（一)動(dòng)物選擇
遠(yuǎn)在300年前就有人觀察了冷血?jiǎng)游锏奈⒀h(huán)，如青蛙的舌、蹼、肺和腸系膜；金魚(yú)的尾巴；蝌蚪的尾巴；蜜蜂的眼睛……等等。在1831年Hall和1850年P(guān)aget等詳細(xì)地描述了蝙蝠翅膀的微循環(huán)，但是這些動(dòng)物都離人的抗體結(jié)構(gòu)和生理功能太遠(yuǎn)。蝙蝠雖然是所謂的哺乳動(dòng)物，但其生活習(xí)性卻與一般哺乳動(dòng)物大不相同，其機(jī)體反應(yīng)性也因其感覺(jué)器官之獨(dú)特而區(qū)別于人，美國(guó)有的實(shí)驗(yàn)室（Nicoll,1946;Mohos,1961;Wiedeman,1972)用蝙蝠觀察微循環(huán)時(shí)，事先需將蝙蝠養(yǎng)于溫度為5～10℃并且濕度極大的冰箱中。又因蝙蝠是夜醒動(dòng)物，其神經(jīng)系統(tǒng)白天處于抑制狀態(tài)，所以不適于進(jìn)行微循環(huán)各項(xiàng)生理參數(shù)的測(cè)定。更不宜于選它為靶子進(jìn)行微循環(huán)對(duì)各種藥物應(yīng)答反應(yīng)的研究。
國(guó)際、國(guó)內(nèi)通常用以進(jìn)行微循環(huán)研究的動(dòng)物有：小白鼠、大白鼠、金黃地鼠、家兔、貓、狗，最近也有用羊、小�；蚝镒拥�。
（二)研究微循環(huán)方法的選擇
研究微循環(huán)的方法很多，有間接法（如86Rb測(cè)心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量)和顯微直接觀察法之分。后者一般又分兩大類：一類是體表微循環(huán)實(shí)驗(yàn)方法，另一類是內(nèi)臟微循環(huán)實(shí)驗(yàn)方法。體表微循環(huán)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法有金黃地鼠頰囊循環(huán)，家兔眼球結(jié)膜和眼瞼微循環(huán)，家兔舌尖微循環(huán)，蝌蚪尾部微循環(huán)，還有兔耳、兔耳透明窗和大白鼠氣管微循環(huán)等。
內(nèi)臟微循環(huán)的實(shí)驗(yàn)研究方法也很多，有用動(dòng)物的腸系膜、心肌和肝臟等來(lái)觀察研究其微循環(huán)，其中觀察腸系膜的方法種類較多，可用大白鼠、家兔、豚鼠、小白鼠等的腸系膜。也有利用臟器“開(kāi)窗”手術(shù)作慢性實(shí)驗(yàn)，例如動(dòng)物行頭顱和腹腔開(kāi)窗術(shù)，觀察腦和腹腔有關(guān)內(nèi)臟的微循環(huán)。還有取用觀察部位的活組織電子顯微鏡觀察并作超微結(jié)構(gòu)攝影。
當(dāng)前物理化學(xué)的研究方法－－血液流變學(xué)也不斷被采用，例如紅細(xì)胞電泳、血粘度的測(cè)定，測(cè)定微血管的壓力，血小板和紅細(xì)胞凝集功能的測(cè)定，血小板粘附性的測(cè)定等方面的研究以及觀察毛細(xì)血管通透性的變化等。
近代先進(jìn)技術(shù)的不斷發(fā)展，無(wú)疑地也推動(dòng)著微循環(huán)實(shí)驗(yàn)方法的不斷更新和發(fā)展，運(yùn)用放射性同位素86Rb測(cè)定小鼠心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量，因心肌攝取86Rb的能力和心肌毛細(xì)血流量成正比。
近年來(lái)國(guó)外使用電視一電子系統(tǒng)、激光顯微系統(tǒng)、快速攝影、微循環(huán)電影和磁帶錄像等新技術(shù)研究微循環(huán)，這必將使微循環(huán)方法的科學(xué)性和客觀性大大地提高。
（一)動(dòng)物的麻醉
遠(yuǎn)在1944年曾有人在微循環(huán)的研究中發(fā)現(xiàn)：給小動(dòng)物進(jìn)行戊巴
■［此處缺少一些內(nèi)容］■
有些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不需麻醉，可在動(dòng)物清醒狀態(tài)下進(jìn)行，如兔眼球結(jié)膜微循環(huán)的檢查方法等。
（二)恒溫灌流
原則上，動(dòng)物器官或組織的灌流液應(yīng)是與該器官或組織周圍體液環(huán)境的成份和pH完全一樣，例如對(duì)腸系膜來(lái)說(shuō)應(yīng)有腹腔內(nèi)液的環(huán)境，但是很難做到的。
