| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1861796A |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2006.11.15 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510009978.5 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.05.13 |
| 專利名稱 | 制備用于在大腸桿菌和昆蟲細(xì)胞中表達(dá)鴨α-干擾素基因的方法 |
| 主分類號(hào) | C12N15/70(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/70(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/21(2006.01)I;C12N15/866(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 東北農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 王君偉;任桂萍;許麗娜;李洪濤 |
| 地址 | 150030黑龍江省哈爾濱市香坊區(qū)木林街59號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 哈爾濱市哈科專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 祖玉清 |
| 國(guó)省代碼 | 黑龍江;23 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 制備用于在大腸桿菌和昆蟲細(xì)胞中表達(dá)鴨α-干擾素基因的方法，其特征是： (1)用淋巴細(xì)胞分離液分離鴨外周血單核細(xì)胞，植物血凝素誘導(dǎo)培養(yǎng)鴨外周血單核細(xì)胞，收獲誘導(dǎo)培養(yǎng)的細(xì)胞，用Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA； (2)設(shè)計(jì)擴(kuò)增鴨α-干擾素基因的特異性引物，如下： 上游引物P1 20bp：5′-GCACAACCCAGGATCCACCA-3′，引入BamH I酶切位點(diǎn)； 下游引物P2 19bp：5′-GTGCGCGTGTGGGGTACCT-3′； (3)利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增鴨α-干擾素基因； (4)對(duì)鴨α-干擾素基因進(jìn)行克隆、測(cè)序鑒定； (5)利用BamH I、Sal I這兩個(gè)多克隆位點(diǎn)，將鴨α-干擾素基因定向亞克隆至原核表達(dá)載體pET30a和昆蟲桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pBlueBacHis2A上； (6)重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-DuIFN-α轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)plysS； (7)確定原核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)鴨α-干擾素的最佳誘導(dǎo)時(shí)間和IPTG濃度； (8)鴨α-干擾素在大腸桿菌BL21(DE3)plysS中的誘導(dǎo)表達(dá)； (9)重組表達(dá)質(zhì)粒pBlueBacHis2A-DuIFN-α與桿狀病毒線性DNA共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞Sf9細(xì)胞株； (10)噬斑分析篩選重組病毒； (11)確定真核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)重組鴨α-干擾素的最佳表達(dá)時(shí)間和感染復(fù)數(shù)； (12)按最佳表達(dá)時(shí)間和MOI接種病毒，感染Sf9細(xì)胞，在Sf9細(xì)胞中表達(dá)鴨α-干擾素。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及制備用于在大腸桿菌和昆蟲細(xì)胞中表達(dá)鴨α-干擾素基因的方法。包括編碼鴨α-干擾素的基因的克隆，含鴨α-干擾素基因的原核表達(dá)載體和重組昆蟲桿狀病毒轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建，用所述含鴨α-干擾素基因的重組原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌和誘導(dǎo)表達(dá)，用所述含鴨α-干擾素基因的重組桿狀病毒轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞及在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)等。通過(guò)本方法制備的產(chǎn)品為研究鴨α-干擾素生物活性及其作用機(jī)理提供了基礎(chǔ)，也可制備成抗病毒的藥物。 |
| 國(guó)際公布 |
