)柱狀結(jié)晶，mp 118℃，易溶于乙醇、氯仿，可溶于四氯化碳、苯，幾乎不溶于石油醚。堿性比東莨菪堿強(qiáng)(K_b=4.5×10^-5)，能與HgCl₂生成黃色HgO沉淀，加熱后轉(zhuǎn)為紅色。

 莨菪堿  東莨菪堿

東莨菪堿和莨菪堿均能與酸成鹽而溶于水，在堿化后游離出生物堿而溶于氯仿，利用此性質(zhì)用酸水將洋金花中生物堿提取出來(lái)，堿化后用氯仿萃取得到總堿，而利用紙色譜先導(dǎo)法的方案將莨菪堿與東莨菪堿分離。

（二)紙色譜先導(dǎo)設(shè)計(jì)法簡(jiǎn)介

紙色譜先導(dǎo)設(shè)計(jì)法是以紙色譜的結(jié)果及計(jì)算數(shù)據(jù)作指導(dǎo)，來(lái)設(shè)計(jì)液—液兩相萃取法分離天然藥物化學(xué)成分的研究方案。紙色譜屬于分配色譜，固定相和流動(dòng)相分別為吸附在色譜濾紙上的水（或預(yù)先涂布的其它固定相)和展開(kāi)劑，根據(jù)不同物質(zhì)在水相與有機(jī)相之間的分配系數(shù)不同而得到分離。因此我們可以根據(jù)不同成分紙色譜的比移值R_f來(lái)設(shè)計(jì)液—液萃取的實(shí)驗(yàn)方案。

紙色譜先導(dǎo)法的設(shè)計(jì)程序分為四個(gè)步驟：

1. 溶劑系統(tǒng)的選擇：

(1)選擇提取溶劑：提取溶劑是指從藥材或水提液中提取某種（或某組)成分所用的溶劑。最佳的提取溶劑應(yīng)為紙色譜時(shí)該種（或該組)成分R_f值最大的展開(kāi)劑。因?yàn)樯�譜的R_f值越大，分配系數(shù)K越大，萃取率就越高。所以，可用紙色譜法選擇其中R_f值最大的展開(kāi)劑作為提取該物質(zhì)的最佳萃取溶劑。

當(dāng)采用潤(rùn)濕指數(shù)為1.5的半濕色譜濾紙時(shí)，K值與R_f值的近似關(guān)系式如下所示：

  式中：K=C_{有機(jī)相}/C_水相

(2)選擇分離混合物的溶劑：在分離紙色譜比移值為R_f1及R_f2(R_f1 ＞R_f2)的兩個(gè)化合物時(shí)，可以用分離因子β表示這兩種化合物可分離的難易程度：

分離因子β越大，兩種物質(zhì)越易分離。因此在選擇分離溶劑系統(tǒng)時(shí)，應(yīng)盡量選β值大者的溶劑系統(tǒng)。一般情況下，ΔR_f越大，則β值越大越容易分離。當(dāng)在該條件下用紙色譜的展開(kāi)劑做為萃取溶劑時(shí)，R_f值最大的化合物易轉(zhuǎn)入萃取溶劑中，而R_f小的化合物則留在水相中，從而達(dá)到了分離的目的。

分離混合物的溶劑還要具備下述條件：兩相溶劑能很快的分層；振搖時(shí)不易發(fā)生乳化現(xiàn)象；溶質(zhì)與溶劑不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)（特殊需要者例外)等。

選擇溶劑時(shí)具體做法如下：

①色譜濾紙的處理：稱(chēng)量色譜濾紙重W₁，然后將色譜濾紙浸入蒸餾水(或其它固定相)中，迅速取出，夾于兩張濾紙中間。吸去多余水分，至濕潤(rùn)的色譜濾紙重W₂約為W₁的1.5倍。此時(shí)濾紙的濕潤(rùn)指數(shù)即為1.5。

②點(diǎn)樣展開(kāi)及確定溶劑系統(tǒng)：取濕潤(rùn)指數(shù)約為1.5的半濕色譜濾紙，按紙色譜常規(guī)點(diǎn)樣，并選用不同溶劑上行展開(kāi)，最后顯色，計(jì)算樣品的R_f及β值，并據(jù)此確定最佳的溶劑系統(tǒng)。

2. 分離方法的確定

液-液萃取法分離化學(xué)成分主要有兩種操作方法：簡(jiǎn)單萃取法(即分批萃取法Batchextraction)和逆流分溶法(Counter-CurrentDistribution簡(jiǎn)稱(chēng)CCD)。前者操作簡(jiǎn)單，但分離效果較差；后者操作復(fù)雜，但分離效果好，可同時(shí)分離幾種成分組成的多元混合物及性質(zhì)極為相似的化合物。方法的確定主要依靠β值的大小，一般當(dāng)β＞50時(shí)說(shuō)明混合物易于分離，在設(shè)計(jì)方案時(shí)可采用簡(jiǎn)單萃取法；當(dāng)β＜50時(shí)宜用分離效果較高的CCD法。

3. 溶劑用量比的確定

在簡(jiǎn)單萃取或逆流分溶過(guò)程中，溶劑用量比例要合適，這樣可以大大提高分離

效果。最適量的溶劑用量比例可由下公式得出：

R=V_{有機(jī)相}/V_水相 = 1/   V：體積

4.逆流分溶轉(zhuǎn)移次數(shù)的確定

用逆流分溶法分離混合物時(shí)需要的最經(jīng)濟(jì)的轉(zhuǎn)移次數(shù)N可用下式計(jì)算：

N=β[3(α+β)+δ(αβ+1)]²/α(β-1)²

式中α為溶劑因子，可由α=R²·K₁·K₂求出，其值與所達(dá)到的分離純度有關(guān)，純度要求越高，δ值越大(表1)，轉(zhuǎn)移次數(shù)N也越大。

表1 δ值與純度的關(guān)系

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.儀器及試劑

三角瓶若干；分液漏斗100ml1個(gè)，50ml 4個(gè)；蒸餾裝置一套、培養(yǎng)皿、毛細(xì)管、試管，紙色譜筒，色譜濾紙，棉花。

洋金花；氯仿；濃鹽酸，濃氨水，改良的碘化鉍鉀試液；檸檬酸-碳酸氫鈉緩沖溶液（pH=5、6.5、7.5、8.5)四種；氫溴酸東莨菪堿對(duì)照品溶液，硫酸阿托品對(duì)照品溶液。

