| 公開(公告)號 | CN1187457C |
| 公開(公告)日 | 2005.02.02 |
| 申請(專利)號 | CN02136710.8 |
| 申請日期 | 2002.08.29 |
| 專利名稱 | 利用條形碼式基因芯片檢測待檢核酸的方法 |
| 主分類號 | C12Q1/68 |
| 分類號 | C12Q1/68 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 上海交通大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 劉喜朋;秦勝營;劉建華 |
| 地址 | 200030 上海市華山路1954號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海交達(dá)專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 毛翠瑩 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種利用條形碼式基因芯片檢測待檢核酸的方法，其特征在于包括以下步驟：1)設(shè)計(jì)合成條形碼寡核苷酸堿基序列，并用常規(guī)的化學(xué)或物理方法將條形碼寡核苷酸片段固定于基片表面，制備基因芯片，將與之互補(bǔ)配對的檢測片段長度限定在30個(gè)核苷酸以內(nèi)，調(diào)整導(dǎo)致交叉雜交和錯(cuò)誤雜交的條形碼序列，使基因芯片上的所有條形碼寡核苷酸片段的雜交-洗脫條件兼容，確定最適雜交洗脫條件；2)化學(xué)合成待檢單核苷酸位點(diǎn)特異性的寡核苷酸引物片段，正向引物的上游序列與條形碼基因芯片上的寡核苷酸片段互補(bǔ)配對，中間是限制酶切位點(diǎn)，下游序列與待檢單核苷酸位點(diǎn)處的目標(biāo)序列配對，5’-末端是生物素或熒光基團(tuán)標(biāo)記，距離3’-末端上游1-4個(gè)核苷酸處引入一個(gè)不能與目標(biāo)序列配對的核苷酸，反向引物是隨機(jī)引物或特異引物；3)將正向引物與反向引物、待測目標(biāo)核酸、DNA聚合酶、4種脫氧三磷酸單核苷酸加入聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)緩沖液，進(jìn)行反應(yīng)；4)將反應(yīng)產(chǎn)物純化，除去未反應(yīng)的引物片段后，再利用DNA限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切；5)將條形碼基因芯片在最適雜交條件下與酶切DNA片段進(jìn)行雜交并洗脫。 |
| 摘要 | 一種利用條形碼式基因芯片檢測待檢核酸的方法，采用將特定堿基序列的寡核苷酸片段以微陣列形式固定于基片表面，制備條形碼式基因芯片。待檢單核苷酸位點(diǎn)特異性的正向引物上游序列與條形碼互補(bǔ)配對，中間是限制酶切位點(diǎn)，下游序列與目標(biāo)序列配對，5’-末端是生物素或熒光基團(tuán)標(biāo)記，距離3’-末端上游1-4個(gè)核苷酸處引入一個(gè)不能與目標(biāo)序列配對的核苷酸，經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、純化、酶切，與條形碼基因芯片雜交洗脫。本發(fā)明條形碼堿基序列組成不依賴于待測目標(biāo)核酸，檢測片段長度在30個(gè)核苷酸以內(nèi)，極大地降低了交叉雜交和錯(cuò)誤雜交，通過改變引物中與待檢單核苷酸位點(diǎn)處的目標(biāo)序列配對的下游序列，使條形碼基因芯片適合于各種樣品的檢測。 |
| 國際公布 |
