血清鈣測定的方法很多,有比色法、原子吸收法、離子選擇電極法等。比色法是根據(jù)金屬指示劑或染料選擇性地與醫(yī)學招聘鈣結(jié)合后產(chǎn)生顏色變化,檢測特定波長的吸光度變化;而離子選擇電極法是利用鈣離子選擇電極測定血清中的離子鈣,然后間接計算出血清總鈣。筆者在日常工作中發(fā)現(xiàn)部分酸中毒患者血清鈣濃度明顯升高,為探討血液pH值對鈣測定的影響,筆者分別用離子選擇電極法和比色法對同一份標本不同pH條件下測定血清鈣,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。
1.材料與方法
1.1 標本來源 標本均來自本院門診和住院病例,收集無黃疸、無溶血、無脂血標本混合血清20份,每份6 mL 。
1.2 儀器 比色法用BS-300 全自動生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)) ; 離子選擇電極法用MI-921D 電解質(zhì)分析儀(深圳越華科技有限公司生產(chǎn))。
1.3 試劑 比色法采用偶氮胂Ⅲ法,試劑為深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的BS-300 全自動生化分析儀配套試劑,批號111507001 ;離子選擇電極法試劑為深圳越華科技有限公司生產(chǎn)的MI-921D 電解質(zhì)分析儀配套試劑,批070083,嚴格按照儀器和試劑盒說明書操作。
1.4 方法 將每份標本6mL血清分成3組,每組2 mL ,其中第1 組分別加入10μL 中性生理鹽水(對照組) ,第2組分別加入10μL 1mol/L HCl(酸性組) ,第3 組分別加入10μL 1mol/L NaOH(堿性組) ,然后將各組標本分別用電解質(zhì)分析儀測定離子鈣、總鈣及p H 值,生化分析儀上測定其總鈣。
1.5 統(tǒng)計學處理 采用t檢驗。
2 結(jié)果
對照組比色法和離子選擇電極法測得鈣濃度分別為(2.51±0.24)mmol/L 和(2.44±0.23) mmol/L,二者差異無統(tǒng)計學意義( P >0.05) ;酸性組為(2.43±0.19) mmol/L 和(2.67±0.21) mmol/L ,離子選擇電極法的結(jié)果比比色法高,二者差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);堿性組為(2.45±0.22)mmol/L 和(2.23±0.18) mmol/L ,離子選擇電極法的結(jié)果比比色法低,二者差異有統(tǒng)計學意義( P <0.01)。在比色法測定血鈣中,酸性組的結(jié)果和堿性組與對照組差異均無統(tǒng)計學意義( P > 0.05) ,但在離子選擇電極法中,酸性組的結(jié)果比對照組高,差異有統(tǒng)計學意義( P<0.01) ,而堿性組比對照組低,兩組差異也有統(tǒng)計學意義( P <0.01)。結(jié)果見表1 。
3.討論
血清中的鈣可分為擴散性鈣和非擴散性鈣兩大類,前者約占60% ,其中包括離子鈣約45%以及與檸檬酸、磷酸等結(jié)合的復合鈣約15 %;非擴散性鈣為蛋白結(jié)合鈣,約占血鈣的40% ,其中包括清蛋白結(jié)合鈣約32 %和球蛋白結(jié)合鈣約8%。離子鈣是鈣的生理活性形式,它直接影響神經(jīng)肌肉的應(yīng)激性和甲狀旁腺釋放甲狀旁腺激素。血清鈣的測定對患者是否存在高鈣血癥或低鈣血癥的診斷以及病因追查具有重要意義。血清鈣測定的影響因素很多,其中血液的酸堿度便是其中之一。本組資料顯示在比色法測定結(jié)果中,標本的pH 值在7.22～7.61之間對檢測結(jié)果沒有影響,這是因為比色法不僅能檢測離子鈣,也能檢測結(jié)合鈣,一定范圍內(nèi)變化的pH 值僅影響血清中離子鈣與蛋白結(jié)合鈣之間的動態(tài)平衡,血清鈣濃度變化不大。但在離子選擇電極法中,由于鈣電極只能檢測血清中的離子鈣,凡是影響離子鈣濃度的因素均可影響鈣測定結(jié)果。酸性條件促使蛋白結(jié)合鈣解離,蛋白結(jié)合鈣的游離度增高,因而間接測得的鈣濃度就增高。同理,當被測樣品的pH 值偏堿性時,血清離子鈣和其他成分結(jié)合加強,使樣品中離子鈣的濃度降低,血清鈣濃度也相應(yīng)降低。在實際工作中,一般采用負壓儲血管采集標本,未能隔絕空氣送檢,由于血液離體后,血液中溶解的CO2釋放到空氣中,導致血液pH 值逐步升高,從而使實測離子鈣濃度下降,血清鈣降低。因此,對于沒有酸堿代謝紊亂的患者,標準離子鈣濃度與實測離子鈣基本一致,用離子選擇電極法測得血清鈣的結(jié)果比較可靠。當患者有嚴重的酸堿紊亂時,二者差異較大,此時應(yīng)報告經(jīng)pH 值校準到7.4的標準離子鈣值
,或者用比色法測定,以減少pH對結(jié)果的影響,使之能真實反映患者的血鈣濃度。
本站點評：用向血清中加入強酸或強堿的方式改變血清的pH值，再來測定血清鈣，以研究pH對血清鈣測定的影響，此設(shè)計不妥，因為按文中的方法加入酸或堿后，血清的pH值將達到3或11左右，大大超出了理論上血液pH值的范圍，所以研究結(jié)果的指導意義并不大。
