| 公開(公告)號 | CN1482244A |
| 公開(公告)日 | 2004.03.17 |
| 申請(專利)號 | CN02139605.1 |
| 申請日期 | 2002.09.13 |
| 專利名稱 | 人鼻咽組織特異性基因NASG編碼蛋白及其抗體的制備 |
| 主分類號 | C12N15/12 |
| 分類號 | C12N15/12;C07K14/435;C07K14/47;C07K16/18 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 中南大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 李桂源;張必成;李小玲;沈守榮 |
| 地址 | 410083湖南省長沙市麓山南路 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 中南大學專利中心 |
| 代理人 | 龔燦凡 |
| 國省代碼 | 湖南;43 |
| 主權項 | 一種人鼻咽組織特異性基因NASG編碼蛋白的制備方法，其特征在于：本發(fā)明利用鼻咽組織特異性基因和鼻咽癌易感基因，對在鼻咽組織特異性表達且在鼻咽癌表達下調基因NASG的編碼蛋白，其具體方案為：1>GST/NASG融合蛋白的原核表達：①據(jù)原核表達載體pEGX-4T-2的GST閱讀框架設計引物，使NASG基因的編碼區(qū)閱讀框與GST的閱讀框架一致；②以成人鼻咽cDNA文庫為模板，PCR擴增NASG基因的編碼區(qū)，回收PCR產(chǎn)物條帶；③將pEGX-4T-2載體分別與NASG基因連接，構建成符合讀框的融合基因；④挑單個陽性菌落接種入含氨卞青霉素(100μg/ml)的2ml LB培養(yǎng)液中，37℃，過夜培養(yǎng)；將50μl過夜培養(yǎng)物分別接種到5ml含氨卞青霉素(100μg/ml)的LB培基中，于37℃培養(yǎng)2h，加入IPTG至終濃度為1mmol/L，37℃，在培養(yǎng)的不同時刻各取1ml轉移至微量離心管中，離心去上清，將沉淀重懸于25μl TE中，再加25μl 2×SDS凝膠加樣緩沖液中，混勻菌液，20kHz超聲破碎，收集上清液；在12％SDS-聚丙烯酰胺凝膠中各加15μl上清進行電泳，80-120V室溫電泳8h，考馬斯亮藍染色，觀察到NASG融合蛋白的表達；2>融合蛋白的分離純化：用谷胱苷肽Sepharose 4B過柱分離、純化融合蛋白。 |
| 摘要 | 人鼻咽組織特異性基因NASG編碼蛋白及其抗體的制備。本發(fā)明采用成人鼻咽組織cDNA制備檢測子(tester)，以成人食管、肺、肝、心、胃、脾、肌肉、腎和皮膚cDNA制備驅趕子(driver)，采用抑制性消減雜交技術獲得14個鼻咽差異表達基因的cDNA片段。NASG基因在人鼻咽組織特異性表達且在鼻咽癌中表達下調(34/48)，NASG編碼產(chǎn)物及其抗體的制備將為鼻咽癌的基因診斷和治療提供新的手段�；蛟\斷的特點是靈敏度高、特異性強、取材一般不受組織或時相限制，能夠實現(xiàn)鼻咽癌的早診斷、早發(fā)現(xiàn)和早治療。是一種全新的治療策略，有望實現(xiàn)鼻咽癌的無創(chuàng)傷性、根治性治療。 |
| 國際公布 |