Zweifach認(rèn)為：無(wú)論應(yīng)用什么灌流液，首先應(yīng)使它成為膠體狀態(tài)，即在灌流液中加入明膠，使之成為1%的明膠溶液。
灌流液中應(yīng)該通過(guò)適量的氧和二氧化碳。灌流液的pH應(yīng)以緩沖液調(diào)至中性（pH為7.35)灌流液的溫度應(yīng)以控制器控制在動(dòng)物正常體溫范圍。灌流液在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)不停地慢速更換。常用的灌流液有林格氏液、臺(tái)氏液、凱氏液、生理鹽水等。灌流裝置和所觀察的動(dòng)物應(yīng)放在裝有可調(diào)節(jié)的恒溫實(shí)驗(yàn)觀察箱中進(jìn)行，此點(diǎn)在冬季顯得尤為重要。將實(shí)驗(yàn)觀察箱中的溫度調(diào)節(jié)到與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體表溫度相近的溫度，最好在25～30℃。
（三)照明裝置
照明裝置的溫度一般不能超過(guò)動(dòng)物體溫。最好保持在25～30℃，否則會(huì)引起血管擴(kuò)張及微血流異常。照射燈光最好不改變血液自然的色調(diào)，否則不易辨別血氧飽和程度。最理想的照明裝置是纖維光束冷光源，尤其在進(jìn)行肝、脾、腎等臟器的微循環(huán)觀察時(shí)，沒(méi)有可以伸進(jìn)腹腔去的冷光源照明棒是很難進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的。
實(shí)驗(yàn)時(shí)用的照明光源，應(yīng)該具備三個(gè)條件，即強(qiáng)、聚、“冷”。目前常用的有兩種照明裝置，一種是高壓水銀燈（220V，80W)，此光源的優(yōu)點(diǎn)是光線強(qiáng)，產(chǎn)熱較少，血管與底色間反差強(qiáng)，缺點(diǎn)是血色不真實(shí)，光源觸發(fā)啟動(dòng)慢。另一種是鎢鹵素?zé)簦?～12V，40～100W)，后者具有體積小巧，光線白亮，啟動(dòng)快的優(yōu)點(diǎn)。鎢鹵素?zé)艨捎蔑@微鏡燈加以改裝，因其有透鏡，能調(diào)節(jié)焦距，又能達(dá)到“聚光”的目的，再在此燈前加上藍(lán)綠色的隔熱濾光片，即可控制光源溫度，達(dá)到相對(duì)“冷光”的要求。此種照明光源能在普通室內(nèi)保證顯微鏡下視野清晰，而且對(duì)觀察指標(biāo)影響較小。
（四)記錄系統(tǒng)
動(dòng)物微循環(huán)的瞬間變化常采用顯微攝影裝置來(lái)記錄。選擇好顯微照相裝置及相應(yīng)的洗相設(shè)備。為了保證攝影的成功，凡是活體攝影，均需要使用拆射光源，要使用快片（24定以上的微粒膠卷)攝影，這是一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題，還要增強(qiáng)反差（用綠色濾光片增強(qiáng)血管與底色間的的反差)。
照相機(jī)是一般的記錄工具，它只能留下瞬間的圖象，有條件最好能拍攝電影或進(jìn)行彩色磁帶錄像。
對(duì)于管徑掃描的曲線、血流流態(tài)曲線或微壓力曲線要用示波器或多導(dǎo)記錄器進(jìn)行記錄，如能用微處理機(jī)記錄并貯存上述信號(hào)則更理想。
（一)管徑
用目鏡測(cè)微器測(cè)量微細(xì)動(dòng)脈與靜脈的管徑大小。如有攝影設(shè)備，在每次觀測(cè)中攝片，然后用量規(guī)在照片上量取管徑；或?qū)⑽⒀芊糯笕舾杀锻队坝谑窘唐辽�，再用量�?guī)在示教屏上量取管徑。示教屏上的長(zhǎng)度則事先通過(guò)物鏡測(cè)微順標(biāo)定好。
微血管的管徑還可采用較先進(jìn)的儀器來(lái)測(cè)量，如可用微電腦控制的多功能顯微圖像測(cè)量分析儀來(lái)測(cè)量。該分析儀能對(duì)實(shí)驗(yàn)時(shí)微觀結(jié)構(gòu)進(jìn)行一維（線徑、周長(zhǎng))及二維（面積、環(huán))的參數(shù)測(cè)量，測(cè)量精度分別為±1%、±1.5%，從而可對(duì)微觀察結(jié)構(gòu)變化前后作定量分析比較。并且可對(duì)運(yùn)動(dòng)目標(biāo)自動(dòng)測(cè)速，精度±2%。對(duì)被測(cè)量對(duì)象的線徑動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行測(cè)量和記錄，對(duì)微粒進(jìn)行計(jì)數(shù)�，F(xiàn)我國(guó)上海已有生產(chǎn)。
