注射用三磷酸腺苷二鈉－三磷酸腺苷二鈉－高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測定注射用三磷酸腺苷二鈉中三磷酸腺苷二鈉的含量。

本方法適用于注射用三磷酸腺苷二鈉。

供試品經(jīng)流動相稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長259nm處檢測三磷酸腺苷二鈉的峰面積，計算出其含量。

1. 甲醇

2. 0.2mol/L磷酸鹽緩沖液

取磷酸氫二鈉35.8g、磷酸二氫鉀13.6g，加水900mL溶解，用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，加入四丁基溴化銨1.61g，加水至1000mL，搖勻。

3. 1mol/L氫氧化鈉

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按三磷酸腺苷二鈉峰計算應(yīng)不低于1500。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：0.2mol/L磷酸鹽緩沖液 甲醇=95 5

2.2 檢測波長：259nm

2.3 柱溫：35℃

1. 0.2mol/L磷酸鹽緩沖液

取磷酸氫二鈉35.8g、磷酸二氫鉀13.6g，加水900mL溶解，用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，加入四丁基溴化銨1.61g，加水至1000mL，搖勻。

2. 1mol/L氫氧化鈉

取氫氧化鈉適量，加水振搖使溶解成飽和溶液，冷卻后，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數(shù)日，澄清后備用。取澄清的氫氧化鈉飽和溶液56mL，加新沸過的冷水使成1000mL，搖勻。

3. 對照品溶液的制備

精密稱取三磷酸腺苷二鈉對照品適量，用流動相溶解并定量稀釋制成每1mL約含0.4mg的溶液，即為對照品溶液。

4.供試品溶液的制備

精密量取供試品適量，用流動相稀釋制成每1mL中約含三磷酸腺苷二鈉4mg的溶液，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應(yīng)符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長259nm處測定，記錄色譜圖峰面積，出峰次序依次為一磷酸腺苷鈉、二磷酸腺苷二鈉與三磷酸腺苷二鈉。