2.實(shí)驗(yàn)操作

1)洋金花中總生物堿的提取

稱(chēng)取洋金花(搓碎)15g，置于100ml三角瓶中，加蒸餾水80ml，滴加濃鹽酸調(diào)溶液pH=2，浸泡過(guò)夜。第二天抽濾，將濾液倒入125ml分液漏斗中，加20ml氯仿，用濃氨水堿化至pH=8～9，振搖萃取。再分別用20ml、10ml氯仿分別萃取兩次。合并三次氯仿萃取液，水層棄掉，回收氯仿，剩5～6ml即可(留1ml作紙色譜用)。

2)東莨菪堿與莨菪堿的分離

(1) 分離條件的考察  取一條15cm×5cm的色譜濾紙，用鉛筆距底端2cm劃起始線，再垂直于起始線畫(huà)三條等距縱線，即將濾紙分為四等分窄條。用棉球沾取不同pH的緩沖液（pH依次為5、6.5、7.5、8.5的檸檬酸-碳酸氫二鈉緩沖液)按順序涂布于濾紙的各條帶上，涂布操作要求均勻、快速，而且在盡量避免緩沖液間鄰近區(qū)間的擴(kuò)散。涂畢后將濕濾紙條夾在兩張干濾紙之間吸去多余的水分。然后用毛細(xì)管吸取總生物堿溶液分別點(diǎn)于色譜濾紙各條緩沖帶的起始線處。以水飽和的氯仿為展開(kāi)劑，展開(kāi)。展開(kāi)高度約10cm后取出，以改良的碘化鉍鉀試劑噴霧顯色。記錄不同pH緩沖帶下樣品展開(kāi)的R_f值和β值，根據(jù)此值選擇樣品中生物堿分離的適宜pH緩沖條件。

(2) CCD分離方法(Counter-Current Distribution) 取4個(gè)小分液漏斗，編號(hào)為1～4，每只內(nèi)盛有pH=6.5的緩沖溶液5ml做為固定相(緩沖溶液要用氯仿提前飽和)。將含有總堿的氯仿濃縮溶液5ml轉(zhuǎn)入第1號(hào)分液漏斗中，振搖后靜置分層；之后再將第1號(hào)分液漏斗中的氯仿層溶液轉(zhuǎn)入至第2號(hào)分液漏斗中，振搖后靜置分層；然后再將第2號(hào)分液漏斗中的氯仿層溶液轉(zhuǎn)入至第3號(hào)分液漏斗中，振搖后靜至分層；然后再將第3號(hào)分液漏斗中的氯仿層溶液轉(zhuǎn)入至第4號(hào)分液漏斗中，靜置后分層；最后將第4號(hào)分液漏斗中的氯仿層溶液收集至試管中（編號(hào)為第1號(hào)氯仿萃取液)。

再取5ml新配的氯仿液（提前用pH=6.5的緩沖溶液飽和)倒入第1號(hào)分液漏斗中，振搖后靜置分層；然后再將第1號(hào)分液漏斗中的氯仿層溶液轉(zhuǎn)入第2號(hào)分液漏斗中……。最后將第4號(hào)分液漏斗中的氯仿層溶液收集至試管中（編號(hào)為第2號(hào)氯仿萃取液)。重復(fù)上步驟工作，依順序得到編號(hào)為第3號(hào)、第4號(hào)的氯仿萃取液。共得到編號(hào)為1～4號(hào)的四份氯仿萃取液。

將第1至4號(hào)分液漏斗中的水相中各加入5ml氯仿，再分別加入氨水堿化至pH=9，振搖后靜置，分出氯仿層溶液，共得到編號(hào)為5～8的四份為水相堿化后的氯仿萃取液。將以上各氯仿萃取液（編號(hào)1～8，共8份)分別濃縮至小量后待紙色譜鑒定用。

3)紙色譜鑒定

取一張圓形紙色譜濾紙，在圓心處畫(huà)一直徑約為3cm的圓圈做為起始線。用棉球沾取pH=6.5的緩沖溶液均勻涂于一張圓形紙色譜濾紙上，用干濾紙吸去多余的水份，再按圓形紙色譜法操作。

點(diǎn)樣：洋金花總生物堿氯仿濃縮液(自提)，氫溴酸東莨菪堿對(duì)照品溶液，硫酸阿托品對(duì)照品溶液，編號(hào)1～4（流動(dòng)相)、5～8（固定相)的氯仿萃取濃縮液。

展開(kāi)劑：用pH=6.5緩沖溶液飽和的氯仿液。

顯色劑：改良的碘化鉍鉀試液，噴霧顯色。

注意觀察各樣品斑點(diǎn)情況，并分析各萃取液中的成分。

四、思考題

1. 在提取中為什么要先加氯仿再堿化？堿化后的pH值為什么要控制在8-9？

2. 萃取用的氯仿為什么要用pH=6.5的緩沖溶液飽和？

實(shí)驗(yàn)五  一葉萩堿的分離和鑒定

大戟科植物一葉萩（Securinegasuffruticosa(Pall) Rehd)也稱(chēng)葉底珠，別名狗杏條，我國(guó)資源十分豐富。其根、葉和嫩枝中均含有多種生物堿，結(jié)構(gòu)已經(jīng)清楚的有十幾種，其中一葉萩堿含量最高，并已用于臨床。一葉萩堿和它的衍生物能興奮中樞神經(jīng)，增強(qiáng)心肌收縮，升高血壓，臨床用硝酸一葉萩堿治療面神經(jīng)麻痹，小兒麻痹骶神經(jīng)炎和股外側(cè)神經(jīng)炎感染引起的多發(fā)性神經(jīng)炎，成為神經(jīng)科疾患的常見(jiàn)藥物。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/b>

1. 掌握用離子交換樹(shù)脂法提取分離生物堿的原理和方法。

2.了解一葉萩堿衍生物的制備方法及鑒定方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理（綜合性實(shí)驗(yàn))

一葉萩堿為淡黃色棱形晶體，難溶于水，易溶于醇、氯仿，較難溶于石油醚，其結(jié)構(gòu)如下：

一葉萩堿具有較強(qiáng)的堿性，能與酸成鹽而溶于稀酸水，將其鹽的水溶液通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱進(jìn)行交換，交換樹(shù)脂用濃氨水堿化，再用氯仿提取得到總生物堿。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1. 儀器與試劑

