黃連上清丸—大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的測定—高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測定黃連上清丸中大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量。

本方法適用于中成藥黃連上清丸。

將供試品置索氏提取器內(nèi)，加氯仿浸泡提取，提取液以氫氧化鈉水溶液洗至無色，合并洗滌液作為供試品液。精密吸取對照品溶液和供試品液，分別注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的吸收值，以外標(biāo)法計算含量。

1. 乙腈（色譜純)

2. 0.5%氫氧化鈉水溶液

3. 0.1%磷酸水溶液

4.氯仿

1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

Spherrisorb C₁₈ 柱 (300 × 4.6mm，5µm)。

1.3 紫外吸收檢測器

1.4 索氏提取器

2 色譜條件

2.1 流動相：乙腈 0.1%磷酸水溶液 = 90 10

2.2 流速：0.6mL/min

2.3 檢測波長：254nm

2.4 柱溫：45℃

1. 稱取供試品

精密稱取本品細粉(過五號篩-80目) 1g。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品，以氯仿溶液，制成每1mL含大黃素、大黃酚、大黃素甲醚分別為0.2mg、0.18mg、0.12mg的溶液，分別精密吸取1mL，置10 mL量瓶內(nèi)，加氯仿稀釋至刻度，作為對照品溶液。

3. 供試品溶液的制備

將供試品置索氏提取器內(nèi)，加氯仿浸泡過夜，提取8h，提取液以0.5％氫氧化鈉水溶液100 mL分次洗滌，至洗滌液無色，并合并至100 mL量瓶內(nèi)，定容，作為供試品液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密吸取上述對照品液4、6、8、10、12µL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處分別測定大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的吸收值，以對照品溶液進樣量對峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行線性回歸，得到回歸方程。

2. 供試品測定

精密吸取對照品溶液4µL、12µL，供試品液10µL，分別注入液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處測定大黃酚的吸收值，以外標(biāo)法計算出其含量。

姚仲青. HPLC同時測定黃連上清丸中大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量.中草藥，2001，22(8)：699-700.