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鼻咽癌相關(guān)基因NGX6表達(dá)產(chǎn)物的獲取及抗體的制備

醫(yī)藥數(shù)據(jù)庫中心 藥學(xué)論壇 中南大學(xué)/李桂源;李江;張秋紅;譚琛
公開(公告)號(hào) CN1482243A  
公開(公告)日 2004.03.17  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN02139604.3  
申請(qǐng)日期 2002.09.13  
專利名稱 鼻咽癌相關(guān)基因NGX6表達(dá)產(chǎn)物的獲取及抗體的制備  
主分類號(hào) C12N15/12  
分類號(hào) C12N15/12;C12N15/70;C12N15/62;C12Q1/68;C07K14/435;A61K39/395  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 中南大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 李桂源;李江;張秋紅;譚琛  
地址 410083湖南省長沙市麓山南路  
頒證日  
國際申請(qǐng)  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 中南大學(xué)專利中心  
代理人 龔燦凡  
國省代碼 湖南;43  
主權(quán)項(xiàng) 一種鼻咽癌相關(guān)基因NGX6表達(dá)產(chǎn)物的獲取,采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法克隆NGX6基因蛋白編碼序列,構(gòu)建該基因的融合表達(dá)質(zhì)粒,導(dǎo)入JM109的大腸桿菌中,IPTG誘導(dǎo)其在大腸桿菌中的表達(dá),SDS-PAGE電泳,Western blot鑒定,用GST融合蛋白純化試劑盒純化融合蛋白,本發(fā)明據(jù)原核表達(dá)載體pEGX-3X的GST閱讀框架設(shè)計(jì)引物,使NGX6基因的編碼區(qū)閱讀框與GST的閱讀框架一致;其特征在于:以含NGX6基因的質(zhì)粒為模板(0.1μg),加入上述引物各10pmol進(jìn)行擴(kuò)增,回收PCR產(chǎn)物條帶;用SmalI酶切PCR回收產(chǎn)物及pEGX-3X載體,產(chǎn)生匹配的粘末端;小膠回收試劑回收線性的4.9kb的載體,NGX6編碼區(qū)片段;將pEGX-3X載體與NGX6基因連接,構(gòu)建成符合閱讀框的GST-NGX6融合基因;用含融合基因的pEGX-3X質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109,小量制備質(zhì)粒DNA,SalI和NotI酶切鑒定是否含插入片段,含插入片段的陽性克隆質(zhì)粒DNA純化后用DNA自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序。  
摘要 一種鼻咽癌相關(guān)基因NGX6表達(dá)產(chǎn)物的獲取及抗體的制備。本發(fā)明采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法克隆NGX6基因蛋白編碼序列,構(gòu)建該基因的融合表達(dá)質(zhì)粒,導(dǎo)入JM109的大腸桿菌中,IPTG誘導(dǎo)其在大腸桿菌中的表達(dá),SDS-PAGE電泳,Western blot鑒定,用GST融合蛋白純化試劑盒純化融合蛋白,本發(fā)明據(jù)原核表達(dá)載體pEGX-3X的GST閱讀框架設(shè)計(jì)引物,使NGX6基因的編碼區(qū)閱讀框與GST的閱讀框架一致。NGX6是鼻咽癌發(fā)生和發(fā)展的重要的相關(guān)基因之一;它的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)作用于鼻咽癌細(xì)胞,具有基因治療意義;抗體可用于鼻咽癌診斷。  
國際公布  
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