（二)流速
目前測(cè)定血流速度的方法有兩種。一種是秒表法－－用目鏡測(cè)微器和秒表測(cè)定，計(jì)算血細(xì)胞流徑口徑2～3個(gè)紅細(xì)胞的微血管1mm距離所需的時(shí)間，重復(fù)測(cè)定三次，取其平均值。若作動(dòng)態(tài)比較時(shí)應(yīng)選擇固定血管進(jìn)行觀察，此法僅在流速較慢時(shí)應(yīng)用。另一種是示波器光點(diǎn)掃描同步法。該方法的基本原理是將示波器上掃描的光點(diǎn)與鏡下見(jiàn)到的流動(dòng)的紅細(xì)胞，使之在皮層視覺(jué)感受區(qū)內(nèi)重疊，以致造成光點(diǎn)與紅細(xì)胞在同一視野中流動(dòng)畫(huà)面，調(diào)節(jié)示波器上的粗調(diào)和微調(diào)，使之示波器光點(diǎn)掃描速度與紅細(xì)胞流速同步，這時(shí)示波器上的讀數(shù)即可代表紅細(xì)胞的流速。有條件時(shí)可采用上述圖象分析儀測(cè)量。
（三)流態(tài)
描述血細(xì)胞流動(dòng)時(shí)的形態(tài)。正常時(shí)在口徑為1個(gè)紅細(xì)胞的微血管中，血細(xì)胞流態(tài)呈直線狀。當(dāng)靜脈注射高分子右旋糖酐引起微循環(huán)障礙后，血液流態(tài)和血液流速均有異常改變。血流狀態(tài)由正常的直線狀變?yōu)閿嗑�狀或虛線狀。在口徑為2～3個(gè)紅細(xì)胞的微血管中，正常時(shí)，流態(tài)可呈帶狀，給予高分子右旋糖酐后，變?yōu)榱�、絮狀，甚至出現(xiàn)流動(dòng)的微小血栓。此時(shí)血液速顯著減慢，甚至有的血管區(qū)內(nèi)出現(xiàn)來(lái)回?cái)[動(dòng)和暫�，F(xiàn)象。
（四)毛細(xì)胞管網(wǎng)交點(diǎn)計(jì)數(shù)
計(jì)數(shù)的方法是：取面積約為1mm2左右的四周由血管圍或邊界的固定血管區(qū)域，計(jì)算此血管區(qū)域中的毛細(xì)血管與邊界血管的交點(diǎn)數(shù)，未與邊界相交的毛細(xì)血管不計(jì)算在內(nèi)。
（五)血色
血色分鮮紅、暗紅和淡紅等。正常血色為鮮紅色。觀察造成微循環(huán)m.f1411.cn/hushi/障礙和給藥后血色的變化情況。
（一)頭部器官
動(dòng)物的眼球結(jié)膜、虹膜、眼底、鼻粘膜、口唇、牙齦、舌、鼓膜、耳殼等都可以普通顯微鏡在放大40倍到100倍的條件下進(jìn)行微循環(huán)觀察。這些部位的動(dòng)物觀察方法與人的相似。以家兔眼球結(jié)膜觀察方法為例：要選用白色家兔，因其球結(jié)膜色白，微血管精晰可見(jiàn)。不可采用灰色或黑色的家兔，因其球結(jié)膜色深，不易辨別其微血管。將2～2.5kg體重的白毛家兔的在清醒狀態(tài)下側(cè)臥位置于一特制的長(zhǎng)方形固定盒內(nèi)，使兩耳及其頭部露出，頭頸部和嘴用兔頭夾和鐵環(huán)加以固定，剪去左側(cè)眼瞼睫毛，以眼科開(kāi)瞼器將上下眼瞼撐開(kāi)，暴露出球結(jié)膜血管，然后用高壓水銀聚光燈，以45度斜照于球結(jié)膜上，雙目解剖顯微鏡放大40倍，可直接觀察到球結(jié)膜的微循環(huán)。
（二)氣管微循環(huán)觀察法
選用大白鼠或家兔麻醉后，剪去下頜及頸部的毛，消毒皮膚，固定四肢（仰臥)。沿頸正中線自下頜部甚胸骨上緣作垂直切口，剝離軟組織與肌肉，小心不要損傷血管，用兩把紋式止血鉗夾住兩胸鎖乳突肌中部輕輕拉開(kāi)。于甲狀軟骨環(huán)上輕輕剪斷一對(duì)胸骨甲狀肌及其附著的肌膜，將該肌肉放于遠(yuǎn)端，便可暴露自甲狀軟骨至第十軟骨環(huán)間區(qū)的氣管，輕輕于解剖鏡下（放大16倍)剔去氣管表面的結(jié)締組織，便可以將光射于放大60倍左右的氣管軟骨上以及軟骨環(huán)間區(qū)的粘膜上觀察微循環(huán)的動(dòng)態(tài)變化。觀察應(yīng)于恒溫裝置中進(jìn)行，并在氣管表面滴以恒溫灌流液。