玻璃色譜柱（21mm×200mm)及配套分液漏斗，燒杯（50 ml，500 ml，1000m1)，滲漉筒，濾紙，紗布，100ml三角瓶，索氏提取器，恒溫水浴鍋，培養(yǎng)皿、蒸發(fā)皿，試管，玻璃板（5×20cm)，色譜缸，濾紙，玻璃漏斗，鐵架臺(tái)， 250ml圓底燒瓶，恒溫水浴鍋，抽濾瓶，布氏漏斗，冷凝器。

一葉萩，硅鎢酸試劑，碘化鉀試劑，碘化鉍鉀試劑，石油醚，氨水，氯仿，苯，乙醇，乙醚無(wú)水乙醇，10%硝酸無(wú)水乙醇液，無(wú)水乙醇，乙醚，碘甲烷，丙酮，甲醇，氧化鋁（堿性Ⅱ~Ⅲ，粒度＞200目)。

2. 實(shí)驗(yàn)操作

1) 

2)生物堿的定性實(shí)驗(yàn)

① 取滲漉液1ml，加硅鎢酸試劑數(shù)滴，產(chǎn)生淡黃色沉淀。

② 取滲漉液1ml，加碘化鉀試劑數(shù)滴，產(chǎn)生淡棕褐色沉淀。

③ 取滲漉液1ml，加碘化鉍鉀試劑數(shù)滴，產(chǎn)生棕紅色沉淀。

3)一葉萩堿衍生物的制備

  ① 硝酸一葉萩堿的制備

稱(chēng)取一葉萩堿200mg，加6ml乙醚及9ml無(wú)水乙醇，使生物堿全部溶解，滴加10%硝酸無(wú)水乙醇液14ml，滴加乙醚至渾濁、放置，白色結(jié)晶析出后，過(guò)濾，結(jié)晶用無(wú)水乙醇-乙醚（1：1)洗滌數(shù)次、干燥，即得硝酸一葉萩堿。

硝酸一葉萩堿、無(wú)嗅、味苦，溶于水，難溶于醇。mp 222℃。

② 一葉萩堿的甲基化物的制備

稱(chēng)取樣品100mg，碘甲烷（MeI)0.4ml及丙酮10ml水浴回流1h，放冷結(jié)晶析出后，過(guò)濾，結(jié)晶用乙醚洗滌，用MeOH-EtOH重結(jié)晶，獲得黃色針狀結(jié)晶，mp. 232℃。

反應(yīng)式：

4)鑒定

①  TLC  吸附劑：Al₂O₃（堿性Ⅱ~Ⅲ，粒度＞200目)

展開(kāi)劑：a.氯仿-苯-乙醇 (25:25:2)；b.氯仿；c. 乙醚

② IR ν_max  1790cm^-1（不飽和內(nèi)酯環(huán)上的質(zhì)子)，1730 cm^-1（內(nèi)酯的羰基)

1620 cm^-1（雙鍵)

③ UVλ_max  256.6 nm，311.6nm

四、思考題

   1．用樹(shù)脂提取生物堿的原理是什么？為什么提取生物堿時(shí)必須考慮交聯(lián)度？

   2．用石油醚從樹(shù)脂上回流洗脫一葉萩堿的原理是什么？

實(shí)驗(yàn)六 青蒿素的提取、分離和檢識(shí)

青蒿素是從中藥青蒿中分離得到的一個(gè)有抗瘧活性的倍半萜過(guò)氧化物，尤其對(duì)腦型瘧疾和抗氯喹瘧疾具有速效和低毒的特點(diǎn)。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/b>

1.掌握從青蒿中提取、分離并鑒定青蒿素的方法。

2.學(xué)習(xí)柱色譜的操作方法

 二、實(shí)驗(yàn)原理（綜合性實(shí)驗(yàn))

青蒿素（Artemisinin)是低極性的倍半萜過(guò)氧化物，因此可以用低沸點(diǎn)的溶劑如二氯甲烷、氯仿、乙醚、丙酮和石油醚(30~60℃)來(lái)提取。然后應(yīng)用層析和重結(jié)晶的方法來(lái)分離純化青蒿素。

  青蒿素

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1．儀器和試劑

  色譜柱，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，硅膠薄層板，展開(kāi)缸，顯色試劑噴瓶，電吹風(fēng)，錐形瓶(50m1)等。

青蒿干燥的葉子，100~200目硅膠，石油醚，氯仿，乙酸乙酯，二氯甲烷，正己烷，乙腈(分析純)，5％香草醛-濃硫酸(硫酸-無(wú)水乙醇＝4:1)，

2. 實(shí)驗(yàn)操作

1)提取分離方法

 青蒿干燥的葉子(粉碎)用沸點(diǎn)30~60℃的石油醚提取48小時(shí)．回收濃縮后得到棕黑色漿狀物。再用20m1氯仿溶解后，加入180m1的乙腈，過(guò)濾除去不溶部分，濾液減壓濃縮得到膠質(zhì)狀殘?jiān)�。將殘�(jiān)��?00g（100-200目)硅膠進(jìn)行柱色譜分離，用7.5％乙酸乙酯-氯仿作為洗脫劑。從洗脫劑下來(lái)200m1之后開(kāi)始收集流分，每瓶流分體積為40ml。流分用TLC進(jìn)行檢測(cè)。收集流分體積約300m1后，青蒿素被洗脫下來(lái)，為白色結(jié)晶。用二氯甲烷-正己烷(1:4)重結(jié)晶可得到青蒿素純品。

2)TLC鑒定

樣品：青蒿素的氯仿(或二氯甲烷)溶液

展開(kāi)刑：7.5％乙酸乙酯：氯仿

顯色： 用5％香草醛—濃硫酸，可以觀察到青蒿素開(kāi)始為黃色斑點(diǎn)，加熱后變成紫紅色斑點(diǎn)(R_f=0.66)。

注意事項(xiàng)：高溫易導(dǎo)致青蒿素產(chǎn)生大量降解產(chǎn)物，因此本實(shí)驗(yàn)必須低溫提取回收，溫度不得超過(guò)60℃。

