長(zhǎng)效重組組織因子途徑抑制物及其制備方法
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公開(公告)號(hào)
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CN1528894A
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公開(公告)日
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2004.09.15
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN03151203.8
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申請(qǐng)日期
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2003.09.25
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專利名稱
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長(zhǎng)效重組組織因子途徑抑制物及其制備方法
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主分類號(hào)
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C12N15/12
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分類號(hào)
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C12N15/12;C12N15/63
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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復(fù)旦大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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馬端;宋后燕;白浩;張農(nóng)
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地址
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200433上海市邯鄲路220號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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上海正旦專利代理有限公司
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代理人
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包兆宜
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國(guó)省代碼
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上海;31
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主權(quán)項(xiàng)
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一類重組組織因子途徑抑制物(TFPI)長(zhǎng)效突變體，命名為長(zhǎng)效組織因子途徑抑制物(LTFPI)，其特征在于TFPI羧基末端267-304區(qū)域內(nèi)的某些氨基酸突變后具有序列1的氨基酸序列，所述LTFPI的半衰期較TFPI延長(zhǎng)10倍以上，具有抗組織因子、凝血因子VII/VIIa和凝血因子X/Xa功能。
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摘要
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本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及長(zhǎng)效組織因子途徑抑制物(LTFPI)及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明對(duì)組織因子途徑抑制物(TFPI)及其受體低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白(LRP)的生物信息學(xué)和結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)分析和實(shí)驗(yàn)，確定了TFPI羧基末端與LRP結(jié)合并被清除的部位。設(shè)計(jì)了TFPI羧基末端突變體，通過PCR定點(diǎn)突變構(gòu)建LTFPI基因后，與原核或真核表達(dá)載體重組，轉(zhuǎn)化大腸桿菌或畢赤酵母，篩選高表達(dá)工程菌。原核工程菌經(jīng)發(fā)酵擴(kuò)增，破碎細(xì)菌，離心收集包涵體，復(fù)性后經(jīng)分子篩和離子交換二步法純化LTFPI；真核工程菌直接將上清進(jìn)行二步純化。獲得的LTFPI半衰期明顯延長(zhǎng)，具有良好的抗凝功能。
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國(guó)際公布
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評(píng)論加載中...