正常大鼠或家兔氣管軟骨環(huán)間區(qū)的微血管較為豐富。細(xì)靜脈、細(xì)動(dòng)脈血流方向相反，毛細(xì)血管網(wǎng)穿插于細(xì)動(dòng)脈和細(xì)靜脈間，而在軟骨環(huán)表面上有極細(xì)的毛細(xì)管網(wǎng)。微血管內(nèi)血流均勻，流速較快，血管充盈度良好。連續(xù)觀察25～30分鐘不見(jiàn)有明顯改變。氣管炎模型的大鼠氣管微循環(huán)出現(xiàn)明顯變化，變化程度與氣管粘膜病變程度密相關(guān)。活血化瘀藥物注入后，可明顯改善大鼠氣管炎微循環(huán)障礙。
（三)肺微循環(huán)觀察方法
一般用家兔、貓、狗或其它大動(dòng)物進(jìn)行。動(dòng)物麻醉后呈右側(cè)臥位固定于動(dòng)物臺(tái)上，凈皮、去左胸部的毛，消毒皮膚。于第三、四肋間作弧形切口，剝離皮膚，沿胸骨邊緣輕輕剪斷胸大肌、胸小肌的附著處，將二肌肉剝向一邊。在三、四肋間沿肋骨邊緣用鈍頭眼科剪和眼科鑷輕輕剔去肋間肌。注意要特別小心，謹(jǐn)防損傷胸膜。只要在胸膜上造成針尖大小的孔，肺便可發(fā)生萎陷。因此，肋間肌要一束一束仔細(xì)地剔去。最后可暴露無(wú)遺1cm見(jiàn)方的窗，透過(guò)透明的胸膜于顯微鏡下觀察肺循環(huán)動(dòng)態(tài)。此即“胸膜開(kāi)窗”法。
開(kāi)窗部位最好在第三、四肋間或第五、六肋間靠中線的地方。此外較薄的肺葉以心包作襯底，易于觀察。由于觀察的是呼吸著的肺，所以觀察者要善于抓住動(dòng)物的呼吸規(guī)律，選其呼吸空間進(jìn)行觀察，也可進(jìn)行照明。
“胸膜開(kāi)窗”是觀察活體肺微循環(huán)的唯一可行的辦法，因?yàn)?a class="channel_keylink" href="/edu/200712/17765.shtml" target="_blank">肺臟一暴露于空氣下便萎縮。如能將染料注入法、同位素注入或熒光示蹤及肺血流量測(cè)定法與胸膜開(kāi)窗活體觀察法配合進(jìn)行，便可得到更理想的結(jié)果�！靶啬ら_(kāi)窗”觀察肺微循環(huán)是可以連續(xù)進(jìn)行的；第一次觀察完畢后，可用一圓形有機(jī)玻璃薄片敷于窗上，以縫線固定于周圍肌肉，將胸小肌、胸大肌恢復(fù)原位，縫合皮膚切口，加強(qiáng)護(hù)理。可于第2天、第3天、第4天連續(xù)重復(fù)上述步驟，進(jìn)行反復(fù)觀察。一般在第4、5天，胸膜上便生出一層結(jié)締組織，變?yōu)椴煌该�。此時(shí)如有必要可選其它肋間進(jìn)行再次開(kāi)窗，手術(shù)應(yīng)在消毒條件下進(jìn)行。
（四)背斜方肌微循環(huán)觀察法
大鼠背斜方肌很薄，表淺，易于照明，面積寬而長(zhǎng)，血管神經(jīng)可保持完整。制備方便而簡(jiǎn)單，10～15分鐘可完成全部制備。此外皮膚切口可絲毫不損傷周圍組織，而且不易造成出血。對(duì)動(dòng)物整個(gè)機(jī)體影響不太大，可進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間觀察，而且這個(gè)部位易于進(jìn)行顯微鏡下觀察。因此，背斜方肌對(duì)于研究血管活性物質(zhì)和機(jī)體對(duì)藥物的應(yīng)答反應(yīng)是非常方便和理想的。
背斜方肌又稱脊肩胛肌，是成對(duì)的肌肉，它縱伸于背部到腰部，它的肌纖維自第4胸椎至第3腰，并向兩邊伸展至肩胛線，它的神經(jīng)支配來(lái)自脊副神經(jīng)和第2、3頸部神經(jīng)。它的供血來(lái)自腋動(dòng)脈的肩胛下支和頸表淺動(dòng)脈有肌肉分支。它的靜脈注入前頸靜脈。
實(shí)驗(yàn)采用大白鼠或金黃地鼠，體重70～120g，高于120g體重的鼠其背斜方肌過(guò)大過(guò)厚，不利于照明。用30mg/100g劑量戊巴比妥鈉麻醉。將動(dòng)物背部去毛、消毒。自頸部至腰部沿脊柱中線作皮膚切口。剝離結(jié)締組織，用小虹膜剪將肌肉筋膜輕輕剝離，在肌肉側(cè)面作一小小切口并用小彎剪輕輕剝開(kāi)肌肉游離面（沿肩胛線)，將小剪伸向肌肉底部將其完全與底層肌肉剝離。如遇有一兩支小血管可以用4號(hào)將線結(jié)扎。這樣便可得到一個(gè)寬為1.5cm左右的游離肌肉瓣。觀察時(shí)使動(dòng)物側(cè)臥，將肌肉游離邊用細(xì)大頭針固定于特制灌流盒上（與金黃地鼠灌流盒類似)。用含有1％明膠的林格氏液灌流。用NaHCO3將pH調(diào)為7.35，灌流液保持35～37℃。
