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一種有效提高基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換(突變/修復(fù))的新方法

公開(公告)號 CN1624147A  
公開(公告)日 2005.06.08  
申請(專利)號 CN200310118223.X  
申請日期 2003.12.05  
專利名稱 一種有效提高基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換(突變/修復(fù))的新方法  
主分類號 C12N15/90  
分類號 C12N15/90;C12N15/09;C12N15/82;C12N5/06;C12N5/10  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;香港大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 劉德培;吳雪松;辛立;殷文璇;黃建東;謝賞恩;梁植權(quán)  
地址 100005北京市東單三條5號  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司  
代理人 程偉  
國省代碼 北京;11  
主權(quán)項(xiàng) 一種提高細(xì)胞內(nèi)基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換的方法,包括:針對靶位點(diǎn)設(shè)計(jì)合成轉(zhuǎn)換用寡核苷酸分子;將寡核苷酸分子與轉(zhuǎn)染試劑混合,形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物;使生長期細(xì)胞與有效抑制DNA合成濃度的抑制劑接觸,使染色體DNA的復(fù)制叉處于阻滯狀態(tài);將轉(zhuǎn)染復(fù)合物與所述的染色體DNA的復(fù)制叉被阻滯的細(xì)胞共孵育;進(jìn)入細(xì)胞的單鏈寡核苷酸通過同源互補(bǔ)與靶序列相互作用,完成靶位點(diǎn)的定點(diǎn)轉(zhuǎn)換。  
摘要 本發(fā)明涉及一種細(xì)胞內(nèi)基因操作技術(shù),利用DNA合成阻滯劑——胸苷(thymidine)可以將傳統(tǒng)單鏈寡核苷酸介導(dǎo)的基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換(修復(fù)/突變)的效率顯著提高。目前應(yīng)用本發(fā)明所獲得的最佳結(jié)果是將效率提高到原先傳統(tǒng)方法的約10倍水平。本發(fā)明通過胸苷降低復(fù)制叉移動(dòng)速度,使靶基因在復(fù)制叉部位長時(shí)間以單鏈形式存在,為單鏈寡核苷酸與靶序列發(fā)生互補(bǔ)配對進(jìn)而完成靶位點(diǎn)的轉(zhuǎn)換(修復(fù)/突變)人為地創(chuàng)造了條件。本發(fā)明所獲得的結(jié)果可以有效提高基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換技術(shù)在各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用性,包括動(dòng)植物遺傳育種、病毒微生物的功能轉(zhuǎn)化,人類點(diǎn)突變遺傳病的基因治療,以及在功能基因組學(xué)研究中對單核苷酸多態(tài)性的研究方法等。本發(fā)明同時(shí)提供了一種構(gòu)建基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換研究的報(bào)告系統(tǒng)的方法,以及由此方法獲得的一株細(xì)胞系,該系統(tǒng)在檢測、評估基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換效果方面具有優(yōu)越性。  
國際公布  
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