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一種人白細(xì)胞介素28B的生產(chǎn)方法及重組IL-28B工程菌

公開(公告)號 CN1274823C  
公開(公告)日 2006.09.13  
申請(專利)號 CN200410052292.X  
申請日期 2004.11.19  
專利名稱 一種人白細(xì)胞介素28B的生產(chǎn)方法及重組IL-28B工程菌  
主分類號 C12N15/09(2006.01)I  
分類號 C12N15/09(2006.01)I;C12N15/24(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;C07K14/54(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院  
發(fā)明(設(shè)計)人 何韶衡;李明才  
地址 515031廣東省汕頭市新陵路22號  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機構(gòu) 廣州粵高專利代理有限公司  
代理人 陳 衛(wèi)  
國省代碼 廣東;44  
主權(quán)項 一種人白細(xì)胞介素(IL)-28B的生產(chǎn)方法,其特征在于采用基因工程方法生產(chǎn),所述基因工程方法包括如下步驟:(1)合成PCR引物,并在合成的引物中導(dǎo)入LIC粘性末端,上游引物:5-GACGACGACAAGATTCCTGTCGCCAGGCTC-3下游引物:3-GAGGAGAAGCCCGGTTTAGACACACAGGTCCCCGCT-5;(2)PCR擴增:以pcDNA3.1/V5-His-TOPO-IL-28B質(zhì)粒為模板,通過PCR基因擴增,獲得IL-28B基因片段;(3)將上述PCR擴增得到的IL-28B基因片段與pET-44Ek/LIC載體連接,構(gòu)建重組載體pET-44Ek/LIC-IL-28B;(4)將重組載體pET-44Ek/LIC-IL-28B轉(zhuǎn)化細(xì)菌,構(gòu)建重組IL-28B工程菌;(5)培養(yǎng)構(gòu)建的重組IL-28B工程菌,誘導(dǎo)其表達(dá)生產(chǎn)IL-28B。  
摘要 本發(fā)明公開了一種人白細(xì)胞介素28B的生產(chǎn)方法及重組IL-28B工程菌。本發(fā)明包括人工合成引物;PCR擴增IL-28B成熟肽編碼區(qū);IL-28B原核表達(dá)載體pET44-IL-28B的構(gòu)建;轉(zhuǎn)化入大腸桿菌構(gòu)建重組IL-28B工程菌;培養(yǎng)工程菌高效表達(dá)IL-28B;IL-28B的純化。本發(fā)明由于采用不依賴連接反應(yīng)的克隆方法(LIC),準(zhǔn)確、快速獲得IL-28B基因的成熟肽編碼區(qū);使用大腸桿菌偏愛的終止密碼子提高表達(dá)效率,表達(dá)量高,用S蛋白親和層析柱一步純化即可獲得很純的產(chǎn)品。IL-28B的制備,對臨床用于治療和預(yù)防感染性疾病及非感染性疾病具有重要的前景。  
國際公布  
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