公開(公告)號
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CN100338223C
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公開(公告)日
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2007.09.19
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申請(專利)號
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CN02125767.1
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申請日期
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2002.08.16
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專利名稱
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一種單鏈DNA快速制備技術及試劑盒
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主分類號
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C12P19/34(2006.01)I
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分類號
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C12P19/34(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權
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申請(專利權)人
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趙 翀
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發(fā)明(設計)人
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趙 翀
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地址
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100083北京市海淀區(qū)學院路丁11號西二樓408室
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構
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代理人
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國省代碼
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北京;11
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主權項
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一種用于核酸的測序、反義寡核苷酸藥物的合成、單鏈探針的制備以及SELEX分子文庫的構建的單鏈核酸快速制備試劑盒,其特征在于它至少包括一管生物微粒,所述生物微粒是表面具有由環(huán)氧乙基、碘乙基、酰肼基、環(huán)化亞胺碳酸鹽、氰酸酯和吖內(nèi)酯組成的連接分子層的固相基質(zhì)微粒;一套用于固/液相分離的分離裝置;并含有下述所有成分:①至少有一管為DNA聚合酶或其酶活性的片段、基因重組產(chǎn)物或酶修飾物;②至少有一管為反轉錄酶;③至少有一管為核酸連接酶;④至少有一管為dNTP或rNTP,其中至少有一種成分為指示分子的標記物;⑤至少有一管為非固相寡核苷酸引物;⑥至少有一管為電泳樣品緩沖液;⑦至少有一管為ddNTPs,其中有一種成分為指示分子的標記物;⑧至少有一管為DNA依賴的RNA聚合酶;⑨至少有一管為緩沖液。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種單鏈DNA快速制備技術及試劑盒的制備方法。該技術快速、靈敏、純度高,制備方法簡便、成本低,適合各種規(guī)模不同核酸樣品的DNA測序和探針制備。主要特征在于將一條引物通過固相合成或化學偶聯(lián)等方法固定在固相基質(zhì)微粒的表面獲得固相引物,以靶核酸為模板在固相基質(zhì)的表面進行固相PCR擴增,產(chǎn)物經(jīng)加熱變性,使DNA雙鏈解鏈,而由固相引物延伸獲得的DNA單鏈仍然保留在固相基質(zhì)的表面;分離固/液相獲得兩條互補的DNA單鏈。運用本發(fā)明制備的單鏈DNA和RNA可用于核酸的測序,反義寡核苷酸藥物的合成、單鏈探針的制備以及SELEX分子文庫的構建等,可廣泛地用于生物學、醫(yī)藥學、疾病預防、農(nóng)牧業(yè)、食品與衛(wèi)生、能源與化工、環(huán)境監(jiān)測以及醫(yī)學診斷與檢測等領域。
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國際公布
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