| 公開(公告)號 | CN1552853A |
| 公開(公告)日 | 2004.12.08 |
| 申請(專利)號 | CN03129106.6 |
| 申請日期 | 2003.06.05 |
| 專利名稱 | 雜交瘤細胞表達基因工程尿激酶原的制備方法 |
| 主分類號 | C12N9/72 |
| 分類號 | C12N9/72;C12N15/58;C12N5/12 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 上海實業(yè)科華生物藥業(yè)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 王 縵;顧燕黎;李 慶;吳利紅;許 琦 |
| 地址 | 200233上海市欽州北路1189號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 上海市華誠律師事務(wù)所 |
| 代理人 | 徐申民 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種雜交瘤細胞表達基因工程人糖基化尿激酶原的制備方法，包括：將包含尿激酶原cDNA序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雜交瘤細胞并篩選高表達尿激酶原的雜交瘤細胞工程細胞株；培養(yǎng)尿激酶原工程細胞株；和工程細胞株培養(yǎng)上清的純化，其特征在于：所述培養(yǎng)尿激酶原工程細胞株是將尿激酶原工程細胞株先用有血清培養(yǎng)基培養(yǎng)至足夠量后，轉(zhuǎn)入生物反應(yīng)器內(nèi)，接種細胞密度2-4×105個/毫升，隨后降低胎牛血清濃度進行低血清培養(yǎng)，待細胞密度上升到2-2.5×106個/毫升后開始無血清灌注培養(yǎng)，通過調(diào)節(jié)灌注量來始終確保細胞密度不低于1×106個/毫升，并收集培養(yǎng)上清。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供一種雜交瘤細胞表達尿激酶原的制備方法，該方法中尿激酶原工程細胞株的培養(yǎng)是將尿激酶原工程細胞株先用有血清培養(yǎng)，至細胞密度上升到2-4×105個/毫升后，轉(zhuǎn)入生物反應(yīng)器內(nèi)，并降低胎牛血清濃度，待細胞密度上升到2-2.5×106個/毫升后開始無血清灌注培養(yǎng)，通過調(diào)節(jié)灌注量來始終確保細胞密度不低于1×106個/毫升，并收集培養(yǎng)上清進行純化。本發(fā)明還提供了一種直接采用上述方法中經(jīng)全無血清灌注培養(yǎng)制得的工程細胞株先進行有血清復(fù)蘇，然后進行無血清培養(yǎng)，再進行全無血清灌注培養(yǎng)并收集培養(yǎng)上清進行純化的制備尿激酶原的方法。 |
| 國際公布 |