利用脊斜方肌制備可進(jìn)行低倍、高倍、水鏡、油鏡觀察�？梢赃M(jìn)行極漂亮的電影拍攝，可以清晰地分辯粘附于管壁的白血球�？梢赃M(jìn)行各種藥物作用的研究，尤其適于微電極插入或微傳感器插管進(jìn)行在體微血管壓力和微血流測(cè)定。
（五)頰囊微循環(huán)觀察法
實(shí)驗(yàn)選用敘利亞種金黃地鼠，雄性，體重90～120g，在動(dòng)物口腔兩側(cè)后角各有一頰囊供貯存食物之用。頰囊組織與皮膚組織相似。是由纖維結(jié)締組織、鱗狀上皮、骨骼肌、疏松結(jié)締組織四層構(gòu)成。頰囊的伸縮性很大，其容量可由1～2ml擴(kuò)張到5～6ml。頰囊血供豐富，有致密的微血管網(wǎng)，是各種口徑的微血管高度集中之地。頰囊組織薄而嫩，顏色淡，透光性好，微血管清晰，制備簡(jiǎn)單，既可作急性實(shí)驗(yàn)，也可作慢性連續(xù)觀察實(shí)驗(yàn)，而且由于它是雙側(cè)對(duì)稱器官，有些實(shí)驗(yàn)過(guò)程可在同一動(dòng)物身上進(jìn)行自身照射。
1．頰囊的簡(jiǎn)單制備 實(shí)驗(yàn)時(shí)，動(dòng)物腹腔注以2.5%戊巴比妥鈉30mg/kg體重進(jìn)行麻醉。然后將口腔打開(kāi)，沿一側(cè)頰邊輕輕伸進(jìn)中號(hào)鈍頭鑷子，伸到肩部時(shí)夾住頰囊盲端，從口中取出內(nèi)面翻于外的盲囊，以滴管用37℃左右的生理鹽水沖凈其上的食物殘?jiān)�，將頰囊展平，用彎形大頭針固定于以透明有機(jī)玻璃制作的頰囊灌流盒上。啟動(dòng)恒溫灌流系統(tǒng)并將灌流盒置于顯微鏡下，即可以透射光觀察頰囊上微血管各項(xiàng)指標(biāo)（放大100倍以下)。如觀察需放在100倍以上進(jìn)行，則需制備單層頰囊。此時(shí)頰囊上選擇一個(gè)毛細(xì)血管網(wǎng)最少的區(qū)域，剪一個(gè)小切口。如需大面積觀察則可沿頰囊動(dòng)脈平行部分作縱長(zhǎng)切品，在切口邊緣部尚可作小小橫切（垂直向兩邊)。其后用小虹膜剪在解剖鏡下將疏松結(jié)締組織移去。經(jīng)過(guò)這樣制備的頰囊，在顯微鏡下成象更加清晰。
2．頰囊的恒溫灌流 頰囊灌流盒底板形態(tài)如圖10-11所示，是一個(gè)24×18cm2的透明有機(jī)玻璃板，板上固定以直徑為6cm、高為0.8cm的圓槽，槽中套以直徑為4cm、高為0.4cm的開(kāi)口雙層環(huán)槽。環(huán)槽中灌以彈性透明硅橡膠，由圓槽一邊底部輸入恒溫灌流液，另一端輸出灌流液。灌流液的pH應(yīng)調(diào)為中性（pH=7.35)并通過(guò)氧氣。灌流液的溫度以控溫儀或以恒溫水浴控制在37℃。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，恒溫灌流液以慢速徐徐通過(guò)頰囊表面及底面。
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圖10-11 金黃 地鼠頰市灌流裝置
3．頰囊小室制備法
頰囊小室由底板和頂板組成，兩板面積相同（直徑為2～2.5cm)。頂板邊緣有凹槽，中央有圓窗，圓窗粘以極薄的透明有機(jī)玻璃或云母片。底板由較薄的透明有機(jī)玻璃作成。兩板在相應(yīng)部位各有兩個(gè)小孔。底板兩孔處固定兩個(gè)有機(jī)玻璃的小楔子，可穿進(jìn)頂板上的兩孔。
動(dòng)物麻醉后，刮去一側(cè)頰部、頸部及肩部的毛。先將頰囊從口內(nèi)取出，以生理鹽水沖洗凈并放回。之后將小室底板用鑷子輕輕塞入左側(cè)頰囊，盡可能送到頰囊盲端。使動(dòng)物右側(cè)臥、固定。消毒皮膚，透過(guò)皮膚可觸到入在頰囊中的底板的兩楔，用消毒手術(shù)器械在兩楔間皮膚作一小切口，并小心擴(kuò)展切口到底板直徑長(zhǎng)。剝離結(jié)締組織，使覆蓋有頰囊膜的底板完全暴露于解剖鏡下，用虹膜剪將膜上疏松結(jié)締組織清除。注射不能損傷血管。為防止組織過(guò)干或發(fā)生血瘀，上述步驟要盡速進(jìn)行。
上述步驟完畢后，于底板頰囊上滴以生理鹽水，將1mm2的腫瘤組織塊輕輕入于頰囊膜中央，迅速將頂板的兩孔穿進(jìn)底板兩楔、蓋緊（防止氣泡進(jìn)入)，然后于每一楔孔滴以有機(jī)粘合劑，此時(shí)，于兩板間形成一個(gè)小室，在此小室中腫瘤組織可生長(zhǎng)。將皮膚切口邊緣先以普通縫線穿一圈，再緊緊扎入頂板側(cè)槽。于小室周圍敷以胺黃粉。小室制備即完成。為防止感染，給動(dòng)物每日肌內(nèi)注射2500單位的多粘菌素B，3～4天。
