血漿脂蛋白和脂質(zhì)測(cè)定是臨床生化檢驗(yàn)的常規(guī)測(cè)定項(xiàng)目，其臨床意義主要是：早期發(fā)現(xiàn)與診斷高脂蛋白血癥；協(xié)助診斷動(dòng)脈粥樣硬化癥；評(píng)價(jià)動(dòng)脈粥樣硬化疾患如冠心病和腦梗塞等危險(xiǎn)度；監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)飲食與藥物治療效果。
⒈超速離心分離純化法超速離心法是根據(jù)血漿中各種脂蛋白的比重（密度)的差異，在強(qiáng)大離心力作用下進(jìn)行分離純化的一種方法。
血漿在不同密度鹽溶液中經(jīng)過(guò)超速離心，各種脂蛋白可按密度大小漂浮于不同鹽溶液介質(zhì)中。脂蛋白漂浮的衡量單位是漂浮率(Sf)。Gofman等于1950年確定，血漿脂蛋白在比重為1.063的NaCl溶液中（26℃)，每秒每達(dá)因（ldyn=10-5N)克離心力的作用下的漂浮速度，稱為1個(gè)Svedbery單位（10-13s)。Sf越大，脂蛋白密度越低。
一般操作方法是將血漿置于已準(zhǔn)備好的不同密度梯度的鹽溶媒介質(zhì)中，在強(qiáng)大離心作用下，各脂蛋白依其自身的Sf不同，分散于離心管中的密度梯度溶媒層，達(dá)到分離純化的目的。
超速離心法是分離純化脂蛋白的有效技術(shù)，目前廣泛應(yīng)用于脂蛋白、載脂蛋白代謝的研究中。
⒉電泳分離法不同脂蛋白因蛋白質(zhì)含量不同、其電荷量不同，故可用電泳方法進(jìn)行分離，并根據(jù)血漿脂蛋白電泳遷移率不同予以判斷確認(rèn)。電泳支持物一般常用醋酸纖維薄膜、瓊脂糖凝膠或聚丙酰胺凝膠。由于醋酸纖維薄膜要預(yù)處理，很繁雜，外加電泳時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，目前已很少使用。臨床檢驗(yàn)中主要采用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，快而較為準(zhǔn)確，儀器設(shè)備要求不高，被廣泛采用。聚丙烯酰胺凝膠作為支持物分離脂蛋白，值得推薦給臨床使用。
電泳分離法不論用何種支持物，血漿脂蛋白需用親脂染料如蘇丹黑B等進(jìn)行預(yù)染再電泳，電泳完畢，脂蛋白根據(jù)電荷量不同，移動(dòng)在不同的位置，再置于光密度計(jì)內(nèi)進(jìn)行掃描，計(jì)算出各種脂蛋白的百分比，該數(shù)值乘以血漿總脂量，即可求出α-脂蛋白、β-脂蛋白和前β-脂蛋白含量，乳糜微粒停留在原點(diǎn)，無(wú)法測(cè)出其含量，正常空腹12h后，血漿中無(wú)CM存在。也可將電泳畢的瓊脂糖凝膠脂蛋白區(qū)帶切割置于試管中，加水溶解，進(jìn)行比色，測(cè)出各自百分比，這一手工半定量法無(wú)法測(cè)準(zhǔn)，屬淘汰之列。
⒊沉淀分離法由于脂蛋白的組成及理化性質(zhì)不同，在不同的聚陰離子和2價(jià)不同金屬離子（Mn2+、Mg2+、Ca2+、Ni2+、Co2+)以及不同pH值條件下，使脂蛋白與聚陰離子結(jié)合形成復(fù)合物沉淀，以達(dá)到分離定量各種脂蛋白的目的。
如肝素錳沉淀血清中VLDL和LDL，離心沉淀，HDL則留在上清液，再定量HDL量，即為血漿HDL的量。也可采用聚乙烯硫酸鹽沉淀LDL，離心去上清液留沉淀，再定量沉淀其中的LDL，即血漿的LDL量。脂蛋白是一種既有蛋白質(zhì)又有膽固醇，還有磷脂的復(fù)合體，如何定量，尚無(wú)一種較為理想的方法。目前僅以測(cè)定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據(jù)，即測(cè)定HDL、LDL或VLDL中的膽固醇，并分別稱為高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C)、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C)或極低密度脂蛋白-膽固醇（VLDL-C)。這類測(cè)定方法是目前臨床廣泛使用的方法，快速并較為準(zhǔn)確。
