公開(公告)號(hào)
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CN1186453C
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公開(公告)日
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2005.01.26
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN03102260.X
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申請(qǐng)日期
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2003.01.30
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專利名稱
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一種腫瘤細(xì)胞藥敏檢測(cè)方法及其檢測(cè)板
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主分類號(hào)
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C12Q1/04
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分類號(hào)
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C12Q1/04
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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崔克勤
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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崔克勤
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地址
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050091 河北省石家莊市新石北路368號(hào)金石工業(yè)園區(qū)2-2-220號(hào)泰倫生物有限公司
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頒證日
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國際申請(qǐng)
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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石家莊冀科專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
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代理人
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李羨民
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國省代碼
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河北;13
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主權(quán)項(xiàng)
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一種腫瘤細(xì)胞藥敏檢測(cè)方法,其特征在于,它分為預(yù)制檢測(cè)板階段和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)階段,所述預(yù)制檢測(cè)板階段包含如下步驟:A.準(zhǔn)備檢測(cè)板:選用每塊板上含有多排、每排設(shè)有多個(gè)藥檢孔的實(shí)驗(yàn)板作檢測(cè)板,要求檢測(cè)板無破損、污染和劃痕;B.消毒:用環(huán)氧乙烷消毒;C.配置藥物:選擇常用抗癌藥物,分別配置藥物溶液,濃度以下列公式計(jì)算:濃度=成人常規(guī)靜脈用量/(成人標(biāo)準(zhǔn)體重×8%×1000)(%);D.藥物加入:每孔加入藥物溶液10微升,全部藥檢孔加完后,將檢測(cè)板蓋蓋上,放入滅菌容器內(nèi);E.固化:將裝有檢測(cè)板的容器放入凍干機(jī)內(nèi),真空冷凍4小時(shí),冷凍真空度為:102Pa,溫度:-20~-40℃,將藥檢孔內(nèi)的液體凍干成固體;F.包裝:將檢測(cè)板封裝在鋁箔袋內(nèi),加入干燥劑;所述實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)階段包含如下步驟:G..標(biāo)本留取取指尖大小的新鮮實(shí)體腫瘤組織標(biāo)本,立即裝入標(biāo)本瓶內(nèi),若室溫放置,應(yīng)在2-6小時(shí)內(nèi)檢測(cè)完畢。H.標(biāo)本預(yù)處理:祛除標(biāo)本周圍的非腫瘤組織和壞死組織,用緩沖液沖洗2-3次,剪碎成粒徑不大于1毫米的碎塊;I.制備腫瘤細(xì)胞懸液:將腫瘤組織碎塊研磨過濾進(jìn)入緩沖液溶液內(nèi),加入離心管內(nèi)離心操作6-10分鐘,棄去上清,用緩沖液混懸腫瘤細(xì)胞,再離心操作后棄去上清,將細(xì)胞混懸于DMEM培養(yǎng)基中,使細(xì)胞計(jì)數(shù)為5×105/ml;若是血液、骨髓類液體標(biāo)本,則省去腫瘤組織剪碎、研磨工序;J.腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng):將檢測(cè)板預(yù)溫至37℃,將DMEM培養(yǎng)基亦預(yù)溫至37℃;每孔加細(xì)胞懸液200微升,輕輕搖蕩混勻;37℃度、5%CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí);K.MTT還原每孔加入濃度為5mg/ml的MTT20μl,繼續(xù)培養(yǎng)3-24小時(shí),至形成藍(lán)色針狀結(jié)晶為止;L.檢測(cè):將檢測(cè)板離心操作8-10分鐘,棄去上清,用吸水紙吸去殘液;每孔加入二甲亞砜100微升,輕輕搖蕩混勻;用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔OD值,所述酶標(biāo)儀的檢測(cè)光的波長選定570nm;M.計(jì)算與判斷:抑制率(IR)=(1-給藥孔平均OD值/對(duì)照孔平均OD值)×100%若:IR>50%,判定為高度敏感;30%≤IR≤50%,判定為敏感;IR<30%,判定為不敏感。
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摘要
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一種腫瘤細(xì)胞藥敏檢測(cè)方法及其檢測(cè)板,屬檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域,用于解決目前檢測(cè)中操作不標(biāo)準(zhǔn)、隨意性大、不便檢測(cè)的問題。其技術(shù)方案是,將檢測(cè)分為預(yù)制檢測(cè)板階段和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)階段,預(yù)制檢測(cè)板階段是將抗腫瘤藥物預(yù)先加入檢測(cè)板藥檢孔中,并予以冷凍固化,在檢測(cè)時(shí),將腫瘤細(xì)胞加入藥檢孔中,利用MTT法還原成有色沉淀,再進(jìn)而制成有色溶液,經(jīng)酶標(biāo)儀測(cè)定后計(jì)算比較,求得藥敏數(shù)值,作出判斷。本發(fā)明可以使檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)化、商品化,極大地簡化了操作程序,提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,減少化療中的盲目性,指導(dǎo)臨床科學(xué)合理地用藥,提高化療的有效率。
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國際公布
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