四. 復(fù)習(xí)題

1. 提取時(shí)為何使用乙腈？

2. 設(shè)計(jì)青蒿素提取分離的其它方法？

實(shí)驗(yàn)七 穿心蓮內(nèi)酯的提取、分離、鑒定及亞硫酸氫鈉加成物的制備

  穿心蓮為爵床科植物穿心蓮(Andjrographis panicalata (Burmf)Ness)的全草或葉。具清熱解毒，涼血消腫作用，用于治療急性菌痢、胃腸炎、咽喉炎、尿路感染等。穿心蓮中含有多種苦味素，屬二萜類(lèi)化合物，主要為穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯、高穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮?fù)�、穿心蓮�(fù)�等。其中穿心蓮�?nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯是穿心蓮抗菌消炎的主要有效成分。鑒于穿心蓮內(nèi)酯在水中的難溶性，將穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行磺化、亞硫酸氫鈉加成和琥珀酸酐酯化等水溶性衍生物合成研究，克服了穿心蓮內(nèi)酯不溶于水的特性。

穿心蓮中主要成分的結(jié)構(gòu)及其性質(zhì)

 1．穿心蓮內(nèi)酯(andrographolide)：C₂₀H₃₀O₆，又稱(chēng)穿心蓮乙素，為無(wú)色方型或

長(zhǎng)方型結(jié)晶，mp 230~232℃，[a]_D²⁰ -126^。。味極苦，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶，微溶于氯仿、乙醚，難溶于水及石油醚。

 2．脫氧穿心蓮內(nèi)酯(14-deoxy-andrographolide)：C₂₀H₃₀O₄，又稱(chēng)穿心蓮甲素，為無(wú)色片狀或長(zhǎng)方型結(jié)晶， mp l75~176.5℃，[a]_D -36(1％，氯仿)。味稍苦，可溶于甲醇、乙醇，丙酮、吡啶、氯仿、乙醚、苯、微溶水。 

 3．新穿心蓮內(nèi)酯（neo-andrographolide )：C₂₆H₄₀O₈，又稱(chēng)穿心蓮丙素、穿心蓮新苷，為無(wú)色柱狀結(jié)晶，mp l67~168℃。無(wú)苦味，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶，微溶于氯仿和水，不溶于石油醚。

穿心蓮內(nèi)酯 脫氧穿心蓮內(nèi)酯 新穿心蓮內(nèi)酯

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/b>

1. 掌握穿心蓮內(nèi)酯類(lèi)二萜化合物的理化性質(zhì)和提取分離方法。

2. 學(xué)習(xí)氧化鋁柱色譜的原理和操作方法。

3. 通過(guò)穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成，掌握使脂溶性產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為水溶性產(chǎn)物的一種方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理（綜合性實(shí)驗(yàn))

穿心蓮中的內(nèi)酯類(lèi)化合物易溶于甲醇、乙醇．丙酮等溶劑，故利用此性質(zhì)選用乙醇提取之，穿心蓮中含有大量葉綠素，可用活性炭脫色法除去葉綠素類(lèi)雜質(zhì)；利用穿心蓮內(nèi)酯與脫氧穿心蓮內(nèi)酯在氯仿中溶解度不同，初步將二者分離；利用穿心蓮內(nèi)酯與脫氧穿心蓮內(nèi)酯結(jié)構(gòu)上的差異，用氧化鋁柱分離二者，將穿心蓮內(nèi)酯制成亞硫酸氫鈉加成物以增加其在水中的溶解性。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1．儀器和試劑

玻璃色譜柱（2×30cm)及配套分液漏斗，濾紙，50ml三角瓶數(shù)個(gè)， 恒溫水浴鍋，蒸發(fā)皿，玻璃板（5×20cm)，色譜缸，玻璃漏斗，鐵架臺(tái)，500ml園底燒瓶，抽濾瓶，布氏漏斗，冷凝器，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，硅膠薄層板，顯色試劑噴瓶，電吹風(fēng)，錐形瓶(50m1)等。

穿心蓮粗粉，95％乙醇，活性炭，丙酮，氯仿，甲醇，正丁醇，亞硫酸氫鈉，無(wú)水乙醇，0.3％亞硝酰鐵氰化鈉，10％的正丁醇?xì)溲趸�鈉溶液，3，5-二硝基苯甲酸堿性溶液，50％氫氧化鉀甲醇試液。

2. 實(shí)驗(yàn)方法

 (一)內(nèi)酯類(lèi)成分的提取

1)提�。悍Q(chēng)取穿心蓮粗粉100g，置圓底燒瓶中，加95％乙醇以浸過(guò)藥粉2cm為度，回流1小時(shí)，過(guò)濾，藥渣再加適量乙醇回流2次，每次1小時(shí)，過(guò)濾，合并三次濾液，回收乙醇至總體積的1/5量，放冷，即為內(nèi)酯類(lèi)成分總提取物。

2)脫色：將上述內(nèi)酯類(lèi)成分總提取物加入原料量的15~30％活性炭，加熱回

流30分鐘，脫色后的溶液再濃縮至15~2ml左右，放置析晶。

 (二)分離、精制

 1)穿心蓮內(nèi)酯的分離結(jié)晶法，將活性炭脫色后的濃縮液放置析晶，濾取結(jié)晶，并用少量水洗滌即得穿心蓮內(nèi)酯粗品(含少量脫氧穿心蓮內(nèi)酯)。母液待分離脫氧穿心蓮內(nèi)酯。

 2)穿心蓮內(nèi)酯的精制將粗品穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶加40倍量丙酮，加熱回流l0分鐘，過(guò)濾不溶物再加20倍量丙酮，加熱回流l0分鐘，過(guò)濾，合并二次丙酮液，回收丙酮至三分之一量，放置析晶，濾取白色顆粒狀結(jié)晶，即為穿心蓮內(nèi)酯精品。做薄層鑒定。

 3)脫氧穿心蓮內(nèi)酯分離

將結(jié)晶法析出的穿心蓮內(nèi)酯母液水浴蒸發(fā)至稠膏狀，再加氯仿70ml，盡力攪拌后濾出氯仿層，殘?jiān)�再加氯�?0ml同法處理。合并二次濾液，水浴回收至5ml，將此濃縮液上氧化鋁柱(2×30cm)。用中性氧化鋁約30~35g，氯仿濕法裝柱，用氯仿洗脫，控制流速為2~3ml/分，每份10ml，約收12~15份。各流份濃縮后簿層鑒定，合并相同流份，蒸干氯仿，用丙酮結(jié)晶二次，得白色結(jié)晶即為脫氧穿心蓮內(nèi)酯，做薄層鑒定。