⒋遮蔽直接測(cè)定法利用脂蛋白中某種特異抗體等物質(zhì)，先將血漿中LDL和VLDL包裹保護(hù)，不受測(cè)定膽固醇試劑的影響，而直接測(cè)定未被包裹的HDL中的膽固醇，在不離心分離條件下，測(cè)定出HDL的膽固醇含量，快速準(zhǔn)確，是近年來(lái)發(fā)展的新技術(shù)，值得推廣應(yīng)用。
血清總脂質(zhì)主要包括FC、CE、PL和TG等。血清總膽質(zhì)測(cè)定除作為脂質(zhì)代謝紊亂及有關(guān)疾患的協(xié)助診斷外，還可用于血總脂增加的原發(fā)性膽汁酸肝硬化、腎病綜合征或急慢性肝炎以及血總脂減少的重癥肝炎、肝硬化等的嚴(yán)重肝實(shí)質(zhì)性損害、惡液質(zhì)、甲狀腺功能亢進(jìn)和吸收不良綜合征等疾患的協(xié)助診斷。
血總脂一般隨年齡增加而升高，40歲以上者顯著增加，65-70歲者反而降低。測(cè)定方法不同，正常參考值有一定的差異。
測(cè)定方法分兩大類：一類是抽提法，將血清脂質(zhì)通過(guò)脂質(zhì)抽提劑提入某一介質(zhì)中，再進(jìn)行定量；另一類是直接測(cè)定法，即無(wú)需抽提。
⒈脂質(zhì)抽提法脂質(zhì)存在于血清脂蛋白中，利用甲醇或乙醇使其與蛋白結(jié)合的脂質(zhì)分離，再利用甲醇或乙醇的非極性有機(jī)溶媒使脂質(zhì)溶于其中。Bloor溶劑（醚：醇為1：3，V/V)或FovCh溶劑（氯仿：甲醇為2：1，v/V)的醚氯仿等非極性溶劑的混合液，可提高切斷脂質(zhì)與蛋白質(zhì)的結(jié)合的能力，達(dá)到抽提的目的。血清脂質(zhì)抽提入有機(jī)溶液后，蒸發(fā)干固，除去有機(jī)溶液，通過(guò)加熱氧化，再顯色定量。
⒉脂質(zhì)直接測(cè)定法如Sulfo-phospho-Vanillin法是加濃硫酸入血清加熱，冷卻后，加試劑顯色（即SPV反應(yīng))直接測(cè)定出血清總脂質(zhì)。
血清中膽固醇包括CE和FC，酯型的CE占70％，游離型FC占30％。FC中的C3的-OH在LACT作用下，可分別與亞油酸（43％)、油酸（24％)、軟脂酸（10％)、亞麻油酸（6％)、花生四烯酸（6５)、硬脂酸（3％)等脂肪酸結(jié)合而成。血清中膽固醇在LDL中最多，其次是HDL和VLDL，CM最少。血清總膽固醇測(cè)定方法分為化學(xué)法和酶法兩大類。
⒈化學(xué)法化學(xué)法一般包括：①抽提；②皂化；③毛地黃皂苷沉淀純化；④顯色比色四個(gè)階段。代表性的方法有Sperry-Webb法，包括①到④步驟操作過(guò)程，常規(guī)操作中多省去了②、③�；蛘哂檬∪ア凇ⅱ鄄襟E的Zak-Henly法及省去③步驟的Abell-Kendall法，現(xiàn)將此法作為標(biāo)準(zhǔn)參考方法予以利用。
⒉酶法測(cè)定CE在膽固醇酯酶（cholesterolesterase,CHE)作用下水解成FC和FFA，F(xiàn)C再經(jīng)膽固醇氧化酶（cholesteroloxidase，COD)氧化成△4膽甾烯酮和H2O2，再分別定量O2的消耗或者H2O2的生成量，或者△4膽甾烯酮生成量，以作為FC的定量依據(jù)。該法是目前常規(guī)應(yīng)用方法，快速準(zhǔn)確，標(biāo)本用量少，便于自動(dòng)生化分析器作批量測(cè)定。
甘油三酯又稱中性脂肪，由于其甘油骨架上分別結(jié)合了3分子脂肪酸、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸，所以分別存在有甘油三酯（TG)、甘油二酯（DG)和甘油一酯（MG)。血清中90％～95％是TG，TG中結(jié)合的脂肪酸分別為油酸（44％)、軟脂酸（26％)，亞油酸（16％)和棕櫚油酸（7％)。
血清TG測(cè)定方法一般分為物理化學(xué)法、化學(xué)法及酶法三大類。
