實(shí)驗(yàn)十五 結(jié)核分枝桿菌
結(jié)核分枝桿菌(結(jié)核桿菌，M. tuberculosis)是分枝桿菌屬(Mycobacterium)中的主要病原菌。目前，已知對(duì)人類有致病性的有人型、牛型和非洲型結(jié)核桿菌。本菌菌體細(xì)長(zhǎng)或略帶彎曲，有分枝生長(zhǎng)的趨勢(shì)。一般不易著色。一旦著色，能抵抗鹽酸酒精的脫m.f1411.cn/jianyan/色作用。專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求高，而且生長(zhǎng)緩慢，在特殊培養(yǎng)基上培養(yǎng)10～20d才出現(xiàn)肉眼可見的菌落。
（一)培養(yǎng)特性
【材料與方法】
1．觀察人型結(jié)核桿菌、牛型結(jié)核桿菌和恥垢桿菌在改良羅氏培養(yǎng)基斜面3～6W培養(yǎng)物的菌落形態(tài)。
2．觀察人型結(jié)核桿菌在改良蘇通半流體瓊脂培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況。
【結(jié)果】
各型結(jié)核桿菌在羅氏培養(yǎng)基上的菌落呈干燥顆粒狀。因菌型、培養(yǎng)條件以及暴露光線的程度不同，色素形成有差異，人型結(jié)核桿菌呈乳酪色，恥垢桿菌的色澤最鮮艷。菌落不透明，表面呈皺紋狀，形似花菜心。在改良蘇通培養(yǎng)基內(nèi)，人型結(jié)核桿菌呈表面菌膜生長(zhǎng)，有毒株則成索狀生長(zhǎng)。
（二)抗酸染色法(Acid-fast stain)
【原理】
結(jié)核桿菌對(duì)苯胺染料一般不易著色。若加溫或延長(zhǎng)染色時(shí)間使其著色后，再用3％鹽酸酒精處理也不易脫色，經(jīng)此法染色后，結(jié)核桿菌及其他分枝桿菌呈紅色，其他非抗酸菌和細(xì)胞雜質(zhì)等均呈藍(lán)色。
【材料與方法】
1．用竹簽挑取開放性肺結(jié)核病人晨痰標(biāo)本干酪樣小�；蚰撔圆糠�，置清潔載玻片中央，均勻涂片，干燥，固定。
2．滴加濃石炭酸復(fù)紅液于涂片上，夾住玻片，置于火焰上緩緩加熱，至有蒸汽冒出，約維持5min。切勿沸騰，亦不可使染液干涸。如有干涸的趨勢(shì)，應(yīng)補(bǔ)加染液。用流水漂去多余的染液。
3．滴加3％鹽酸酒精脫色，至涂片較厚處無顏色脫出為止，水洗。
4．滴加堿性美藍(lán)液復(fù)染1min，水洗。
5．吸干后鏡檢。
【結(jié)果】
抗酸菌染成紅色，細(xì)胞及其他細(xì)菌染成藍(lán)色。結(jié)核桿菌和麻風(fēng)桿菌經(jīng)抗酸染色后鏡檢，有各自的鑒別要點(diǎn)(表15-1)。
表15-1 結(jié)核菌與麻風(fēng)菌的鏡下鑒別要點(diǎn)
麻風(fēng)桿菌結(jié)核桿菌
排列 呈束狀或團(tuán)狀 散在
菌細(xì)胞 粗直 細(xì)長(zhǎng)、微彎曲
涂片中的數(shù)量 較多 較少
檢出標(biāo)本病變組織痰、尿、糞等
（三)結(jié)核桿菌檢驗(yàn)程序
采集尿、糞便、腦脊液、胸腹水等標(biāo)本，按下圖程序進(jìn)行檢驗(yàn)。
直接涂片抗酸染色鏡檢
抗酸染色
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熒光染色
標(biāo)本
沉淀集菌液體培養(yǎng)基生化反應(yīng)
處理 漂浮集菌 培養(yǎng) 固體培養(yǎng)基藥敏試驗(yàn)
酸堿消化
動(dòng)物醫(yī)學(xué).全在線m.f1411.cn試驗(yàn)
