| 公開(公告)號 | CN1249244C |
| 公開(公告)日 | 2006.04.05 |
| 申請(專利)號 | CN02812556.8 |
| 申請日期 | 2002.06.19 |
| 專利名稱 | 去除抗生素耐藥性和/或使質粒穩(wěn)定的方法，該方法構建的載體和轉化的宿主細胞及其應用 |
| 主分類號 | C12N15/68(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/68(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | 2001.6.21 SE 0102204-5 |
| 申請(專利權)人 | 利夫·艾薩克森;彼得·J·黑格;法黑德·M·阿布達爾卡里姆 |
| 發(fā)明(設計)人 | 利夫·艾薩克森;彼得·J·黑格;法黑德·M·阿布達爾卡里姆 |
| 地址 | 瑞典烏普薩拉 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | 2002-06-19 PCT/EP2002/006780 |
| 進入國家日期 | 2003.12.22 |
| 專利代理機構 | 北京市柳沈律師事務所 |
| 代理人 | 巫肖南;封新琴 |
| 國省代碼 | 瑞典;SE |
| 主權項 | 用于去除抗生素耐藥性和/或使質粒穩(wěn)定的方法，包括如下步驟： a)構建含有為同向重復序列所包圍的抗生素耐藥性基因的載體，其中所述同向重復序列可以是沒有互養(yǎng)效應的必需基因， b)當所述重復序列并非所述必需基因時，另外向載體中插入所述必需基因和適宜此必需基因的啟動子， c)用a)或b)所得載體轉染宿主細胞， d)去除宿主細胞中的沒有互養(yǎng)效應的染色體必需基因， e)體內去除抗生素耐藥性基因， 其中，步驟a)和b)可以用相反的順序完成。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及用于除去抗生素耐藥性和/或使質粒穩(wěn)定的方法。本發(fā)明包括構建載體的步驟，所述載體含有為同向重復序列基因所包圍的抗生素耐藥性基因。此同向重復序列基因可以是一個必需基因或Rek-序列。在后一種情況中，載體中存在具有適宜啟動子的必需基因。用所得的載體轉化宿主細胞，之后去除宿主細胞中必需的染色體基因并去除細胞中載體內的抗生素耐藥性基因。優(yōu)選的必需基因是infA。本發(fā)明也涉及在宿主細胞內穩(wěn)定維持載體的方法，在細胞中生產DNA的方法和在細胞中生產氨基酸，肽和蛋白的方法。而且，本發(fā)明還涉及已去除染色體必需基因，并含有下述載體的轉化宿主細胞，該載體含有相應的必需基因，還可能含有一或多個所需的基因X。該載體不攜帶抗生素耐藥性基因。本發(fā)明還包括從宿主獲得的載體DNA在制備用于基因治療的藥物組合物，如疫苗中的用途。攜帶含有適宜基因X的載體的細菌可被用于大規(guī)模生產該基因的基因產物所針對的化合物。 |
| 國際公布 | 2003-01-03 WO2003/000881 英 |