血清中TG的化學(xué)組成并不單一，準(zhǔn)確求其分子量較為困難。因標(biāo)準(zhǔn)不同，測(cè)定結(jié)果存在差異。化學(xué)法多采用三棕櫚精（軟脂精)（分子量807.3)、三油精（分子量895.4)，按摩爾濃度計(jì)算。酶法測(cè)定以三油精為標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行換算。
⒈化學(xué)法化學(xué)測(cè)定法包括：①TG的抽提分離；②皂化；③甘油糖的氧化；④氧化生成甲撐顯色定量等四個(gè)階段。操作較為繁雜，影響測(cè)定因素太多，共法準(zhǔn)確性差，一般很少用。
⒉酶法測(cè)定酶法測(cè)定包括：①TG的抽提與皂化；②加水分解生成甘油糖定量?jī)蓚�(gè)階段。目前常規(guī)檢測(cè)應(yīng)用的方法有甘油激酶（glycerolkinase，GK)法和甘油氧化酶（glyceroloxidase,glyod,GOD)法。操作簡(jiǎn)便，快速準(zhǔn)確，并能在自動(dòng)化生化分析儀上進(jìn)行批量測(cè)定。
磷脂（PL)并非單一的化合物，而是含有磷酸基和多種脂質(zhì)的一類物質(zhì)的總稱。
血清中PL包括：①卵磷脂（60％)和溶血卵磷脂（2％-10％)；②磷脂酰乙醇胺等（2％)；③鞘磷脂（20％)。
血清PL定量方法包括測(cè)定無(wú)機(jī)磷化學(xué)法和酶法兩大類。
⒈化學(xué)測(cè)定法包括①抽提分離；②灰化；③顯色、比色三個(gè)階段。
⒉酶測(cè)定法可分別利用磷脂酶A、B、C、D等4種酶作用，加水分解，測(cè)定其產(chǎn)物，對(duì)PL進(jìn)行定量，一般多采用磷脂酶D(PL-D)。PL-D可作用于含有卵磷脂、溶血卵磷脂和鞘磷脂以及膽堿的磷脂，這三種磷脂約占血清總磷脂的95％。該法快速準(zhǔn)確，便于自動(dòng)化儀器進(jìn)行批量檢測(cè)。
臨床上將C10以上的脂肪酸稱為游離脂肪酸（FFA)。正常血清中含有油酸（C18:１)占54％，軟脂酸（C16:1)占34％，硬脂酸（C18:1)占6％，是其主要的FFA。另外還有月桂酸（C12:0)、肉豆蔻酸（C14:0)和花生四烯酸（C20:1)等含量很少的脂肪酸。與其他脂質(zhì)比較，F(xiàn)FA在血中濃度很低，其含量水平極易受脂代謝、糖代謝和內(nèi)分泌功能等因素影響，血中FFA半壽期為1-2min，極短。血清中的FFA是與清蛋白結(jié)合進(jìn)行運(yùn)輸，屬于一種極簡(jiǎn)單的脂蛋白。
測(cè)定血清FFA法有滴定法、比色法、原子分光光度法、高效液相層極法和酶法等。一般多以酶法測(cè)定。作FFA測(cè)定的標(biāo)本一定要注意在4℃條件下分離血清并進(jìn)行測(cè)定。因?yàn)檠杏懈鞣N脂肪酶存在，極易也極快速使血中TG和PL的酯型脂肪酸分解成非酯化的FFA，使血中FFA值上升。貯存的標(biāo)本僅限于24h內(nèi)，若保存三天，其值約升高30％，使結(jié)果不準(zhǔn)確。
⒈非酶法確定非酶法測(cè)定包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高效液相層析法。前三種方法準(zhǔn)確性差，高效液相層析法儀器太昂貴，不便于批量操作。
⒉酶測(cè)定法血清中主要用脂肪酶測(cè)定�？煞謩e測(cè)定產(chǎn)物乙酰CoA、AMP或輔酶A(CoA)，進(jìn)行定量。酶法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠快速，易于批量檢測(cè)。
血清載脂蛋白（Apo)包括ApoAⅠ、AⅡ、B100、CⅡ、CⅢ、E和（a)，已屬常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。血清中載脂蛋白均結(jié)合于脂蛋白中，測(cè)定時(shí)要加用解鏈劑，使脂蛋白中Apo暴露再進(jìn)行測(cè)定。