利用頰囊小室法可進(jìn)行多種惡性腫瘤移植的研究，如乳腺癌、黑色素瘤、血管周期細(xì)胞瘤、神經(jīng)鞘瘤等，并可于瘤組織植入后任何時(shí)間透過(guò)小室以顯微鏡觀察瘤組織周圍血管再生及發(fā)育情況和特點(diǎn)。
（六)縫匠肌微循環(huán)觀察法
實(shí)驗(yàn)選用貓。貓的縫匠肌是一種可以用于進(jìn)行離體實(shí)驗(yàn)或在體透明實(shí)驗(yàn)的最好的肌肉�？梢杂靡赃M(jìn)行正常微血流、微血壓、充血、出血以及胃骼肌微血流調(diào)節(jié)的研究。
縫匠肌是大腿內(nèi)側(cè)表淺肌肉，它起于髂前上棘，終于脛骨近端和髕骨。其內(nèi)緣之下正是股動(dòng)脈和股靜脈，有9cm長(zhǎng)，4cm寬，由它可取得平均5g重的離體肌肉。
縫匠肌的供血由側(cè)旋股動(dòng)脈及股動(dòng)脈分支而來(lái)，其遠(yuǎn)端尚有下行膝動(dòng)脈供血。
實(shí)驗(yàn)時(shí)，動(dòng)物以75mg/kg體重劑量的α-氯醛醣靜脈注射麻醉。動(dòng)物側(cè)臥位固定，將其一腿（下部的)伸展。凈皮，去毛并消毒，沿大隱靜脈走向自腹股溝下1cm處至膝內(nèi)側(cè)作皮膚切口，輕輕剝離皮膚。其后，于大腿內(nèi)緣與該切口相平行作另一切口。盡可能將皮膚剝離以暴露更大面積的肌內(nèi)。露暴軟組織以恒溫灌流液浸透的紗布濕敷。在將縫匠肌中間部位的筋膜、結(jié)締組織剝離完全后，便可以用冷光束照明裝置伸于縫匠肌正中底部，并于顯微鏡下觀察該肌肉上的微血流和進(jìn)行各種測(cè)定。
如要取得離體縫匠肌，需在上述步驟之后先將縫匠肌周圍小血管一一結(jié)扎，只留下由大隱靜脈和股動(dòng)脈、股靜脈而來(lái)的主要分支。此后，進(jìn)行股動(dòng)脈分支與股靜脈分支插管（一支輸入，一支輸出)待插管圓滿完成后將其它所有血管結(jié)扎（包括大隱靜脈來(lái)的所有血管)。然后將肌肉兩端以特制的小夾子夾住。從夾子外緣剪下，離體的肌肉掛在一個(gè)鋁制支架上置于恒溫，恒溫裝置可于顯微鏡下進(jìn)行各種灌流實(shí)驗(yàn)。一塊6g重的肌肉，其血液灌流量通常0.2～0.3ml/分。好的肌肉制備可連續(xù)維持6小時(shí)以上的實(shí)驗(yàn)。
（七)腸系膜、大網(wǎng)膜、腸壁微循環(huán)觀察法
遠(yuǎn)在200年前就有人將腸系統(tǒng)、大網(wǎng)膜的微循環(huán)進(jìn)行了顯微鏡觀察。因?yàn)樗钜兹〕�，并且血管清晰。小鼠、大鼠、豚鼠、田鼠、家兔、貓、狗等�?dòng)物的腸系膜和大網(wǎng)膜及腸壁皆可用于微循環(huán)觀察，并且無(wú)明顯差別，所用動(dòng)物不宜過(guò)老，否則脂肪過(guò)多影響觀察。Zweifach認(rèn)為：回盲部腸系膜是最好的微循環(huán)觀察區(qū)。因?yàn)樗哂袇^(qū)域小而局限、沒(méi)有腸蠕動(dòng)、取出時(shí)不易損傷、脂肪組織少等優(yōu)點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)時(shí)，動(dòng)物麻醉同前。消毒腹部一側(cè)皮膚，剪一個(gè)1～2寸的切口。動(dòng)物側(cè)臥于灌流盒邊。取出欲觀察的腸系膜或大網(wǎng)膜部位，輕輕伸展于透明有機(jī)玻璃制成的灌流盒上進(jìn)行恒溫灌流；灌流時(shí)流與滴相結(jié)合，灌流液用磷酸緩沖液調(diào)至pH7.2～7.35。灌流液中亦可加入白蛋白，使其成為1%白蛋白液。灌流液原瓶中通以O(shè)2和5%CO2。
在進(jìn)行腸系膜微循環(huán)觀察時(shí)，要特別注意維持動(dòng)物體溫恒定。因?yàn)檫^(guò)冷或過(guò)熱都要引起不正常的腸蠕動(dòng)，影響實(shí)驗(yàn)效果。為此，必須監(jiān)測(cè)動(dòng)物肛溫或口溫。連續(xù)記錄體溫曲線。動(dòng)物最好躺在電熱墊上并蓋以小被維持恒定的正常體溫。一般說(shuō)來(lái)，一切條件保持得好，可連續(xù)進(jìn)行兩小時(shí)以上的正常實(shí)驗(yàn)，也可能5～6小時(shí)都保持平衡，應(yīng)該停止實(shí)驗(yàn)的早期信號(hào)是：腸系膜上收集靜脈中出現(xiàn)白細(xì)胞附壁粘著現(xiàn)象；其后是紅血球滲出。因之，如不維持嚴(yán)格的恒溫灌流和保持恒定的體溫，所進(jìn)行腸系膜的微循環(huán)動(dòng)態(tài)記錄肯定是不客觀的。