(三)穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成物的制備

取穿心蓮內(nèi)酯精制品0.5g置50ml圓底燒瓶中，加95％乙醇5ml及計(jì)算量的4％的亞硫酸氫鈉水溶液，加熱回流30分鐘，反應(yīng)液蒸出乙醇，再加5mJ水溶解，冷卻后過(guò)濾，濾液用少量氯仿洗滌三次，水液濃縮至干。殘留物加乙醇l0~20ml溶解，濾除不溶物，乙醇溶液濃縮放置或抽松，得白色粉末。粗品用乙醇-氯仿重結(jié)晶得到穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成產(chǎn)物。

 (四)鑒定

 1)穿心蓮內(nèi)酯的鑒定：

(1) 物理常數(shù)：mp 230~232℃。

(2) 薄層色譜： 吸附劑：硅膠G-CMC。展開(kāi)劑：氯仿-無(wú)水乙醇(20:1)。

顯色劑：碘蒸氣。結(jié)果：穿心蓮內(nèi)酯在常量下為一個(gè)斑點(diǎn)。

(3) 顯色反應(yīng)：

①亞硝酰鐵氰化鈉堿液反應(yīng)(Legal 反應(yīng))：取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許放在比色板上，加乙醇0.2ml溶解，加0.3％亞硝酰鐵氰化鈉溶液2滴10％的氫氧化鈉溶液2滴。

②3，5-二硝基苯甲酸堿液反應(yīng)(Kedde 反應(yīng))： 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許，于比色板上，加乙醇0.2ml溶解，加3，5-二硝基苯甲酸堿性溶液2滴，呈紫色。

③50％氫氧化鉀甲醇試液反應(yīng)：穿心蓮內(nèi)酯遇氫氧化鉀甲醇溶液呈紫色。

2)脫氧穿心蓮內(nèi)酯的鑒定：

  (1) 測(cè)熔點(diǎn)：mp l75~ 176.5 ℃。

   (2) 薄層鑒定：條件同穿心蓮內(nèi)酯。

3)穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成物的鑒定：

  (1) 測(cè)熔點(diǎn)：mp 226~227℃。

   (2) 薄層鑒定：吸附劑，硅膠G-CMC板。

   展開(kāi)刑：A.氯仿-甲醇(9:1)，B.氯仿-正丁醇-甲醇(2:1:2)，C.氯仿-丙酮-乙醇-水(5:5:5:1)。顯色劑：3、5-二硝基苯甲酸堿性溶液 。

   樣品：①穿心蓮內(nèi)酯乙醇液  ②穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成物。

   結(jié)果：用展開(kāi)劑A，樣品②留在原點(diǎn)、用展開(kāi)劑B、C，樣品①移至前沿，樣品②R_f值在0.5左右。

四、復(fù)習(xí)題

   1. 根據(jù)穿心蓮內(nèi)酯類(lèi)成分的不同結(jié)構(gòu)，判斷各自的極性大小，分析出各成分在薄層板上的R_f值。

   2．試說(shuō)明穿心蓮內(nèi)酯顯色反應(yīng)的機(jī)理。

實(shí)驗(yàn)八  黃芩苷的提取分離

（ 設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn))

一. 概述

   黃芩苷是中藥黃芩中具有抗菌作用的主要有效成分，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌有抑制作用，臨床上用于上呼吸道感染，急性扁桃腺炎、急性咽炎、肺炎及痢疾等疾病。近年來(lái)報(bào)導(dǎo)用以治療肝炎，有降低轉(zhuǎn)氨酶的作用，如市售中成藥銀黃口服液、銀黃片中的主要成分之一是黃芩苷。

   黃芩為唇形科植物黃芩(Scutellaria baica lensls Georg．)的根。從黃芩醫(yī)學(xué)招聘網(wǎng)根中提

取分離出的黃酮類(lèi)成分有6種，黃芩素(5，6，7-三羥基黃酮)及其苷(C7-葡萄糖醛

酸)、漢黃芩素(5，7-二羥基-8-甲氧基黃酮)及其苷(C7-葡萄糖醛酸)、7-甲基黃芩素及5，8-二羥基-7-甲氧基黃酮．其中以黃芩苷(Baicalin)含量最高，而漢黃芩素(Wo

gonln)則是我國(guó)黃芩中所特有的成分。

二. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/b>

1. 學(xué)習(xí)查閱天然藥物化學(xué)主要文獻(xiàn)資料的方法

2．通過(guò)分析文獻(xiàn)資料結(jié)合所學(xué)知識(shí)，自己設(shè)計(jì)并實(shí)施提取分離黃芩苷，并進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定的方法，以提高學(xué)生獨(dú)立思考和解決問(wèn)題的能力。

三. 文獻(xiàn)綜述

要求學(xué)會(huì)系統(tǒng)查閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)的方法，有詳細(xì)的閱查記錄及資料，后寫(xiě)出綜述，綜述內(nèi)容如

1．黃芩的植物來(lái)源、品種、科屬及分布

2．黃芩苷的臨床應(yīng)用和藥理活性研究概況。

3．黃芩中主要化合物的名稱(chēng)、熔點(diǎn)、結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、提取分離方法、結(jié)構(gòu)鑒定手段。

四. 提取分離方法設(shè)計(jì)  

1．根據(jù)文獻(xiàn)資料及所學(xué)有關(guān)知識(shí)簡(jiǎn)述提取純化分離黃酮類(lèi)化合物的方法。

2．設(shè)計(jì)提取純化黃芩苷方法 。

3．列出所需實(shí)驗(yàn)材料的名稱(chēng)及規(guī)格，并安排實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

五. 黃芩苷的結(jié)構(gòu)鑒定

1．簡(jiǎn)述檢查一個(gè)化合物純度的方法，黃酮結(jié)構(gòu)鑒定程序，用化學(xué)和波譜方法確定其結(jié)構(gòu)的途徑。

2．根據(jù)黃芩苷的結(jié)構(gòu)提出鑒定其結(jié)構(gòu)的具體方案。

3．將各方案于全組討論，優(yōu)選好的方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

六. 總結(jié)與討論 

附錄一   常用試劑的配制及使用方法

一、生物堿沉淀試劑

1. 碘化鉍鉀試劑（Dragendorff試劑)

