中國幽門螺桿菌研究:對幽門螺桿菌有效中西藥物的篩選

在中藥方劑胃憂愈治療消化性潰瘍及伴發(fā)幽門螺桿菌（Hp)相關(guān)性慢性胃炎取得良好效果，Hp清除率50％的基礎(chǔ)上，根據(jù)中醫(yī)理論和臨床實踐，參照中藥研究成果，應(yīng)用藥敏試驗方法對清熱解毒及可能具有抗菌作用的20種中藥進(jìn)行篩選，選擇對Hp有較好抑制作用者制成滅Hp膠囊。選用14種對Hp有效抗生素及各種藥物聯(lián)合進(jìn)行藥敏試驗，進(jìn)一步篩選療更佳的聯(lián)合用藥組合方案。

1　材料和方法

1.1　材料

Hp菌株分離培養(yǎng)：Hp菌株來自本院胃鏡室胃鏡檢查的慢性胃炎和消化性潰瘍患者幽門前區(qū)粘膜組織鉗取物，直接接種于空腸彎曲菌選擇性培養(yǎng)基（英格蘭Unipath公司產(chǎn)品)上，置微氧環(huán)境，37℃培養(yǎng)72h，檢查菌落，革蘭染色為陰性桿菌，尿素酶、氧化酶、過氧化氫酶試驗陽性。選擇從不同患者胃內(nèi)分離的菌株，生長良好者8株做為藥敏試驗菌。

1.2　方法

每種藥物或聯(lián)合用革均進(jìn)行8株從不同個體分離的Hp菌株的敏感試驗。平均抑菌直徑10mm以內(nèi)為輕度敏感；10mm～20mm為中度敏感；20mm以上為高度敏感。

1.2.1　有效西藥的篩選

將四環(huán)素、痢特靈、慶大霉素、紅霉素、甲硝唑、De－Nol、羥氨芐青霉素、氟呱酸、氟嗪酸，氨芐青霉素、先鋒必素、復(fù)達(dá)新、西力欣、菌必治14種藥物各0.1g，加無菌蒸餾水1ml制成10％溶液。將直徑5mm藥敏紙片浸入藥液，浸透后取出，分別裝于干燥無菌瓶內(nèi)置37℃孵箱內(nèi)烘干，滅菌后分別貼于已接種好Hp菌的血瓊脂平板上，置微氧環(huán)境，37℃培養(yǎng)48h，測量抑菌直徑。將上述藥液0.1ml分別和De-Nol或（和)甲硝唑0.1ml混合，再將上述14種藥物按排列組合方法組成3種不同藥物的聯(lián)合，取各種不同的藥液各0.1ml相混合，按上述方法進(jìn)行藥敏試驗。

1.2.2　有效中藥的篩選

將黃連、黃柏、白芍、大黃、連翹、黃芩、白花蛇舌草、烏梅、雙花、赤芍、三七、公英、地丁、丹皮、生地、水牛角、川樸、丹參、人參、龍膽草各10g，加水100ml，煎至10ml。將“胃憂愈”5倍濃縮粉劑，錫美散各10g加水50ml，加熱煎至10ml，雙層紗布過濾，為100％（g/v)原汁。將直徑5mm滅菌藥敏紙片，無菌操作在高壓滅菌后的中藥原汁中完全浸泡，浸透后取出，然后貼于已接種好Hp菌的血瓊脂平板上，置微氧環(huán)境，37℃培養(yǎng)48h，檢測抑菌直徑。將人參，丹參，“胃憂愈”原汁0.5ml分別與以上單味中藥原汁0.5ml混合。再將20種單味中藥按排列組合方法，組合成三種藥物的混合液（每種0.3ml)進(jìn)行試驗。

2　結(jié)果

西藥敏感試驗中所選藥物在培養(yǎng)基上的中度和高度敏感（表1)。四環(huán)素、痢特靈、甲硝唑、De－Nol先鋒必素為中度敏感；慶大霉素、氨芐青霉素、氟呱酸、紅霉素、羥氨芐青霉素、氟嗪酸、復(fù)達(dá)新、西力欣，菌必治為高度敏感。本文所選藥物中，De－Nol與甲硝唑單一抑菌直徑為19.88mm±1.21mm，14.50mm±0.74mm，與四環(huán)素（21.25±0.78)，痢特靈（21.75±1.04)，先鋒必素（17.63±1.04)，羥氨芐青霉素（23.75±0.96)聯(lián)合則非常顯著的增加這幾種藥物的抑菌作用，較單一用藥差異非常顯著（P＜0.01)。也顯著增加氨芐青霉素（25.50±1.82)、氟呱酸（25.13±1.47)、西力欣（24.25±1.12)、菌必治（26.13±1.76)的抑菌作用（P＜0.05)。De－Nol和甲硝唑聯(lián)合再與所有單一藥物聯(lián)合均非常顯著的增加抑菌作用（P＜0.01或P＜0.05)。聯(lián)合用藥較單一用藥抑菌作用增強(qiáng)，這可能與抗生素的作用方式不同而產(chǎn)生協(xié)同作用有關(guān)。也是克服Hp對某種藥物原發(fā)耐藥的有效方法。三種藥物排列組合藥物效果，與含De－Nol和甲硝唑的三聯(lián)藥敏效果相比，其效果未見更佳者。另因De－Nol具有殺滅Hp感染仍應(yīng)采用含De－Nol和甲硝唑的聯(lián)合治療。復(fù)達(dá)新、西力欣、菌必治對Hp抑制作用強(qiáng)，在培養(yǎng)基上單一抑菌效果與其他藥物的三聯(lián)抑菌效果相似，今后如在臨床治療中也達(dá)到與三聯(lián)用藥相似的療效，也可成為一類較好的抗Hp藥物。

