黃連上清丸—梔子甙的測(cè)定—高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定黃連上清丸中梔子甙的含量。

本方法適用于中成藥黃連上清丸。

將供試品加水超聲提取，加水定容，過(guò)濾，續(xù)濾液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，收集乙醇洗脫液，進(jìn)入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)240nm處檢測(cè)黃芩甙吸收值，以外標(biāo)法計(jì)算含量。

1. 甲醇（色譜純)

2. 乙腈（色譜純)

3. 0.1%磷酸水溶液

4. 乙醇

1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

Spherrisorb C₁₈ 柱 (300 × 4.6mm，5µm)，理論板數(shù)按梔子甙峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：甲醇 乙腈 0.1%磷酸水溶液 = 25 7 70

2.2 流速：0.6mL/min

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm

2.4 柱溫：30℃

1. 稱取供試品

精密稱取本品粉末2g。

2. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取桅子甙對(duì)照品8.4mg，置10mL量瓶?jī)?nèi)，加甲醇溶解至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液125µL、250µL、0.5mL、1.0mL、1.5mL，至10mL量瓶?jī)?nèi)，并加甲醇至刻度，搖勻，作為繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.供試品溶液的制備

將供試品置100mL量瓶?jī)?nèi)，加水90mL，浸泡1h。置超聲器內(nèi)超聲提取20min，取出。加水至刻度，過(guò)濾。棄去初濾液，取續(xù)濾液50.0mL，置已處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱內(nèi)(1.2 × 10cm)，以2mL/min的流速緩慢通過(guò)樹(shù)脂柱。繼以水洗至流出液無(wú)色(40mL/min)，再以50％乙醇100mL洗脫(2mL/min)。收集乙醇洗脫液于100mL量瓶?jī)?nèi)并稀釋至刻度，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液10µL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)240nm處測(cè)定梔子甙的吸收值，以梔子甙進(jìn)樣量對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。

2. 供試品的測(cè)定

精密吸取供試品液10µL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)240nm處測(cè)定梔子甙的吸收值，用外標(biāo)法計(jì)算出其含量。

李麗. HPLC法測(cè)定黃連上清丸中梔子甙的含量. 中成藥，2000，22(2)：133-134.