山楂化滯丸－熊果酸的測(cè)定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測(cè)定山楂化滯丸中熊果酸的含量。

本方法適用于中成藥山楂化滯丸。

供試品于索氏提取器中經(jīng)乙醚加熱回流，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)�用無(wú)水乙醇－氯仿（3：2)混合液溶解，制成供試液，點(diǎn)樣、展開(kāi)，以10%硫酸乙醇溶液顯色，用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長(zhǎng)λs=535nm， λ_R=650nm測(cè)量熊果酸（C₃₀H₄₈O₃)吸收度積分值，計(jì)算其含量。

1 乙醚

2 石油醚

3 無(wú)水乙醇

4 氯仿

5 環(huán)己烷

6 醋酸乙酯

7 甲酸

8 硫酸 10%硫酸乙醇溶液

9 乙醇

1 儀器

1.1索氏提取器

1.2薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.5展開(kāi)室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

1.對(duì)照品溶液的制備

精密稱取熊果酸對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.供試品溶液的制備

取供試品，剪碎，精密稱取約3g，，加水10mL，放置使溶散，濾過(guò)；藥渣再用水10mL洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，在100℃烘干，連同濾紙一并置索氏提取器內(nèi)，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)�用石油醚�?0～60℃)浸泡2次，每次5mL（浸泡2分鐘)，傾去石油醚，殘?jiān)�加適量無(wú)水乙醇－氯仿（3：2)混合液，微熱使溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2.點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液 6μL、對(duì)照品溶液 4μL與 8μL，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3.展開(kāi)

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi)劑中，以環(huán)己烷－氯仿－醋酸乙酯－甲酸（20：5：8：0.1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加熱5～7分鐘，至斑點(diǎn)顯色清晰，取出。

4.含量測(cè)定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λs=535nm， λ_R=650nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算。

用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，若對(duì)照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過(guò)原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過(guò)原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編、化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部p.336。