家兔腸系膜微循環(huán)觀察時(shí)，以烏拉坦或戊巴妥納靜脈注射麻醉后，背住縛于兔板上（有加溫裝置)，剪去腹部之毛，沿腹中線作一長(zhǎng)6～8cm的切口進(jìn)入腹腔。將上腹腔臟器推向右側(cè)，于腹腔左上方找到回盲交界處（回腸為淺紅色，結(jié)腸為灰色)在該部位上的上段輕輕拉回腸袢約10cm，將該段腸管及系膜通過(guò)有機(jī)玻璃流盒的后側(cè)壁凹槽和褲形裝（見(jiàn)圖10-12)，然后浸入充滿38℃灌流液的小盒中，并輕輕把腸系膜平鋪在灌流盒的中央圓合上，用大頭針將腸系膜固定于中央圓臺(tái)內(nèi)側(cè)邊的軟木片上。將腹壁、漿膜層和肌層縫合，并把切口右緣皮膚縫合固定于灌流盒側(cè)壁的鎖眼處。
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圖10-12 檢查家兔腸系膜微循環(huán)灌流盒
灌流盒右側(cè)壁有一進(jìn)水管與盛滿任一臺(tái)氏營(yíng)養(yǎng)液的恒溫壓灌流瓶相連接，使?fàn)I養(yǎng)液不斷地流經(jīng)小盒而自左側(cè)壁的出水管口流出。以80W高壓水銀燈的光束投照平鋪在中央圓臺(tái)上的腹系膜上，雙目顯微鏡放大40～80倍，可進(jìn)行腸系膜血管口徑、血流速度和血流狀態(tài)觀察。為了防止造成腸系膜的局部血流障礙和游斑性出血，要避免過(guò)分牽拉或摩擦腸系膜，要不斷向腸系膜上滴加溫?zé)岬纳睇}水，避免干燥刺激。
（八)提睪丸微循環(huán)觀察法
實(shí)驗(yàn)采用雄性大白鼠，體重80～110g，小于80g的大鼠提睪肌太小不利于制備，大于110g的大鼠太老，結(jié)締組織增生，不利于觀察。以25mg/kg體重劑量的戊巴比妥納麻醉大鼠，或以130mg/100體重劑重的烏拉坦肌注（經(jīng)常注入股田頭肌)。將手術(shù)區(qū)域剃毛、洗凈、消毒，最好進(jìn)行氣管切開(kāi)，插管以保證呼吸順利。進(jìn)行股動(dòng)脈插管測(cè)動(dòng)脈壓或準(zhǔn)備靜注藥物。手術(shù)器械進(jìn)行消毒。手術(shù)時(shí)，先用針在手術(shù)側(cè)陰囊遠(yuǎn)端穿以縫線，將縫線固定在動(dòng)物固定板的小釘上。然后在陰囊上作縱切口，切開(kāi)皮膚、筋膜，輕輕剝離。將切口慢慢延長(zhǎng)到離腹溝5～8mm處。用膠體林格氏液（pH7.35)開(kāi)始輕輕灌流，于剝離的軟組織上敷一層灌脫脂棉絮，棉絮浸以灌流液。將皮膚切口之每邊穿兩根絲線固定于動(dòng)物板上。如圖10-12所示，繼續(xù)游離提睪肌，使之脫腦周圍組織。將提睪肌輕輕作縱向切開(kāi)并將其輕輕與睪丸剝離。用兩個(gè)外科結(jié)扎連接睪丸和提睪肌的小血管，從兩結(jié)中間剪斷。如圖10-13所示沿副睪縱柚將附睪系膜剪開(kāi)。將睪丸和附睪經(jīng)腹股溝環(huán)輕輕送入腹腔。提睪肌周圍等距穿進(jìn)5～6根絲線。動(dòng)物仰臥，將提睪肌展鋪于特制的馬蹄形透明有機(jī)玻璃柱上，柱周圍有等距的5～6個(gè)小缽，可將絲線結(jié)于釘上固定提睪肌。透明柱可調(diào)高低，其周圍為恒溫灌流盒（與金黃地鼠頰囊灌流裝置相似)。
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圖10-13 分離提睪肌方法
提睪肌極薄，其上有各種口徑的微血管，成像清晰，適于進(jìn)行各種微循環(huán)參數(shù)測(cè)定，尤其獨(dú)特的是提睪肌上最微細(xì)的毛細(xì)血管網(wǎng)也特別清楚，適于進(jìn)行管腔、管壁動(dòng)態(tài)變化和微血管與組織間物質(zhì)交換的研究。也可用染料或熒光示蹤劑進(jìn)行淋巴微循環(huán)的研究。
（一)高分子右旋糖酐（HMWD)法
