本品系用結(jié)核菌的液體培養(yǎng)物，經(jīng)殺菌后除去菌體，加溫濃縮制成的粘性液體，含有結(jié)核菌的新陳代謝產(chǎn)物，對(duì)已受結(jié)核菌感染或曾接受卡介苗免疫的相體，能引起特異的變態(tài)反應(yīng)。用以檢查是否已受結(jié)核菌的感染及觀察免疫反應(yīng)。
1 菌種
1.1 由中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。
1.2 制造舊結(jié)核菌素的菌種為人型結(jié)核菌。
1.3 菌種可凍干保存，亦可保存于駱（Lowenstein)氏培養(yǎng)基上，每3～6個(gè)月傳代一次。
2 制造
2.1 啟開(kāi)菌種接種于駱氏培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)2～3周，然后移種在蘇通綜合培養(yǎng)基或其他適宜培養(yǎng)基上，于27℃表面培育2～3周，再在甘油肉湯或蘇通培養(yǎng)基上移種1～2代供大量接種之用。
2.2 接種
用接種環(huán)挑取一塊生長(zhǎng)良好的菌膜，輕輕移種于5%（ml/ml)甘油肉湯或其他適宜培養(yǎng)基的表面，菌膜應(yīng)不下沉。
接種后37℃培育8～10周，要避免振動(dòng)以免菌膜下沉。培育3周左右如培養(yǎng)瓶中菌膜未鋪滿(mǎn)表面，或培養(yǎng)期間有污染者應(yīng)廢棄。
2.3 殺菌
高壓蒸汽121℃30分鐘，或100℃流動(dòng)蒸汽加熱1小時(shí)。
2.4 殺菌后用無(wú)菌絨布或?yàn)V紙過(guò)濾除去菌體。
2.5 濃縮
濾液置蒸發(fā)皿中于75～80℃水浴上加溫蒸發(fā)。應(yīng)在通風(fēng)柜內(nèi)進(jìn)行，并不時(shí)攪拌（亦可用其他方法)。濃縮至約為原量的1/10。
2.4 殺菌后用無(wú)菌絨布或?yàn)V紙過(guò)濾除去菌體。
2.5 濃縮
濾液置蒸發(fā)皿中于75～80℃水浴上加溫蒸發(fā)。應(yīng)在通風(fēng)柜內(nèi)進(jìn)行，并不時(shí)攪拌（亦可用其他方法)。濃縮至約為原量的1/10。
2.5.1 濃縮后取樣少許，進(jìn)行效價(jià)測(cè)定（參見(jiàn)2.7.4項(xiàng))。如效價(jià)較標(biāo)準(zhǔn)舊結(jié)核菌素為低，應(yīng)再適m.f1411.cn/job/當(dāng)濃縮，如較標(biāo)準(zhǔn)為高，可加入適量滅菌蒸餾水或50%（ml/ml)甘油，再重新抽樣測(cè)定效價(jià)，直至合格。然后，加入0.25%～0.5%（g/ml)苯酚或其他適宜防腐劑。
2.5.2 不同菌株生產(chǎn)的舊結(jié)核菌素可混合后進(jìn)行濃縮，亦可分別濃縮，效價(jià)測(cè)定合格后混合。
2.5.3 濃縮后的舊結(jié)核菌素應(yīng)放2～8℃最少1個(gè)月，使不溶解的物質(zhì)析出并除去（如用離心沉淀法)。然后除菌處理，并做無(wú)菌試驗(yàn)。
2.6 分批
同日殺菌的舊結(jié)核菌素作為1批， 同時(shí)有數(shù)瓶者，按瓶分為亞批。
2.7 半成品檢定
2.7.1 物理檢查
舊結(jié)核菌素為深棕色澄明液體，不應(yīng)含渣粒、沉淀物或其他雜質(zhì)，并有特殊的氣味。
2.7.2 無(wú)菌試驗(yàn)
按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
2.7.3 安全試驗(yàn)
用體重300～400g的健康豚鼠2只，每只腹腔注射1.0ml，觀察6周，豚鼠應(yīng)活存。到期解剖，肉眼觀察應(yīng)夫任何進(jìn)行性結(jié)核病變。如在觀察期間豚鼠死亡，以加倍量動(dòng)物進(jìn)行復(fù)試。
2.7.4 效價(jià)測(cè)定
標(biāo)準(zhǔn)舊結(jié)核菌素由中國(guó)藥品生物制品檢定所發(fā)給。
2.7.4.1 動(dòng)物試驗(yàn)
將標(biāo)準(zhǔn)及待檢結(jié)核菌素分別稀釋成1:1000、1:500、1:100等3個(gè)稀釋度，用體重400～600g已致敏的白色豚鼠最少4只，去毛后于背部脊柱兩側(cè)相對(duì)部位分別皮內(nèi)注射上述稀釋度的舊結(jié)核菌素各0.1ml（從尾側(cè)起先注射稀釋度高者)。于注射后24、48、72小時(shí)各觀察結(jié)果一次（亦可根據(jù)48小時(shí)的反應(yīng))，算出待檢和標(biāo)準(zhǔn)舊結(jié)核菌素的反應(yīng)面積總和之比即為反應(yīng)總面積比。同樣也可求出標(biāo)準(zhǔn)舊結(jié)核菌素的平均反應(yīng))。比值1±0.1者為合格。
2.7.4.2 人體反應(yīng)測(cè)定
動(dòng)物試驗(yàn)合格后做人體反應(yīng)測(cè)定，選擇對(duì)舊結(jié)核菌素1個(gè)單位反應(yīng)陽(yáng)性的敏感成人最少4人，每人于兩前臂內(nèi)側(cè)皮內(nèi)相對(duì)部位分別注射10單位、5單位、2.5單位的標(biāo)準(zhǔn)及待檢舊結(jié)核菌素各0.1ml，注射生24、48及72小時(shí)觀察結(jié)果，并求出其比值（計(jì)算方法與2.7.4.1項(xiàng)相同)。不同濃度亦可不在同一人身上注射，但人數(shù)要增加，每個(gè)稀釋度最少4人。
2.8 分裝
物理檢查、無(wú)菌試驗(yàn)、安全試驗(yàn)及效價(jià)測(cè)定合格后即可分裝，分裝后抽樣做成品檢定。
3 成品檢定
包括物理檢查、無(wú)菌試驗(yàn)、安全試驗(yàn)等，試驗(yàn)方法見(jiàn)2.7項(xiàng)。
4 保存與效期
保存于2～8℃暗處。自檢定合格之日起效期為5年。
5 稀釋舊結(jié)核菌素
5.1 稀釋用的舊結(jié)核菌素應(yīng)為經(jīng)檢定合格并未過(guò)效期者。
5.2 可用含有0.25%～0.5%(g/ml)苯酚或其他適宜防腐劑的生理鹽水或緩沖生理鹽水稀釋?zhuān)姑縨l含50單位。
5.3 稀釋舊結(jié)核菌素應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)。防腐劑試驗(yàn)：用體重18～20g之健康小白鼠2只，每只皮下注射稀釋舊結(jié)核菌素0.5ml。用苯酚作防腐劑量，小白鼠會(huì)出現(xiàn)戰(zhàn)粟癥狀，但不應(yīng)超過(guò)半小時(shí)，觀察7天，不得有局部膿腫或死亡。
5.4 稀釋舊結(jié)核菌素效期自檢定合格之日起為42天。保m.f1411.cn/Article/存于2～8℃暗處。
