胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的方法
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公開(公告)號(hào)
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CN1228442C
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公開(公告)日
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2005.11.23
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN03139762.X
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申請(qǐng)日期
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2003.07.09
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專利名稱
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胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的方法
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主分類號(hào)
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C12N5/00
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分類號(hào)
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C12N5/00;C12N5/06
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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暨南大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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胡安斌;蔡繼業(yè)
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地址
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510632廣東省廣州市天河區(qū)石牌
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頒證日
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國際申請(qǐng)
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司
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代理人
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王東亮
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國省代碼
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廣東;44
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主權(quán)項(xiàng)
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一種胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的方法，其特征是：其具體的誘導(dǎo)分化步驟如下：(1)、ES細(xì)胞培養(yǎng)：將保存在液氮中的BALB/c系小鼠的ES細(xì)胞取出，立即置于37-39℃的環(huán)境中解凍復(fù)蘇，離心棄上清去除DMSO以及殘存的胰酶，加入ES培養(yǎng)基吹散，以2×104cells/ml的密度將細(xì)胞轉(zhuǎn)至一次性塑料培養(yǎng)瓶中，每天換液一次，每2-3天傳代一次；(2)、ES細(xì)胞發(fā)育為EBs：上述的ES細(xì)胞換用EBs培養(yǎng)基，將細(xì)胞轉(zhuǎn)至未經(jīng)過促細(xì)胞黏附作用處理、瓶底光滑的玻璃培養(yǎng)瓶中用搖動(dòng)培養(yǎng)法培養(yǎng)，每1小時(shí)搖動(dòng)細(xì)胞一次，使其懸浮生長發(fā)育為EBs，第2-3天每3小時(shí)搖動(dòng)一次，第4-5天每小時(shí)搖動(dòng)一次；EBs的發(fā)育分化期間每1-2天換液一次，搖動(dòng)培養(yǎng)法培養(yǎng)5天；(3)、肝細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化：EBs懸浮發(fā)育生長5天后，于第6天轉(zhuǎn)至0.1％白明膠處理過的6孔培養(yǎng)板和24孔培養(yǎng)板上，讓其充分貼壁生長分化，每2天換液一次，胚體貼壁并向四周生長分化；第7天-第11天，加入aFGF，終濃度為100ng/ml；第7天-19天，加入TGF，終濃度為20ng/ml，AFP，終濃度為20ng/ml；第11天-第19天，加入HGF和OSM，終濃度分別為20ng/ml和10ng/ml，10-7M地塞米松，5μg/ml胰島素，5μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白，5μg/ml亞硒酸。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的方法，ES分化用的細(xì)胞生長因子分別是轉(zhuǎn)化生長因子TGF，甲胎蛋白AFP，酸性纖維細(xì)胞生長因子aFGF，肝細(xì)胞生長因子HGF，制瘤素OSM，地塞米松DEX，以及胰導(dǎo)素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、亞硒酸(ITS)，其肝細(xì)胞分化率為30％以上。
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國際公布
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評(píng)論加載中...