選擇2～3公斤的健康家兔，雌雄不限。復(fù)制模型當(dāng)天禁食、禁水。實(shí)驗(yàn)前觀察眼球結(jié)膜微循環(huán)，采用微血管光滑、血流正常的動(dòng)物，于清醒狀態(tài)下復(fù)制模型。HMWD是一種多聚化合物，它能在紅細(xì)胞間形成較多的穩(wěn)定的間橋，表面橋力大于原來(lái)的電荷排斥力，從而造成紅細(xì)胞聚集；加之其本身又是一種高粘度物質(zhì)，還可增加血粘度。將平均分子量為20～40萬(wàn)的HMWD配成10%生理鹽水溶液，以7～15ml/kg體重的劑量給家兔作耳緣靜脈快速推注，如在用藥同時(shí)作動(dòng)物球結(jié)膜微循環(huán)活體觀察，則可見(jiàn)到球結(jié)膜微循環(huán)中出現(xiàn)逐漸加強(qiáng)的血流緩慢，血細(xì)胞聚集，最后出現(xiàn)流動(dòng)中的血細(xì)胞團(tuán)塊。用藥前家兔眼球結(jié)微膜血管中的微動(dòng)脈和毛細(xì)血管呈樹(shù)枝狀分布，微靜脈常與微動(dòng)脈平行，血管由粗到細(xì)，光滑均交，微血流呈帶狀或線狀，偶可見(jiàn)到流動(dòng)很快的粒線狀血流，但不會(huì)有血細(xì)胞聚集的顆粒狀血流出現(xiàn)。微動(dòng)脈因血流較快呈線帶狀，常常不易看清其中的血細(xì)胞流動(dòng)；毛細(xì)血管，特別是近瞳孔處的毛細(xì)血管網(wǎng)的血流常呈粒線狀流動(dòng)。正常時(shí)微血管周圍無(wú)出血及滲出，因此微血管背景較白（鞏膜)，視野清晰。用藥后，眼球結(jié)膜微循環(huán)中可見(jiàn)下列典型的急性微循環(huán)障礙表現(xiàn)：①毛細(xì)胞血管和微靜脈中紅細(xì)胞流速明顯減慢，因此血流呈斷線狀、虛線狀或粒狀，局部區(qū)域甚至完全停滯；②微血管中出現(xiàn)明顯的血細(xì)胞聚集，嚴(yán)重時(shí)見(jiàn)流動(dòng)中的血細(xì)胞團(tuán)塊；③有時(shí)尚可見(jiàn)到微血管發(fā)生輕度痙攣，微血管周圍有滲出和出血以及微靜脈中有血細(xì)胞貼壁翻滾的現(xiàn)象。用藥后24小時(shí)內(nèi)，上述急性微循環(huán)障礙表現(xiàn)最嚴(yán)重，少數(shù)動(dòng)物可因急性栓塞而突然死亡，也有少數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)偏癱癥狀。存活者，如經(jīng)仔細(xì)護(hù)理，則72小時(shí)后HMWD破壞、排泄，微循環(huán)障礙逐漸好轉(zhuǎn)。經(jīng)測(cè)定，在此種急性微循環(huán)障礙模型中，動(dòng)物血粘度明顯升高，紅細(xì)胞電泳變慢，血沉加速。
這種急性微循環(huán)障礙動(dòng)物模型的復(fù)制方法簡(jiǎn)便，出現(xiàn)快，成功率高（95%以上)，適于探索與急性微循環(huán)障礙有關(guān)的各種疾病的發(fā)病機(jī)制及藥物作用原理的研究。
（二)胎兒羊水靜脈注射法
給家兔以1～4ml/kg體重的劑量靜脈注射新鮮的胎兒羊水，可復(fù)制成急性微循環(huán)障礙動(dòng)物模型。對(duì)注射動(dòng)物進(jìn)行活體微循環(huán)觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)，注射完畢時(shí)，即有血細(xì)胞流動(dòng)速度減慢，毛細(xì)血管中可常見(jiàn)到微血流的間歇性流動(dòng)，呈紅白交替現(xiàn)象，在微靜脈或較大的毛細(xì)血管中還�？梢�(jiàn)到隨血流流動(dòng)的透明細(xì)胞（可能為羊水細(xì)胞)，20分鐘后，微血流明顯淤滯，局部出現(xiàn)凝血，微循環(huán)和較大的毛細(xì)血管中出現(xiàn)體積逐漸加大的白色團(tuán)塊，這可能是流動(dòng)中的白色血栓（以羊水細(xì)胞為核心構(gòu)成血栓)。注后1小時(shí)左右，大部分微血管停止流動(dòng)，僅有部分微血管中可見(jiàn)血流緩慢移動(dòng)，而且�？沙霈F(xiàn)栓塞所致的突然死亡。這種急性微循環(huán)障礙動(dòng)物模型的復(fù)制成功率，常隨羊m.f1411.cn/wszg/水的質(zhì)量而異。
（三)兔腦粉浸出液靜脈注射法
取新鮮兔腦粉100mg，加生理鹽水5ml，50℃溫箱孵育20分鐘，取上清液備用。給家兔耳緣靜脈推注上述溶液，劑量為1～4ml/kg體重，同時(shí)可給1/4m CaCL24ml，必要時(shí)還可添加少量乳酸靜脈注射。
球結(jié)膜微循環(huán)觀察所見(jiàn)與HMWD復(fù)制的模型類似。此法最大的缺點(diǎn)是劑量不易控制，每個(gè)動(dòng)物對(duì)兔腦粉浸出液（代替凝血酶)的敏感程度不一，用量太小，急性微循環(huán)障礙表現(xiàn)不顯；劑量稍大，動(dòng)物可發(fā)生突然死亡，必須十分注意。