溶液Ⅰ：0.85g次硝酸鉍溶于10ml冰醋酸與40ml水中。

溶液Ⅱ：8g碘化鉀溶于20ml水中。

制備液：溶液Ⅰ與Ⅱ等體積混合，可于棕色瓶中保存較長(zhǎng)時(shí)間，一般制備液可作為沉淀劑用。

噴霧劑：1ml制備液和2ml醋酸及10ml水臨用前混合即得。生物堿和某些含氮化合物顯桔紅色斑點(diǎn)。

2. 碘化汞鉀試劑（Mayer試劑)

制備液：1.36g氯化汞和5g碘化鉀各溶于20ml水中，等體積混合后稀釋至100ml。

顯色劑：制備液加1/10體積的17％鹽酸。

3. 碘-碘化鉀試劑（Wager 試劑)

  1g碘和10g 碘化鉀溶于50ml水，加熱，加2ml冰醋酸，用水稀釋到100ml。

4. 硅鎢酸試劑（Bertrand 試劑)

5g硅鎢酸溶于100ml水中，加10％鹽酸至pH2左右。

5. 磷鉬酸和磷鎢酸試劑

顯色劑：5~10％的磷鉬酸或磷鎢酸的乙醇溶液。噴灑后120℃加熱。

沉淀劑：磷鉬酸鈉20g溶于硝酸中，加水使成10％溶液。

二、酚類(lèi)檢識(shí)試劑

1.三氯化鐵試劑：1~5％三氯化鐵的水溶液或乙醇溶液，并加少許鹽酸。

2. 鐵氰化鉀－三氯化鐵試劑：

溶液Ⅰ：2％鐵氰化鉀水溶液

溶液Ⅱ：1％三氯化鐵水溶液

臨用前溶液Ⅰ與溶液Ⅱ等體積混合。

3.  4-氨基安替比林-鐵氰化鉀試劑（Emerson反應(yīng))

   噴霧劑Ⅰ：2% 4-氨基安替比林乙醇溶液

噴霧劑Ⅱ：8％ 鐵氰化鉀水溶液

先噴溶液Ⅰ，再?lài)娙芤孩蚝�，將薄層板放于含�?5%氨水的密閉容器中顯紅橙色～淡紅色。

4. Gibb’s試劑：溶液Ⅰ：0.5％2，6-二溴（氯)苯醌－氯亞胺乙醇溶液。

溶液Ⅱ：硼酸－氯化鉀－氫氧化鉀緩沖液（pH9.4)