目前測(cè)定血清中Apo的含量的方法是利用相應(yīng)特異抗體試劑進(jìn)行測(cè)定�，F(xiàn)有羊抗人ApoAⅠ、AⅡ、B100、CⅡ、CⅢ、E和(a)等抗體試劑。測(cè)定原理是將某一特異抗體加到待測(cè)人血清中，即與血清中相應(yīng)抗原形成抗原抗體復(fù)合物，根據(jù)復(fù)合物的量，即可測(cè)出血清中某一Apo含量。例如在人血清中加入抗人ApoAⅠ抗體，即與血清中ApoAⅠ（抗原)結(jié)合形成復(fù)合物，再定量即可測(cè)出血清中ApoAⅠ含量。
⒈免疫擴(kuò)散法先制備含Apo抗體的瓊脂糖凝膠，間隔等距離打孔，加入待測(cè)人血清，水平置于溫箱（37℃)保溫24或48h，抗原從孔中間向周圍擴(kuò)散，因凝膠板中有相應(yīng)抗體，經(jīng)一定時(shí)間擴(kuò)散后，最后在凝膠孔周圍形成一圓型沉淀圈，測(cè)量其圓直徑，以圓的面積大小計(jì)算血清中Apo含量。該法要求在測(cè)量圓周大小時(shí)，一定要精確到0.1mm。這一測(cè)定方法可適用于以抗體為試劑販所有微量蛋白的測(cè)定，但易受多種因素的影響，難以測(cè)準(zhǔn)，有淘汰的趨勢(shì)。
⒉免疫火箭電泳先制備含某一Apo抗體的瓊脂糖凝膠，靠近陰極端打孔，加入待測(cè)血清，進(jìn)行電泳。血清中Apo抗原往正極移動(dòng)，一定時(shí)間（約3h)后，即可形成類似火箭的m.f1411.cn/job/沉淀峰，根據(jù)火箭峰高度或面積的大小計(jì)算血清中Apo含量。在嚴(yán)格掌握電泳條件下，本法是一種較為簡(jiǎn)便、試劑用量少的好方法。
⒊免疫比濁法免疫比濁法分為免疫透射比濁法和免疫散射比濁法。
Apo的特異抗體與血清中相應(yīng)的抗原結(jié)合形成抗原抗體免疫復(fù)合物，并形成微細(xì)顆粒，混懸于溶液介質(zhì)中，光線通過(guò)這種渾濁介質(zhì)溶液時(shí)被吸收一部分，吸收的多少與混濁顆粒的量成正比。在抗體量一定的條件下，抗原越多，抗原抗體復(fù)合物越多，溶液越渾濁，吸收光越多，以此對(duì)抗原進(jìn)行定量，這種通過(guò)測(cè)定光吸收量的方法稱為透射比濁法。該法是目前使用最為廣泛的方法，快速準(zhǔn)確，可在自動(dòng)生化分析儀上作批量檢測(cè)。
當(dāng)光線通過(guò)含抗原體復(fù)合物的渾濁介質(zhì)溶液的混懸顆粒時(shí)，出現(xiàn)光散射作用，散射光強(qiáng)度與溶液中混懸顆粒的量成正比，這種測(cè)定光散射強(qiáng)度的方法稱為免疫散射比濁法。該法的進(jìn)行，需要有具備測(cè)定散射光的儀器如散射比濁儀等。
免疫比濁時(shí)，由于抗原與抗體結(jié)合的過(guò)程中，m.f1411.cn/Article/吸收度與濃度之間不呈線性關(guān)系，一般是三次方程曲線關(guān)系。若要將抗原與抗體兩個(gè)變量之間的變動(dòng)特征恰當(dāng)?shù)胤从吵鰜?lái)，需要經(jīng)過(guò)三次方程擬合成近似直線化的曲線方程，再進(jìn)行運(yùn)算。免疫比濁的實(shí)際操作過(guò)程中，可采用終點(diǎn)法或速率法，用五點(diǎn)或七點(diǎn)不同濃度進(jìn)行定標(biāo)，經(jīng)三次曲線方程擬合求出一條能反映真實(shí)情況的濃度與吸光度的關(guān)系曲線方程，作為定量的工作曲線。如果以單一標(biāo)準(zhǔn)濃度定標(biāo)，以一次方程直線回歸運(yùn)算，所測(cè)結(jié)果僅在標(biāo)準(zhǔn)濃度上下波動(dòng)，真正的過(guò)低和過(guò)高值無(wú)法測(cè)準(zhǔn)。
免疫比濁法所用抗體應(yīng)是單價(jià)、特異并且高效價(jià)的，尤其是抗體若非單一而混有少量其他蛋白抗體，在血清中形成的復(fù)合物將是一種大雜燴，非單一蛋白的復(fù)合物，測(cè)出結(jié)果偏高而不準(zhǔn)確。
