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1 材料與方法
1.1 實驗動物 健康雄性Wistar大鼠14只，平均體重(25±20)g，購自鄭州大學實驗動物中心。自由飲水、進食，室溫25.2 ℃，分籠飼養(yǎng)。
1.2 動物模型的制備 大鼠于術前12 h禁食，自由飲水。采用文獻方法制作大鼠肢體缺血再灌注模型，沿大鼠雙后肢根部用止血帶結扎，完全阻斷血流;阻斷4 h后松解止血帶，恢復雙后肢血流。自大鼠腹主動脈放血處死動物，血液用做檢測血液流變學指標及血漿P選擇素和細胞間粘附分子1(intracellular adhension molecule1, ICAM1)濃度。
1.3 動物分組 實驗大鼠14只，隨機分為2組，阿加曲班組和對照組，每組7只。阿加曲班組缺血4 h，于再灌注前30 min給予阿加曲班5 mg/kg 腹腔注射。對照組大鼠單純肢體缺血4 h后再灌注，再灌注前30 min給予等量0.9%氯化鈉溶液，腹腔內注射。2組動物均于再灌注2 h后采血觀察指標。
1.4 血液流變學指標測定 應用SA6000全自動血流變檢測儀測定血漿粘度(ηp)、全血低切還原粘度(Lηre,1/s)、全血高切還原粘度(Hηre, 200/s)、紅細胞比容(Hct)、紅細胞聚集指數(shù)(EAI)、血沉方程K值(ESRK)、紅細胞剛性指數(shù)(TK)、紅細胞變形指數(shù)(EDI)。
1.5 ELISA法測定血漿P選擇素、ICAM1濃度 血標本均置于含抗凝劑EDTA的試管中，3 000 r/min離心15 min，-70℃冰箱內保存。樣本統(tǒng)一測定，嚴格按照試劑盒說明操作。ELISA試劑盒購自天津灝洋生物制品公司。
1.6 統(tǒng)計學分析 應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s表示，采用t檢驗，P<0.05為差異無統(tǒng)計學意義。
2 結果
2.1 2組血液流變學指標比較 阿加曲班組ηp、Hηre、Lηre、EAI和TK顯著低于對照組(P<0.05)，EDI高于對照組(P<0.05)，2組Hct和ESRK差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。表3 2組血液流變學指標比較注：與對照組比較，^P<0.05
2.2 2組血漿P選擇素濃度和ICAM1濃度比較 阿加曲班組血漿P選擇素和ICAM1濃度低于對照組(P<0.05)。見表4。表4 2組血漿P選擇素濃度和ICAM1濃度比較注：與對照組比較,^P<0.01
3 討論
缺血再灌注損傷的發(fā)生機制錯綜復雜，活性氧代謝產物、鈣超載、微循環(huán)障礙、血液流變性改變和凝血酶的激活等是導致該損傷的主要機制[5] 。在缺血再灌注時，機體的凝血活性增強主要是由于內皮細胞的直接損傷和各種細胞因子促進內皮細胞表達各種粘附分子，例如E選擇素、P選擇素和ICAM1[6];內皮損傷使內皮下的組織因子入血，另一方面，單核細胞和內皮細胞生成組織因子增加[7]。粘附分子和組織因子分別從內源性途徑和外源性途徑激活了凝血系統(tǒng)，其后果是使纖維蛋白原轉變?yōu)槔w維蛋白，甚至導致微循環(huán)中廣泛的微血栓形成醫(yī).學全.在.線網(wǎng)站m.f1411.cn。
微血栓的形成會增加血粘度，堵塞微血管，進一步加重微循環(huán)障礙和血液流變性異常。更重要的是，凝血過程會通過多種炎癥發(fā)展，比如活化因子Ⅹ(FⅩa)可以誘導內皮細胞表達細胞因子和粘附分子[8]。更能把凝血過程和炎癥過程緊密地聯(lián)系在一起的是凝血酶(因子Ⅱa)，體外試驗顯示它能誘導單核細胞和中性粒細胞趨化[9]，誘導內皮細胞表達粘附分子，誘導中性粒細胞粘附[10]。凝血酶還能強力激活血小板，并促進血小板介導的中性粒細胞和內皮細胞之間的粘附[11]。體內體外試驗均表明，F(xiàn)Ⅹa和凝血酶還能促進中性粒細胞和內皮細胞等細胞表達細胞因子[12]。
微循環(huán)障礙、血液流變性改變和凝血系統(tǒng)的激活，三者互為因果，相互影響，從而形成惡性循環(huán)，導致微循環(huán)缺血、瘀血、無復流，直接影響組織、器官的血液灌注和代謝，加重缺血再灌注損傷。
阿加曲班是化學合成的低分子藥物,直接與凝血酶的催化活性位點結合,滅活凝血酶。由于阿加曲班分子量小,它能進入到血栓內部,直接滅活已經(jīng)與纖維蛋白結合的凝血酶。其作用特點為: (1)直接滅活凝血酶(因子Ⅱa)的活性[13],其作用不依賴于抗凝血酶; (2)不但滅活液相凝血酶,還能夠滅活與纖維蛋白血栓結合了的凝血酶; (3)阻斷凝血瀑布的正反饋,間接抑制凝血酶的產生; (4)治療劑量下對血小板功能無影響,不導致血小板減少癥;(5)具有良好的劑量-反應關系,效果和安全性可以預測;(6)與活化部分凝血活酶時間(APTT)或者活化凝血時間(ACT)相關性良好。阿加曲班可通過抑制凝血酶催化或介導的反應并且激活天然的抗凝劑蛋白C從而發(fā)揮其藥理學作用[14]。阿加曲班在體外就能降低血粘度，并且呈現(xiàn)S曲線，有劑量依賴效應[15]。
