用凝膠層析從發(fā)酵液中提取重組人表皮生長(zhǎng)因子的方法
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公開(公告)號(hào)
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CN1162448C
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公開(公告)日
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2004.08.18
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN00122057.8
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申請(qǐng)日期
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2000.08.14
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專利名稱
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用凝膠層析從發(fā)酵液中提取重組人表皮生長(zhǎng)因子的方法
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主分類號(hào)
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C07K14/575
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分類號(hào)
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C07K14/575;C07K1/16
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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浙江大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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姚善涇;朱自強(qiáng);童望宇;梅樂和
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地址
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310027 浙江省杭州市玉古路20號(hào)
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頒證日
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2004.08.18
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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杭州求是專利事務(wù)所有限公司
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代理人
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張法高
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國(guó)省代碼
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浙江;33
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主權(quán)項(xiàng)
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一種用凝膠層析從發(fā)酵液中提取重組人表皮生長(zhǎng)因子的方法，其特征在于它的提取步驟如下：1)發(fā)酵液預(yù)制備取除去菌體的發(fā)酵上清液1000ml，發(fā)酵液中人表皮生長(zhǎng)因子濃度為100～300mg/l，加入350～450g硫酸銨，攪拌至溶解，0～4℃下靜置4～24小時(shí)，至沉淀徹底，人表皮生長(zhǎng)因子進(jìn)入沉淀中，虹吸去除700～850ml上清液，剩余的150～300ml經(jīng)過10000rpm、30min離心，用50ml蒸餾水或0.02M磷酸緩沖液攪拌溶解沉淀，形成懸濁液，0～4℃下靜置4～24小時(shí)，待溶解充分后，經(jīng)過10000rpm、30min離心，收集上清液，人表皮生長(zhǎng)因子進(jìn)入上清液中；
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摘要
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本發(fā)明公開了一種用凝膠層析從發(fā)酵液中提取重組人表皮生長(zhǎng)因子的方法。它的提取步驟如下，發(fā)酵液預(yù)制備：取除去菌體的發(fā)酵上清液，經(jīng)鹽析、溶解、離心，人表皮生長(zhǎng)因子進(jìn)入上清液中；人表皮生長(zhǎng)因子的凝膠分離：用層析系統(tǒng)將上清液加到凝膠層析柱中，然后洗脫直至出峰完畢，收集洗脫液；人表皮生長(zhǎng)因子的冷凍升華干燥：將收集液于-40℃下冷凍升華干燥，即可。本發(fā)明具有過程集成、工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)周期短、操作方便、成本低、條件溫和與見效快等優(yōu)點(diǎn)。
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國(guó)際公布
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評(píng)論加載中...