三、內(nèi)酯、香豆素類(lèi)的試劑

 1.異羥肟酸鐵試劑：

溶液Ⅰ：7％鹽酸羥胺甲醇溶液。

溶液Ⅱ：10％氫氧化鉀甲醇溶液。

溶液Ⅲ：1g三氯化鐵溶于1％鹽酸100ml中。

試管反應(yīng)時(shí)先加Ⅰ、Ⅱ，然后再加Ⅲ。

作顯色劑時(shí)將Ⅰ、Ⅱ兩液按1:2比例混合，過(guò)濾，用濾液噴灑，再?lài)姙⑷?/p>

液Ⅲ。

四、黃酮類(lèi)檢識(shí)試劑  

1. 氨氣

2. 氫氧化鉀試劑：10％氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液

3. 1％或5％碳酸鈉溶液

4. 三氯化鋁試劑（Aluminum chloride)：1％或5％三氯化鋁的乙醇溶液。

5. 醋酸鎂試劑：0.5～2％醋酸鎂的甲醇溶液。

6. 鋯－枸櫞酸試劑：

試劑Ⅰ：2％的二氯氧鋯（ZrOCl₂)甲醇溶液。

試劑Ⅱ：2％的枸櫞酸甲醇溶液。

使用時(shí)分別加入試劑Ⅰ和Ⅱ。

7. 三氯化銻試劑：10％三氯化銻的氯仿溶液，100℃烤5分鐘。

五、蒽醌類(lèi)檢識(shí)試劑

1. 氨氣

2. 氫氧化鉀試劑：10％氫氧化鉀水溶液。

3. 醋酸鎂試劑：5％醋酸鎂甲醇溶液。

4. 1％硼酸試劑：1％硼酸水溶液。

六、強(qiáng)心苷類(lèi)檢識(shí)試劑

1. 3，5二硝基苯甲酸（Kedde)試劑

溶液Ⅰ：2％3，5二硝基苯甲酸甲醇溶液。

   溶液Ⅱ：1mol/L氫氧化鉀甲醇溶液或5％氫氧化鈉乙醇溶液。

   應(yīng)用前試劑Ⅰ、Ⅱ等量混合。強(qiáng)心苷顯紫紅色，幾分鐘后退色。

2. 亞硝酰鐵氰化鈉－氫氧化鈉（Legal)試劑

  溶液Ⅰ：0.5％亞硝酰鐵氰化鈉水溶液。

溶液Ⅱ：10％氫氧化鈉溶液。

檢識(shí)反應(yīng)時(shí)，先將樣品蒸干，溶于吡啶，加溶液Ⅰ，搖勻后再加溶液Ⅱ。

3. 堿性苦味酸（Baljet)試劑

溶液Ⅰ：3.6％苦味酸甲醇溶液。

  溶液Ⅱ：1％氫氧化鈉溶液。

  使用時(shí)溶液Ⅰ和溶液Ⅱ以10:1混合。

4. 氯胺T－三氯醋酸試劑

 3％氯胺T水溶液及25％三氯醋酸的乙醇液以1:4混合。臨時(shí)用新配。

七、皂苷類(lèi)檢識(shí)試劑

1.醋酐-濃硫酸（Liebermann)試劑

溶液Ⅰ：醋酐

溶液Ⅱ：濃硫酸

樣品蒸干溶于醋酐，沿管壁小心加入濃硫酸。

2.磷鉬酸試劑：25％磷鉬酸乙醇溶液，噴霧后140℃加熱5～10分鐘，皂苷元均呈深藍(lán)色。

3.10％硫酸乙醇溶液

八、萜和甾體類(lèi)化合物的試劑

1. 香草醛-濃硫酸試劑 5％香草醛-濃硫酸液或0.5g香草醛溶于100ml硫酸-乙醇（4:1)中。

2. 三氯化銻試劑  25g三氯化銻溶于75g氯仿中。

3. 三氯醋酸試劑  3.3g三氯醋酸溶于10ml氯仿，加入1~2滴過(guò)氧化氫溶液。

九、糖類(lèi)檢識(shí)試劑

1. α-萘酚－濃硫酸（Molish)試劑

1g α-萘酚溶于10ml乙醇中。

在試管中加1~2滴α-萘酚醇液，沿壁緩慢加濃硫酸1ml，界面處有紫環(huán)，即為糖的正反應(yīng)。

2. 茴香醛－硫酸試劑

濃硫酸1ml加到含茴香醛0.5ml的乙醇溶液50ml中，需臨用前配制。噴霧后100～105℃烤，各種糖顯不同顏色。

3. 苯胺－鄰苯二甲酸試劑

將0.93g苯胺和1.66g鄰苯二甲酸溶于在100ml水飽和的正丁醇中。噴霧后105℃加熱10分鐘。

4. 堿性酒石酸銅（Fehling)試劑

試劑Ⅰ：硫酸銅結(jié)晶6.23g，溶于100ml水中。

試劑Ⅱ：酒石酸鉀鈉結(jié)晶34.6g，氫氧化鈉10g溶于100ml水中，貯存于具塞的試劑瓶中。使用時(shí)Ⅰ、Ⅱ兩液等量混合。

5. 氨性硝酸銀（Tollen)試劑：

硝酸銀1g加水20ml溶解，注意滴加適量的氨水，隨加隨攪拌，至開(kāi)始產(chǎn)生沉淀將近全溶為止，過(guò)濾。

6. 三氯化鐵－冰醋酸（Keller－Killiani)試劑

試劑Ⅰ：1％三氯化鐵溶液0.5ml，加冰醋酸至100ml。

試劑Ⅱ：濃硫酸  使用時(shí)分別加入兩液。

7. 呫噸氫醇－冰醋酸（Xanthydrol)試劑

10mg呫噸氫醇溶于100ml冰醋酸（含1％的鹽酸)中。

十、有機(jī)酸檢識(shí)試劑

1. 溴甲酚紫試劑  藍(lán)色背景上顯黃色。

   溴甲酚綠0.04g溶于50％乙醇100ml，用0.1N氫氧化鈉溶液調(diào)至pH10.0。

2. 溴酚藍(lán)試劑  0.04％溴酚蘭乙醇溶液，用0.1N氫氧化鈉溶液調(diào)至微堿性。

十一、氨基酸檢識(shí)試劑

茚三酮（Ninhydrin)試劑

0.3g茚三酮溶于正丁醇100ml中，加醋酸3ml或0.2g茚三酮溶于100ml乙醇或丙酮中。噴霧后加熱至出現(xiàn)顏色。

附錄二  常用有機(jī)溶劑的性能

1．甲醇 Methanol（Methyl alcohol   MeOH )CH₃OH

  無(wú)色易揮發(fā)易燃的液體，能與水和多種有機(jī)溶劑如醇類(lèi)、乙醚、苯等混溶，易被氧化或脫氫而成甲醛，常用作溶劑或色譜展開(kāi)劑。

   注意：甲醇蒸氣與空氣形成爆炸性化合物，爆炸極限6.0～36.5％（體積)。甲醇引起暈厥、抽搐，神經(jīng)的損害以及視力障礙和失明，飲后能致目盲。

2．乙醇 Ethanol（Ethyl alcohol  EtOH)CH₃CH₂OH

   無(wú)色透明易揮發(fā)和易燃然燒的液體，溶于水及各種醇、乙醚、苯、氯仿、石油醚等有機(jī)溶劑，有吸濕性，乙醇對(duì)很多化合物溶液度較好，為一種常用溶劑。

   注意：乙醇蒸氣和空氣混合能析出爆炸性混合物，爆炸極限3.5～18％（體積)。

3．丙酮  Acetone（Me₂CO)CH₃COCH₃

   無(wú)色易揮發(fā)易燃的液體，有微香氣味，能與水、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等混溶，對(duì)有機(jī)化合物溶解度較好，為常用溶劑。

注意：丙酮蒸氣和空氣混合能析出爆炸性混合物，爆炸極限2.55～12.8％（體積)。

4．三氯甲烷（氯仿)Chloroform  CHCl₃ 

無(wú)色透明易揮發(fā)的液體，稍有甜味。不易燃燒。微溶于水，溶于乙醇、乙醚、苯、石油醚等有機(jī)溶劑，對(duì)有機(jī)化合物溶解度較好，為常用溶劑。

注意：氯仿不能與金屬鈉接觸，因?yàn)橛斜�炸的危險(xiǎn)。氯仿主要作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，有麻醉作用，長(zhǎng)期接觸氯仿可引起肝臟損害。

5．乙酸乙酯（醋酸乙酯) Ethyl  acetate（EtOAc)CH₃COOCH₂H₅

   無(wú)色可燃性液體，有果子香氣，易燃，微溶于水，溶于乙醇、氯仿、乙醚和苯等，遇堿加溫水解，常用作溶劑及抽提黃酮類(lèi)等成分的萃取劑。

注意：乙酸乙酯蒸氣和空氣混合能析出爆炸性混合物，爆炸極限2.2～11.2％（體積)。

6．乙醚Ether （Et₂O)C₂H₅OC₂H₅
   易燃易流動(dòng)的無(wú)色透明液體，難溶于 水，遇乙醇、石油醚、氯仿等有機(jī)溶劑能任意比例相溶。常用作溶劑及抽提脂溶性成分的萃取劑。

   注意： 乙醚極易揮發(fā)和著火。蒸氣和空氣混合能析出爆炸性混合物，爆炸極限1.85～36.5％（體積)。蒸氣能使人失去知覺(jué)甚至死亡。

7．苯 Benzene C₆H₆

無(wú)色易揮發(fā)易燃燒的液體,有芳香氣味。不溶于水,溶于乙醇、乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑。

注意： 苯蒸氣和空氣混合能析出爆炸性混合物，爆炸極限1.5～8.0％（體積)。苯的毒性主要是對(duì)造血系統(tǒng)的損害，早期中毒表現(xiàn)為白細(xì)胞數(shù)的持續(xù)降低和頭暈、乏力等。