表1　西藥敏感試驗結(jié)果　　　　　（抑菌直徑mm，x±s)

^aP＜0.05，^bP＜0.01，υs單一藥物。

通過對20種中藥的敏感試驗，證實在培養(yǎng)基上丹皮、烏梅、大黃、三七、黃連、黃柏、白芍、丹參對Hp均具有抑制作用（表2)。人參與黃連（7.50±0.12)，黃柏（7.38±0.08)、白芍（7.25±0.04)，三七（7.63±0.22)、丹皮（9.63±0.38)聯(lián)合可輕度增加抑菌作用，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05)�？墒惯B翹（7.00±0.04)，龍膽草（7.25±0.06)，白花蛇舌草（7.00±0.02)等出現(xiàn)輕度抑菌作用，丹參與黃m.f1411.cn/yishi/柏聯(lián)合可顯著增加抑菌作用（10.10±0.24，P＜0.05)，也可使黃連（8.25±0.13)、烏梅（8.38±0.21)、白芍（7.38±0.08)、大黃（8.68±0.14)、丹皮（9.63±0.21)抑菌作用增加，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05)。胃憂愈與8種有效中藥聯(lián)合可顯著增加抑菌作用（8.13mm±0.16mm～12.63mm±0.15mm，P＜0.01或P＜0.01)。三種中藥聯(lián)合較單味中藥有與人參、丹參的聯(lián)合用藥抑菌作用增強(qiáng)（P＜0.01)。

表2　中藥敏感試驗結(jié)果（抑菌直徑mm　x±s)

^aP＜0.05，^bP＜0.01，υs單味中藥。

藥敏試驗結(jié)果顯示：單味中藥抑菌作用較北，均為輕度敏感，其中以丹皮、大黃、烏梅作用較強(qiáng)。聯(lián)合用藥以“胃憂愈”與8種有效中藥分別聯(lián)用效果增強(qiáng)，達(dá)到中度敏感，其中以丹皮、烏梅聯(lián)用效果較好（抑菌直徑12.25±0.26，12.63±0.16)。三種不同中藥聯(lián)用有8組達(dá)到中度敏感，其中以黃連、黃柏、烏梅（13.88±0.42)；黃連、丹皮、烏梅（13.63±0.14)；大黃、丹皮、烏梅（13.38±0.26)效果較好。

3　討論

1983年Marshall和Warren從慢性活動性胃炎患者胃粘膜中分離出Hp后，經(jīng)研究證實，Hp與慢性胃炎關(guān)系密切，與消化性潰瘍的頑固不愈和早期復(fù)發(fā)有關(guān)。Hp陽性的消化性潰瘍和慢性胃炎經(jīng)治療Hp后，消化性潰瘍的復(fù)發(fā)率降低，胃炎得到改善。目前所使用的鉍或抗生素單一用藥對Hp的根治率在20％以下，聯(lián)合用藥根治率提高；特別是近年報道三聯(lián)（De－Nol＋甲硝唑＋羥氨芐青霉素或四環(huán)素)用藥根治率可達(dá)85％左右，但聯(lián)合用藥副作用較大，因之，探索對Hp根治率較高而乏副作用的藥物和方法為當(dāng)今治療Hp相關(guān)疾病的重要課題。

近年來，關(guān)于中藥方劑治療Hp相關(guān)性疾病的研究多系在傳統(tǒng)方劑基礎(chǔ)上辨證加減或選用具有抗菌作用的中藥，尚乏針對抗Hp作用的研究，何種中藥對Hp具有殺滅作用尚未明了。為此，我們在胃憂愈治療消化性潰瘍；Hp相關(guān)性胃炎取得良好效果；Hp清除率50％的基礎(chǔ)上，為進(jìn)一步加強(qiáng)胃憂愈對Hp的治療作用，通過對20種可能具有抑制菌作用的清熱解毒藥進(jìn)行篩選，結(jié)果顯示：丹皮、烏梅、大黃、三七、黃連、黃柏、白芍、丹參8種中藥對Hp的抑制作用較弱（抑菌直徑6.88mm±0.12mm～9.25mm±0.42mm)。聯(lián)合用藥作用增強(qiáng)，特別是與胃憂愈聯(lián)合或三種有效藥物聯(lián)合達(dá)到中度敏感（抑菌直徑8.13mm±0.16mm～13.63mm±0.14mm)。加之胃憂愈具有補(bǔ)脾益氣、增強(qiáng)脾胃功能、活血化瘀、促進(jìn)胃組織血液循環(huán)，增強(qiáng)胃粘膜屏障功能，促進(jìn)病變恢復(fù)的良好作用。本研究還表明，通過單一或聯(lián)合藥敏試驗，De－Nol、甲硝唑、四環(huán)素在培養(yǎng)基上對Hp中度敏感，但與其他抗生素聯(lián)合后可明顯增加抗Hp作用，特別是De－Nol和（或)甲硝唑與其他抗生素聯(lián)合可顯著增加抗生素的抗Hp作用，故De－Nol和甲硝唑可做為聯(lián)合用藥的基礎(chǔ)。因此設(shè)想如何將Hp有效中藥加入胃憂愈方劑中組成不同新方，并與基礎(chǔ)二聯(lián)（De－Nol＋甲硝唑)或三聯(lián)（De－Nol＋甲硝唑＋羥氨芐青霉素或四環(huán)素)聯(lián)用，可望降低三聯(lián)副作用并獲得對Hp根治率高、對病變有治療作用的有效方法。