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1 資料與方法
1.1 一般資料 2007年4月至2008年1月在山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院住院的HSP患兒44例，男24例，女20例， 5～13歲，均符合《實(shí)用兒科學(xué)》第七版HSP的診斷標(biāo)準(zhǔn)。急性期44例均有皮膚紫癜，其中初次發(fā)作40例，2次發(fā)作4例(初次發(fā)病恢復(fù)后1個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)2例，2個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)1例，1年內(nèi)復(fù)發(fā)1例);緩解期40例(其余4例拒絕抽血)，為患兒臨床癥狀(皮膚紫癜、腹痛、關(guān)節(jié)痛)消失2周之后;所有患兒入院前2周內(nèi)未使用過激素、抗凝劑及止血?jiǎng)┑人幬�，并排除血液、肝臟及心臟疾病�；純鹤≡浩陂g每周化驗(yàn)?zāi)虺Ｒ?guī)2次，出院后每周化驗(yàn)1次，隨訪6個(gè)月。按中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)組小兒腎小球疾病的臨床分類、診斷及治療標(biāo)準(zhǔn)[5]，根據(jù)在HSP病程中(均在6個(gè)月內(nèi))是否出現(xiàn)血尿和/或蛋白尿，將HSP患兒分為腎臟受累組與非腎臟受累組。腎臟受累組：出現(xiàn)血尿和/或蛋白尿，并排除其他原因?qū)е卵蚣暗鞍啄虻哪I臟疾病;非腎臟受累組：HSP發(fā)病6個(gè)月化驗(yàn)?zāi)虺Ｒ?guī)正常。健康對(duì)照組18例，為同期在山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院查體中心健康查體兒童，男10例，女8例，4～12歲，中位年齡7.86歲，既往無血液、肝臟、腎臟及心臟疾病。
1.2 儀器與試劑 流式細(xì)胞儀由德國(guó)PAROPARPEC公司生產(chǎn);酶標(biāo)儀為澳大利亞anthos2010型; PECD61、FITCCD41a 、FITCCD62P等單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)BD公司;vWF檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司。
1.3 標(biāo)本采集 所有受檢者晨起抽靜脈血，分別置于含有1/10體積0.109?mmol/L枸櫞酸鈉抗凝液的2個(gè)試管中，充分混勻，30?min內(nèi)送檢。其中1管全血用于測(cè)定CD41a/CD61及CD62P;另1管用于測(cè)定vWF。所有標(biāo)本以3?000?r/min(離心半徑10?cm)離心10?min，取血漿置-40?℃冰箱保存，2周內(nèi)檢測(cè)。
1.4 檢測(cè)方法 將熒光標(biāo)記單克隆抗體PECD61分別加入3組試管中，各10?μL，第1組試管加入全血5?μL，第2、3組試管先分別加入FITCCD41a、FITCCD62P各10?μL，然后分別加入全血5?μL;振蕩器混勻， 在25?℃室溫避光孵育20?min后，加預(yù)冷的1%多聚甲醛1?mL震蕩混勻，置于4?℃冰箱避光孵育20?min，然后利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。上機(jī)時(shí)首先用第1組試管根據(jù)前向角和側(cè)向角光散射信號(hào)設(shè)定血小板門，然后通過CD61標(biāo)記進(jìn)一步確認(rèn)設(shè)門內(nèi)血小板在95%以上。測(cè)定方法嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行。vWF的檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法，檢測(cè)前標(biāo)本置37?℃水浴中迅速溶化，然后按試劑盒說明書進(jìn)行操作。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行，計(jì)量資料用±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站m.f1411.cn。
2 結(jié) 果
2.1 HSP患兒CD41a/CD61、CD62P及vWF的水平 見表1。 HSP患兒急性期CD41a/CD61、 CD62P、 vWF水平均高于健康對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01); 治療后患兒皮疹、 腹痛、 關(guān)節(jié)痛消失， 進(jìn)入緩解期時(shí)三者水平均下降， 急性期與緩解期比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)�；純壕徑馄贑D41a/CD61、CD62P及vWF水平雖然略高于健康對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)。表1 HSP患兒急性期、緩解期及對(duì)照組CD41a/CD61、CD62P、vWF水平的比較