8．石油醚 petroleum ether

   石油醚是低分子量的烴類(lèi)（主要是戊烷和己烷)的化合物，和汽油相同，只是比汽油所含雜志少，組分較簡(jiǎn)單。無(wú)色澄清，有象乙醚的氣味。不溶于水，溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑，對(duì)脂類(lèi)成分溶解度大。實(shí)驗(yàn)室使用石油醚沸點(diǎn)范圍分為30～60℃（稱(chēng)petroleum ether)60～90℃（稱(chēng)petroleum benzine)90～120℃（稱(chēng)ligroin)。

注意：容易揮發(fā)和著火。

9．正丁醇 n-butyl alcohol(n-BuOH) CH₃CH₂CH₂CH₂OH

無(wú)色液體，有酒的氣味。微溶于水，溶于乙醇和乙醚，用作溶劑和脫水劑及分離水溶性成分的萃取劑。

注意：蒸氣和空氣形成爆炸性混合物，爆炸極限3.7～10.2％（體積)。

10．己烷(正己烷) Hexane  CH₃(CH₂)₄CH₃

無(wú)色揮發(fā)性液體。有微弱的特殊氣味。極易揮發(fā)著火。不溶于水，溶于乙醇、氯仿、丙酮和乙醚。用作溶劑、展開(kāi)劑，特別適用于萃取植物油。在60～70℃沸程的石油醚中，主要為正己烷，因此在許多方面可以用該沸程的石油醚代替正己烷作溶劑。

注意：己烷和空氣混合物的爆炸極限1.8～8％（體積)。

11．二氯甲烷 Dichloromethane  CH₂Cl₂

  無(wú)色透明揮發(fā)性液體。有刺激性芳香氣味。蒸氣不燃燒。微溶于水，能與醇、醚混合。主要代替易燃的石油醚、乙醚。

注意：二氯甲烷蒸氣與空氣形成爆炸性混合物，爆炸極限6.2～15.0％（體積)。不能用金屬鈉干燥，否則有爆炸的危險(xiǎn)。

12．甲苯 Toluene  C₆H₅CH₃

無(wú)色易揮發(fā)性液體，有芳香氣味。難溶于水，溶于乙醇、乙醚和丙酮。用作溶劑或色譜用展開(kāi)劑。

注意：蒸氣與空氣形成爆炸性混合物，爆炸極限1.2～7.0％（體積)。毒性同苯。

13．乙酸（醋酸) Acetic acid （HAc)CH₃COOH

無(wú)色澄清液體，有刺激性氣味。溶于水、乙醇和乙醚。無(wú)水的醋酸在低溫下似固體塊狀，俗稱(chēng)冰醋酸。普通的醋酸約含純醋酸36％，常用作紙色譜的展開(kāi)劑。

注意：醋酸與空氣混合物中含量超過(guò)4％ （體積)時(shí)可引起爆炸。醋酸碰到皮膚產(chǎn)生水皰。

14．甲酸（蟻酸)  Formic acid  HCOOH

無(wú)色而有刺激性的液體，溶于水、乙醇、乙醚和甘油。有還原性，易被氧化成水和二氧化碳。常作色譜用展開(kāi)劑。

注意：甲酸有強(qiáng)烈腐蝕性，能刺激皮膚起泡。

15．吡啶（氮雜苯) Pyridine

無(wú)色或微黃色液體，有特殊氣味。溶于水、乙醇、乙醚、苯、石油醚和動(dòng)植物油。是許多有機(jī)化合物的優(yōu)良溶劑。

注意：蒸氣與空氣形成爆炸性混合物，爆炸極限1.8～12.4％（體積)。吡啶對(duì)皮膚有刺激作用，可引起濕疹樣的皮膚損害。吸入吡啶蒸氣可出現(xiàn)頭暈、惡心和肝腎損害，大量吸入能麻痹中樞神經(jīng)系統(tǒng)。

16．甲酰胺  Formanide  HCONH₂

無(wú)色澄清油狀液體，溶于水、低級(jí)醇和二元醇，不溶于烴類(lèi)和乙醚。油吸濕性。與醇類(lèi)共熱成甲酸酯，常用作溶劑或聚酰胺柱色譜時(shí)洗脫劑。

注意：甲酰胺不能用硫酸鈣干燥，因能被溶解，溶液程膠狀。

17．二甲基甲酰胺 Dimethyl  Formanide  HCON（CH₃)

無(wú)色液體。有氨的氣味。與水和大多數(shù)有機(jī)溶劑可任意混溶。化學(xué)和熱穩(wěn)定性良好，對(duì)有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物的溶解范圍廣，常用作溶劑和聚酰胺柱色譜分離黃酮類(lèi)成分的洗脫劑。

注意：應(yīng)避光保存，否則會(huì)慢慢分解為二甲胺和甲醛，二甲基甲酰胺屬低毒類(lèi)物質(zhì)。對(duì)皮膚和粘膜有輕度刺激作用，并能經(jīng)皮膚吸收。

18．乙腈（甲基氰) Acetonitrile CH₃CN

無(wú)色液體，有芳香氣味。乙腈和水、醇及乙醚可任意混溶。

注意：乙腈有毒、常含有相當(dāng)多的游離氫氰酸，這是其危險(xiǎn)的主要原因。

19．二甲亞砜 Dimethyl Sulfoxide  (CH₃)₂SO

無(wú)色、無(wú)臭微帶苦味的強(qiáng)吸濕性液體。在常壓下加熱至沸騰可部分分解。能溶于水，溶于乙醇、丙酮、乙醚、苯和氯仿。

注意：二甲亞砜與某些物質(zhì)如氰化鈉、高氯酸鎂等混合時(shí)可能發(fā)生爆炸。

20．環(huán)己烷 Cyclohexane CH₂(CH₂)₄CH₂

無(wú)色液體。不溶于水,當(dāng)溫度高于57℃，能與水、乙醇、甲醇、苯、醚、丙酮等混溶。

21. 四氫呋喃 Tetrahydrofuran CH₂(CH₂)₂CH₂O

   無(wú)色透明液體，有乙醚氣味。溶于水和多數(shù)有機(jī)溶劑。易燃燒，在空氣中能形成爆炸性過(guò)氧化物。

常用溶劑的物理常數(shù)