RIA中放射性碘標(biāo)記

　　在RIA中，標(biāo)記抗原質(zhì)量的優(yōu)劣，直接影響測(cè)定結(jié)果，必須制備比放射性強(qiáng)、純度高的標(biāo)記抗原，并保持免疫活性不受喪失。

　　一、同位素的選擇

　　同位素有穩(wěn)定性和放射性?xún)煞N。放射性同位素可利用其衰變時(shí)放出的放射線進(jìn)行測(cè)量，這種測(cè)量較靈敏而方便，故多用放射性同位素。標(biāo)記抗原，常用的放射性同位素有³H、¹⁴C、¹³¹I和¹²⁵I等。在使用上各有其優(yōu)缺點(diǎn)，可根據(jù)所進(jìn)行的放射免疫分析的類(lèi)型特點(diǎn)，標(biāo)記物制備和供應(yīng)情況以及實(shí)驗(yàn)室設(shè)備條件等作適當(dāng)?shù)倪x擇（表8-1)。大多數(shù)抗原分子中都含有C、H等原子，所以用¹⁴C或³H標(biāo)記不改變抗原的結(jié)構(gòu)及其免疫學(xué)活性，且¹⁴C、³H半衰期長(zhǎng)，所標(biāo)記的抗原長(zhǎng)時(shí)間放置后仍可使用，這都是其優(yōu)點(diǎn)。¹⁴C或³H標(biāo)記的不足之處是操作較繁瑣，并難以獲得高比放射性的標(biāo)記物；³H及¹⁴C放出的都是弱β射線，需用較昂貴的液體閃爍計(jì)數(shù)器方能獲得較高效率的測(cè)量，且測(cè)定操作也較麻煩。但某些抗原用放射性碘標(biāo)記容易喪失免疫化學(xué)或生物學(xué)活性者，則仍以采用³H或¹⁴C標(biāo)記物為佳。

表8-1 標(biāo)記抗原常用的放射性同位素及其性質(zhì)

　　大多數(shù)抗原分子中是不含碘的,引入碘原子就改變了抗原的分子結(jié)構(gòu)，往往容易損傷抗原的免疫化學(xué)活性；且放射性碘的半衰期較短，標(biāo)記物放置后因衰變使放射性降低，因而需要經(jīng)常制備標(biāo)記物或要求能定期提供放射性碘標(biāo)記都能適用，放射性碘放出γ—射線，用一般晶體閃爍計(jì)數(shù)器就能獲得較高效率而精確的測(cè)量，測(cè)量操作也很簡(jiǎn)單。由于這些突出的優(yōu)點(diǎn)，目前在放射免疫分析中，使用放射性碘標(biāo)記物最多。

　　從應(yīng)用角度來(lái)看，¹³¹I和¹²⁵I又各有其優(yōu)缺點(diǎn)，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求、儀器的條件和放射性碘制劑的規(guī)格等條件合理選用。但相對(duì)而言，¹²⁵I有較多的優(yōu)點(diǎn)，一是半衰期適中，允許標(biāo)記化合物的商品化及貯存應(yīng)用一段時(shí)間；二是它只發(fā)射28keV能量的X射線和35keV能量的γ射線，而無(wú)β粒子，因而輻射自分解少，標(biāo)記化合物有足夠的穩(wěn)定性。放射性碘適用于放射免疫分析許多對(duì)象（包括蛋白質(zhì)、肽類(lèi)、固醇類(lèi)、核酸類(lèi)以及環(huán)型核苷酸衍生物等)的標(biāo)記，且操作簡(jiǎn)單，一般實(shí)驗(yàn)室都不難做到。

　　二、蛋白質(zhì)與多肽激素的放射性碘標(biāo)記

　　要制備高比度、高純度與免疫化學(xué)活性好的標(biāo)記物，首先要有高純度、良好免疫活性的抗原。用作放射標(biāo)記加網(wǎng)免疫分析的特異性，所以若用純度不高的抗原作標(biāo)記，則標(biāo)記后必須采取適當(dāng)?shù)牟襟E除去雜質(zhì)，以獲得高純度的標(biāo)記物。標(biāo)記對(duì)象的純化應(yīng)盡量采用溫和的方法，否則在純化操作中已受潛在性損傷的蛋白質(zhì)（這時(shí)表面上活性可能還是良好的)，再經(jīng)標(biāo)記反應(yīng)時(shí)所受的損傷，活性就會(huì)顯著降低，影響以后的放射分析結(jié)果。有了好的純抗原，還要采用適當(dāng)方法加以標(biāo)記，盡量獲取高比放射性、而又能保持良好的特異免疫化學(xué)活性的標(biāo)記物。這些都是放射免疫分析能取得高特異性和高靈敏度的關(guān)鍵問(wèn)題。

　　多肽激素與蛋白質(zhì)多用碘標(biāo)記，最常用的是¹²⁵I。碘化反應(yīng)的基本過(guò)程如下：通過(guò)氧化劑的作用，使碘化物（¹²⁵I^-)氧化成的碘分子（¹²⁵I₂)，再與多肽激素、蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸殘基發(fā)生碘化作用。所以不管采用哪一種放射性碘標(biāo)記法，標(biāo)記的化合物內(nèi)部必須有碘原子可結(jié)合的基團(tuán)，即結(jié)構(gòu)上要含有酪胺基或組織胺殘基。凡蛋白質(zhì)、肽類(lèi)等抗原，在結(jié)構(gòu)上含有上述基團(tuán)的可直接用放射性碘進(jìn)行標(biāo)記。如不含上述基團(tuán)的，放射性碘無(wú)法標(biāo)記，必須在這些化合物的結(jié)構(gòu)上連接上述基團(tuán)后才能進(jìn)行碘標(biāo)記。

　　因此影響蛋白質(zhì)、多肽碘化效率的因素，主要決定于蛋白質(zhì)、多肽分子中酪氨酸殘基的數(shù)量及它們?cè)诜肿咏Y(jié)構(gòu)中暴露的程度；此外，碘化物的用量、反應(yīng)條件（pH、溫度、反應(yīng)時(shí)間等)及所用氧化劑的性質(zhì)等也有影響。

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