公開(公告)號
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CN100357316C
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公開(公告)日
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2007.12.26
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申請(專利)號
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CN200410041095.8
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申請日期
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2004.06.23
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專利名稱
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人類細胞中體的蛋白質(zhì)復合物的分離方法
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主分類號
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C07K1/30(2006.01)I
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分類號
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C07K1/30(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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中國科學技術(shù)大學
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發(fā)明(設計)人
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姚雪彪;符傳孩;繆 勇;薛 宇
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地址
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230026安徽省合肥市金寨路96號中國科學技術(shù)大學專利辦公室
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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安徽合肥華信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
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代理人
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余成俊
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國省代碼
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安徽;34
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主權(quán)項
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人類細胞中體的蛋白質(zhì)復合物的分離方法,包括將人體細胞培養(yǎng)同步化及收集、加入低滲液重懸并孵育使收集細胞膨脹、破碎重懸的膨脹細胞后取出上清、通過密度梯度進行離心分離并利用去污劑抽提純化得到中體蛋白質(zhì)復合物、分離鑒定中體蛋白種類,其特征在于,所述人體細胞培養(yǎng)同步化及收集過程中,所述同步化培養(yǎng)、收集的細胞是有絲分裂末期的人體細胞,其步驟為:(1)使細胞同步于G1/S期;(2)使細胞同步通過S期;(3)使細胞同步在有絲分裂前中期;(4)使細胞高度同步在有絲分裂末期;(5)用常規(guī)方法收集處于有絲分裂末期的細胞。
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摘要
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本發(fā)明涉及涉及人體細胞分離技術(shù)。所述的人類細胞中體的蛋白質(zhì)復合物,它至少由129種蛋白組成,其中有30種細胞骨架蛋白、4種中心體蛋白、6種囊泡轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白、6種染色體調(diào)節(jié)蛋白、2種馬達蛋白、3種檢測點蛋白、7種降解調(diào)控蛋白、9種膜蛋白、12種轉(zhuǎn)錄與翻譯相關(guān)蛋白、28種蛋白激酶、5種線粒體蛋白、9種分子伴侶蛋白和7種未知類蛋白。在分離方法中,包括將人體細胞培養(yǎng)同步化及收集、加入低滲液重懸并孵育使收集細胞膨脹、破碎重懸的膨脹細胞后取出上清、通過密度梯度進行離心分離并利用去污劑抽提純化蛋白質(zhì)復合物、分離鑒定中體蛋白種類。人類細胞中體的蛋白質(zhì)復合物組成的揭示為篩選抗腫瘤藥物提供了模式系統(tǒng)和靶標蛋白ezrin及靶位。
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國際公布
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