方法名稱： |
芎菊上清丸－鹽酸小檗堿的測(cè)定－薄層掃描熒光法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用薄層掃描法測(cè)定芎菊上清丸中鹽酸小檗堿的含量。 本方法適用于中成藥芎菊上清丸。 |
方法原理： |
供試品本品加鹽酸-甲醇(1∶100)，浸泡過夜，超聲，濾過，制成供試液，點(diǎn)樣、展開，用薄層掃描儀進(jìn)行熒光鋸齒掃描，激發(fā)波長366nm測(cè)量鹽酸小檗堿吸收度積分值，計(jì)算其含量。 |
試劑： |
1. 鹽酸 2. 甲醇 3. 苯 4. 醋酸乙酯 5. 異丙醇 6. 濃氨溶液 7. 鹽酸小檗堿對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所) |
儀器設(shè)備： |
1 儀器 1.1 薄層掃描儀 1.2點(diǎn)樣器：定量毛細(xì)管 1.3展開室 可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。 1.4薄層板：以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠GF254薄層板 1.5 超聲振蕩儀 2 實(shí)驗(yàn)條件 2.1 展開劑：苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨溶液(12∶6∶3∶3∶1) 2.2 展開距離：濃氨溶液預(yù)平衡后，上行展開8ｃｍ取出，晾干。 2.3 定位：紫外燈下確定斑點(diǎn)位置 2.4 掃描方式：熒光鋸齒掃描，激發(fā)波長366nm，3號(hào)濾光片，狹縫2mm×2mm，靈敏度2，設(shè)背景校正。 |
試樣制備： |
1. 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加鹽酸-甲醇(1∶100)的混合溶液配制成0.06mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。 2. 供試品溶液的制備 本品6g，研細(xì)，過65目篩，取約1g，精密稱定，置具塞三角瓶中精密加鹽酸-甲醇(1∶100)的混合溶液25mL，稱定重量，浸泡過夜，超聲處理45min，放冷，再稱定重量，用上述溶劑補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。 |
操作步驟： |
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密吸取對(duì)照品溶液1、2、3、4、5μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑硅膠GF254薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨溶液(12∶6∶3∶3∶1)為展開劑， 濃氨溶液預(yù)平衡后，上行展開8cm取出，晾干，紫外燈下確定斑點(diǎn)位置，進(jìn)行熒光掃描測(cè)定，激發(fā)波長366nm，測(cè)量對(duì)照品熒光強(qiáng)度積分值，計(jì)算回歸方程Y=18611.9X 6274.9，r=0.9995；線性范圍為0.06～0.30μg。 2.供試品含量測(cè)定 精密吸取供試品溶液1～2μL(供試品點(diǎn)樣量在0.06～0.12μg之間)，對(duì)照品溶液1μL與2μL，分別交叉點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑硅膠GF254薄層板上，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法展開，掃描測(cè)定，按外標(biāo)二點(diǎn)法計(jì)算鹽酸小檗堿含量。 注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。 |
參考文獻(xiàn)： |
韓桂茹，徐韌柳，趙曉春，芎菊上清丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2002，18(2)：88～90 |
